葡萄球菌属的常规鉴定标准操作程序.doc

第三人民检验科 微生物室作业指导书
文件编号：WSW-SOP-07
版本/修订号：第一版
主题内容
葡萄球菌属常规鉴定标准操作程序
生效日期：20140701
第 4 页 共4 页

葡萄球菌属的常规鉴定标准操作程序
1 概述
葡萄球菌属是一类触媒试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌，表面葡萄球菌、腐生葡萄球菌等32个种。是临床最常见的化脓性球菌，广泛分布于自然界中，在人体表面鼻、咽、肠道也经常存在.
2 形态与染色
革兰阳性球菌，直径0.4～1。2µ m成单、双、短链或不规则状排列。在液体培养基浓汁标本中，往往排列成双或短链状多数有鞭毛。
3 培养特性
金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上典型菌落为金黄色，周围有明显的透明(β)溶血环，部分菌落呈橙色，在高盐甘露醇平板上呈橙色菌落。表皮葡萄球菌等其他葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色，不溶血。
4 生化反应
触酶试验阳性，多数能分解葡萄糖、麦蚜糖、蔗糖和甘露醇。不分解棉籽糖和水杨苷，液化明胶，血浆凝固酶和DNA酶实验分阳性。
5 鉴别要点
5。1 本菌属特征：触酶实验阳性,革兰阳性球菌,葡萄状排列，菌落中等大小，中等干燥。
5.2 与微球菌属的鉴别：触酶实验都为阳性，但O∕F试验葡萄球菌属为发酵型，而微球菌为氧化型或无反应，而且菌体较葡萄菌属更大，排列呈四联状为主。
5。3 与链球菌属的鉴别：葡萄球菌属触酶试验都为阳性,而链球菌为阴性，O∕F试验葡萄球菌属为发酵型而链球菌为氧化型。
5.4 凝固酶阳性葡萄球菌的鉴别见下表。
结合型凝 游离型凝 鸟氨酸脱
菌名 PYP试验 DNA试验 VP试验
固酶试验 固酶试验 羧酶实验
金黄色葡萄球菌 + + — + + —
中间型葡萄球菌 — + + + — -
施氏葡萄球菌 + — + + + —
路邓葡萄球菌 + — + — + +
注：“+”为90%以上菌株为阳性,“—-”为90％以上菌株为阳性。
5.5 凝固酶阳性葡萄球菌的鉴别见下表
吡咯烷酮芳基 新生霉素耐药 多黏菌素B耐
菌名 凝固因子 脲酶 甘露醇 蔗糖
酰胺酶（PYR） （5βg） 药300U纸片
表面葡萄球菌 — — + - + - +
腐生葡萄球菌 - — + V + + —
溶血葡萄球菌 + — — V + — —
人型葡萄球菌 - — + - + — —
华纳葡萄球菌 — — + V + - -
模仿葡萄球菌 + — + + + — —
头状葡萄球菌 — — V + + — —
耳葡萄球菌 V — — — V - -
施氏葡萄球菌 + + — - — — —
路邓葡萄球菌 + V V — + — V

注：“+”为90％以上菌株为阳性，“—”为90%以上菌株为阴性。
6 细菌鉴定与药物敏感试验
6。1 取平板上菌落直接涂片、革兰染色并镜检，葡萄球菌为革兰阳性球菌。呈单个、成双或葡萄状排列,菌体呈圆形。
6。2 在血琼脂平板上，成圆形、凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润德不透明菌落，可产生脂溶性色素,在血琼脂平板上部分葡萄球菌表现为β溶血。
6。3 触酶试验（3％过氧化氢试验）阳性。发酵葡萄糖产酸。
6.4 血浆凝固酶试验（用混合德人血浆）。
6。4。1 试管法：检测分泌型凝固酶：取1:4枸橼酸钠抗凝血浆0.5ml,加入3~5个菌落，35℃培养箱4～6小时,观察血浆有无凝固发生，凝固者为阳性，若阴性，继续观察到24小时，不凝固者为阴性，试验应同时作阴性、阳性对照。
6.4。2 玻片法：检测结合凝固酶，但要注意假阳性和假阴性的出现.
6.5 取纯化后的单个菌落,用Vitek2系统GPS药敏卡进行细菌鉴定和药敏试验，如有必要加入做补充试验。
6。6 耐苯唑西林的金黄色葡萄球菌为MRSA，耐苯唑西林的凝固酶阴性葡萄球菌为MRSCN。也可选头报西丁来检测MRSA和MRSCN.
7 检验结果分析与报告
金黄色葡萄球菌在任何标本中分离出都要及时鉴定报告，输液管、人工植入组织分离的表皮葡萄球菌和尿液中的腐生葡萄球菌视为病原菌；凝固酶阴性感染鉴定到种；注意MRS的报告。根据NCCLS标准，如果该菌β-内酰胺酶阳性,则应报告该菌对所有的青霉素类、大多数一代头孢菌素耐药，治疗时建议临床医师选择含酶抑制的复合抗生素或对该酶稳定的药物；如该菌MRS阳性，则应报告该菌对所有β-内酰胺酶类抗生素(包括含抑酶剂复合剂)耐药，要注意其他药物的多重耐药性.
8 临床意义
葡萄球菌属在自然界分布很广，大部分无致病性。金黄色葡萄球菌是最重要的治病性葡萄球菌,以金黄色葡萄球菌代表的致病性葡萄球菌寄人类化脓性感染中最重要的病原菌,能引起多组织、多系统尤其是深部组织的化脓性感染,另外还可以引起心内膜炎、败血症等全身感染，现在临床中凝固酶阴性的葡萄球菌感染上升，是医院感染的重要病原菌，另外MRSA和MRSCN感染也呈上升趋势，是医院感染的主要问题，应该足够重视。