免疫组化技术在制作病理组织切片中的应用价值.pdf

中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 收稿日期：2023 年 12 月 21 日 作者简介：赵小莉（1988），女，汉族，学历本科，江苏省苏州市张家港第一人民医院，初级职称，研究方向病理技术方向。-141-免疫组化技术在制作病理组织切片中的应用价值 赵小莉 江苏省苏州市张家港市第一人民医院，江苏 苏州 215600 摘要：摘要：目的 探讨免疫组化技术在制作病理组织切片中的应用价值。方法 选取采集的标本 70 例，时间 2020 年 1月2023 年 2 月，所分对照组（35 例）传统方法制作，观察组（35 例）免疫组化技术，对比效果。结果 观察组病理组织切片的制作优良率、检测的确诊率，相比对照组有统计学意义（P0.05)。1.2 方法 1.2.1 对照组 对照组使用常规方法制备病理学组织切片。对标本须在离体后的 30min 内进行处理，将要检查的组织样本放入固定液或低温盒中，在中性缓冲甲醛溶液中，使用 10%浓度固定样品，固定时间控制在 824h 之间。对于固定后的样本，利用热量作用的理论，实施抗原修复。该方法能对抗原进行有效的引导。在进行修复的过程中，需要注意温度、修复液的 pH 值和修复时间等因素，分别控制在 100以上，7.58.5 范围内，315min 内。抗原修复完成之后，需要严格按着操作要求，常规制作标本病理组织切片，脱蜡时间需要合理的控制，一定要确保充足，且在进行各类试剂的使用当中，需要合理控制添加的剂量，在使用方面，各类试剂应比组织切片面积多出 0.050.35 cm，从而可对边缘效应进行规避。1.2.2 观察组 观察组采用免疫组化技术。首先，对脱蜡片进行正常的处理。将组织样本放置在浓度为 3%的过氧化氢中，常温浸泡 20min，然后用磷酸盐缓冲液清洗，每次进行 5min 的清洗，总共清洗 3 次。接下来，在烧杯（1000mL）中加入 700ml 柠檬酸缓冲液，加热至煮沸。随后，将切片标有人表皮生长因子受体 2、Ki-6、P16等的标签，继续升温处理溶液，15min 后向各切片加入一抗滴，并置于雪柜中过夜孵育。最后，用磷酸缓冲剂清洗切片，需要实施三次，每次冲洗 5min；二抗的使用，需要在室温条件下进行，将其滴加在组织切片上，实施孵育，控制时长在 15min，随后需要继续对组 中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生-142-表 1 比较两组病理组织切片的制作质量n（%）组别 例数 优质片 良质片 差质片 制片优良率 对照组 35 13（37.14）15（42.86）7（20.00）28（80.00）观察组 35 20（57.14）14（40.00）1（2.86）34（97.14）x2 5.081 P 0.024 表 2 比较两组制片的确诊率n（%）组别 例数 未确诊 未确诊率 确诊 确诊率 对照组 35 10 28.57 25 71.43 观察组 35 2 5.71 33 94.29 x2 6.437 P 0.011 织切片进行三次冲洗，使用的冲洗液、每次冲洗的时间均与之前相同；组织切片接下来需要进行显色处理，将其放置在显色剂内，显色操作时间为 510 min，之后需要利用苏木精，对组织切片进行染色、水洗操作，完成后，需对组织切片进行封固，这一操作需借助脱水透明中型树胶进行处理。1.3 指标观察（1）对两种制片效果进行评价，病理组织切片经显微镜进行观察，主要分为三个等级，其中优质片（清晰显示，组织结构完整，色彩较鲜亮，薄厚适中，没有裂痕损害，优质清楚的细胞形态，便于获取信息），良质片（显示较清晰，组织结构没有损坏，在其中分布较少褶皱，没有污染，未检出活气泡，色彩呈较鲜亮，无非特异性脱片，易观察组），差质片（编号欠清晰，颜色欠鲜明，存在组织结构损害，有较多气泡、褶皱，难以显著获取信息）。