章分子生物学的研究方法基因定点诱变省公共课一等奖全国赛课获奖课件.pptx

西北师范大学西北师范大学 第五章第五章 分子生物学研究的主要方法分子生物学研究的主要方法-生命科学院生命科学院第四节第四节 基因定点诱变基因定点诱变2.4.1 盒式诱变盒式诱变利用一段人工合成含有突变序列寡核苷酸片段取代野生型基因中对应序列.返回目录返回第二章第1页西北师范大学西北师范大学 第五章第五章 分子生物学研究的主要方法分子生物学研究的主要方法-生命科学院生命科学院2.4.2 寡核苷酸引物诱变寡核苷酸引物诱变使用化学合成含有突变碱基寡核苷酸片段作引物,开启单链DNA分子进行复制，随即这段寡核苷酸引物便成为了新合成DNA子链一个组成部分。第2页西北师范大学西北师范大学 第五章第五章 分子生物学研究的主要方法分子生物学研究的主要方法-生命科学院生命科学院寡核苷酸引物诱变过程寡核苷酸引物诱变过程p正链DNA合成p突变引物合成p异源双链DNA分子制备p闭环异源双链DNA分子富集p转化p突变体筛选寡核苷酸引物诱变法不足寡核苷酸引物诱变法不足n异源双链DNA分子并非真正异源n突变体子代中突变碱基被错配修复体系修复第3页西北师范大学西北师范大学 第五章第五章 分子生物学研究的主要方法分子生物学研究的主要方法-生命科学院生命科学院提升寡核苷酸引物诱变突变效率方法提升寡核苷酸引物诱变突变效率方法(1)Kunkel 定点诱变法定点诱变法:1985年由T.A.Kunkel创造(2)ung:尿嘧啶脱糖苷酶尿嘧啶脱糖苷酶第4页西北师范大学西北师范大学 第五章第五章 分子生物学研究的主要方法分子生物学研究的主要方法-生命科学院生命科学院(2)硫代磷酸诱变法硫代磷酸诱变法:已知有些限制酶不能切割硫代磷酸DNA分子在异源双链DNA分子制备时，加入硫代核苷酸，使之掺入突变链中然后用前述酶切割，并用外切酶局部消化后，进行聚合反应，从而产生含有定点突变异源双链DNA第5页西北师范大学西北师范大学 第五章第五章 分子生物学研究的主要方法分子生物学研究的主要方法-生命科学院生命科学院2.4.诱变诱变(1)重组PCR定点诱变:克服寡核苷酸引寡核苷酸引物诱变能力仅限于物诱变能力仅限于5端端.特点特点:经经3轮轮PCR反反应应,一对互补带有突一对互补带有突变碱基内侧引物和变碱基内侧引物和2个外侧引物个外侧引物第6页西北师范大学西北师范大学 第五章第五章 分子生物学研究的主要方法分子生物学研究的主要方法-生命科学院生命科学院(2)大引物诱变大引物诱变:关键是第一轮PCR产物为第二轮PCR引物第7页西北师范大学西北师范大学 第五章第五章 分子生物学研究的主要方法分子生物学研究的主要方法-生命科学院生命科学院返回目录返回第二章第8页