（2）对两组制片的确诊情况进行统计。1.4 统计学分析 经 SPSS 21.0 处理数据。2 结果 2.1 对比两组制片效果 观察组的病理组织切片的制片效果更优（P0.05），见表 1。2.2 对比两组病理组织切片的确诊情况 观察组的确诊率更高（P0.05），见表 2。3 讨论 近年来，免疫组织化学技术在临床病理学检查中得以广泛应用，这得益于新抗体的不断涌现。该技术在判断肿瘤性质、分期、细胞属性、转移瘤起始位置以及“未分化”恶性肿块方面具有重要意义3。免疫组化病理技术是一种常见的检查手段，它通过酶和底物的作用，促进着色反应物的形成，定位组织或细胞内的抗原，具有高精度的定位能力4，并且样本具备长时间保存条件，操作步骤相对简单。在筛选过程中，确保易于检测并能通过光学或电子显微镜进行观察是必要的。为了实现有效的定位条件，酶的反应物需要具备强大的分散能力5。在病理学检测过程中，如果组织脱水或样本固定时间不符合标准，很容易对样品的含量产生干扰，导致切片质量下降，从而增加临床诊断的困难。然而，在免疫组化研究中，由于具有特定的染色环境和酶多聚体与两种抗体高效偶联的能力，为多肽的合成提供了良好的条件6。此外，单抗还能有效提高核酸检测的灵敏度，并且在高分子材料中不存在链霉菌类抗菌蛋白的生成和背景污染，从而大大提高了制备效率。本研究示，观察组优质片占比 57.14%，良质片占比 40.00%，而差质片则为 2.86%，优良率 97.14%；对照组优质片（37.14%）、良质片（42.86%）、差质片（20.00%）、优良率 80.00%，相比两组（x2为 5.081，P 为 0.024）差异明显（P0.05）；在病理组织切片检测的确诊率方面，观察组确诊 33 例，占比 94.29%，而对照组确诊 25 例，占比为 71.43%，比较（x2为 6.437，P 为 0.011）差异较大（P0.05）。可以说，相较于传统的病理组织切片制作技术，免疫组化技术的制片质量更高，能够提高诊断的准确性。这是因为在制片过程中，免疫组化技术要求严格监控质量，从而为病理学检验提供了必要的协助。这表明，在病理组织切片制作过程中，应用免疫组化病理技术能够改善质量管理效果，进一步提高制片的效率，并为病理检验的准确性打下坚实的基础。中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生-143-目前，在进行病理组织切片制作的过程中，仍存在取材问题、新鲜组织标本处理问题、染色问题等。首先，取材是制作病变组织切片的关键步骤，常常会面临病变组织选择不当、坏死或变形、厚度不均匀以及体积不合适等问题，这些问题都会对切片的质量产生一定的影响7。另外，对病变组织部位的描述不准确、记录不一致等也会对切片的质量造成影响。因此，在进行取材时，需要科学方法确定组织标本的体积，并在采集完材料后迅速进行处理，避免保存不当导致样品污染，从而对切片质量产生不利影响。同时，在记录时，应清楚描述样品的具体情况，并避免对样品造成污染。其次，注重对新鲜组织标本的固定处理后，这样才能维持细胞原本的固有形态，防止自溶现象8。为了保持细胞的原始形态，必须在一定的时间内将标本保存起来，以规避组织的自溶。因此，分离出来的标本应该尽快放入一个固定的溶液中，以确保它们的稳定性。一般而言，小型标本需要 4-6 小时，大型标本需要 18-24 小时。选择合适的染料对染色结果有很大的影响，因此在制作组织标本时，应根据实际需要选择适当的染料，如二甲苯和透明酒精，并及时更换。同时要注意苏木精的显色性，以确保切片的质量。在切除组织样本后，为了使样本充分固定，必须迅速将其放入静止溶液中。在进行脱水、浸蜡、包埋和切片时，应根据具体条件选择合适的药剂，提高对组织标本的处理效率，保证病理学组织制片的质量。最后，加强染色质控。在进行病变组织切片染色时，需特别关注工作流程，以确保染色结果的准确性，避免出现“无色片”或“假阳片”的情况9。为了确保上色效果的准确性和对病变部位的染色效果，需要采取一系列的措施。首先，在进行抗原正、负对照实验时，我们应该严格监控切片的着色时间。这是因为着色时间过短可能导致染色不充分，反之则可能导致染色过度，影响结果的准确性。因此，我们需要根据实验需求和之前的实验结果，确定适宜的着色时间范围，并进行严格控制。此外，在进行实验操作时，我们也需要按照规范的操作规程进行操作，以确保标本的质量。这包括从标本的处理、固定、切片、染色等各个环节，都需要严格遵循操作规程。只有确保每个步骤都正确无误，才能保证实验结果的准确性和可靠性。除了操作规程的严格遵守，还要确保标本未被污染，以保证标本的品质。在实验室环境中，存在着各种潜在的污染源，如灰尘、细菌等。因此，在标本处理和操作过程中，我们需要注意保持实验台面的清洁，使用干净的工具和试剂，以避免污染标本。对病理学切片的制作过程进行质控，可有效提高制作品质，进而在病理学和临床上得到更广泛应用。显色过程是一种酶催化的过程，它能够与过氧化物酶等结合，形成有色的配合物，并在细胞和组织的抗原之间发生沉积10。然而，由于癌症的种类繁多，不同样本之间存在显著差异，导致抗原含量和颜色的变化也不一样。因此，进行免疫组织化学染色时应注意以下几点：确保组织块始终保持水分；适当控制培养箱中的蒸馏水量；优先使用单克隆抗体；为避免抗体液进入组织引发虚假阴性，需将培养箱放平，以确保抗体液分布均匀。综上所述，制作病理切片时，免疫组化技术，能够提高切片的质量，可为治疗方法的制定打下良好的基础，值得推广。参考文献 1李颖珠.免疫组化技术在病理诊断中的临床价值J.智慧健康,2023,9(7):15-18.2马改玲.质量控制对免疫组化病理技术制片质量的影响J.临床研究,2022,30(5):5-8.3梁天莲.免疫组化技术在制作病理组织切片中的应用价值分析J.中国社区医师,2021,37(18):109-110.4孙雯雯,吴开祥,李小龙.实用免疫组化组织微阵列对照体系的构建及其蜡块 切片的制作方法J.泰山医学院学报,2021,42(3):221-224.5吉莉莉.质量控制对免疫组化病理技术制片质量的影响J.中国卫生标准管理,2021,12(6):66-68.6刘甜,刘嘉敏,陈意.细胞蜡块结合免疫组织化学 分子病理在胸腔积液病理诊断中的应用J.诊断病理学杂志,2021,28(2):152-154.7魏来.胸腹水细胞块切片结合免疫组化在病理诊断中的应用价值J.中国现代药物应用,2020,14(24):94-96.8 王 利,孔 德 元,王 金 环.免 疫 组 化 在 肝 脏 穿 刺 组 织 病 理 诊 断 中 的 价 值 分 析 J.青 海 医 药 杂中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生-144-志,2020,50(12):57-59.9 张 倩,马 海 英,李 晓 芳.细 胞 块 切 片 联 合 免 疫 组 化 对 胸 腔 积 液 诊 断 价 值 分 析 J.社 区 医 学 杂志,2020,18(20):1400-1403.10 李 家 梁,孔 继 光.免 疫 组 化 技 术 在 制 作 病 理 组 织 切 片 中 的 应 用 价 值 分 析 J.中 国 实 用 医药,2020,15(11):195-197.