DB32／T+4503-2023+羊人工授精技术规程.pdf

!7,!7,+,0).羊人工授精技术规程Technical code of practice for sheep/goat artificial insemination 2023-07-03 发布2023-08-03 实施CCS B 43DB32/T 45032023ICS 65.020.20DB32/T 45032023前言本文件按照 GB/T 1.12020 标准化工作导则第 1 部分：标准文件的结构和起草规则 的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由江苏省农业科学院提出并归口。本文件起草单位：江苏省农业科学院。本文件主要起草人：钱勇、曹少先、王慧利、孟春花、李隐侠、丁强、张俊、钟声。DB32/T 45032023羊人工授精技术规程1 范围本文件规定了羊人工授精技术应用的场地条件、准备事项、采精、精液品质检查、精液稀释与保存、母羊发情鉴定、输精、配种记录等技术要求。本文件适用于羊的人工授精。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 205572006山羊冷冻精液NY/T 2169种羊场建设标准3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1 台羊 dummy sheep/goat采精时专供公羊爬跨的被固定的活羊或固定好的假羊。3.2 人工授精 artificial insemination人为借助专门器械，将采集的种公羊精液经检查、稀释、保存等处理合格后，输入到发情母羊生殖道内，使其妊娠的一种繁殖技术。来源：NY/T 13352022，3.14 场地条件4.1 配种羊舍4.1.1 新建羊场在规划设计时应包含配种羊舍，其他羊场也可通过改建或扩建设置配种羊舍，羊舍结构设计应符合 NY/T 2169 的规定。4.1.2 配种羊舍面积应按每 1 000 只可繁殖母羊 1 200 m2进行设计，内部空间应包括空怀母羊圈、待配母羊圈、种公羊圈、试情公羊圈和人工授精实验室、采精间（场地）、输精间（场地）等设施。4.1.3 配种舍羊圈宜采用双列或多列平面布局，走道两侧羊圈应设圈门，走道与羊床高度应持平或高差20 cm。1DB32/T 450320234.2 人工授精实验室4.2.1 建设面积一般为 10 m230 m2。4.2.2 实验室内应设置无菌间和器材洗涤消毒用的准备间。4.2.3 无菌间的门窗应可密闭，室内应安装紫外线消毒灯和空调。4.2.4 准备间应配置清洗水池、消毒和干燥设备，电源功率5 kw。4.3 采精间4.3.1 采精间应紧邻人工授精实验室，面积以 8 m210 m2为宜。4.3.2 采精间内应设置水池和采精架，地面应硬化并做防滑处理。采精架设计示意图见附录 A。4.4 输精间4.4.1 输精间宜为独立空间，可以是围栏围起来的专用场地，位置应设在待配种母羊圈的附近。4.4.2 输精间内应设置输精操作台或输精保定栏杆。5 准备事项5.1 配种公羊5.1.1 要求5.1.1.1 应符合该品种的种用标准。5.1.1.2 年龄以 1 岁5 岁为宜，体格健壮、睾丸发育良好、性欲旺盛。5.1.1.3 公羊与待配种母羊的比例可为 1 2001 400。5.1.2 调教5.1.2.1 调教时间青年公羊采精前应进行调教。调教时间宜从 8 月龄开始，刚开始每周采精 1 次，周岁后可按正常频率采精。5.1.2.2 调教方法5.1.2.2.1 开始调教时，可用体型较大的发情母羊作为台羊保定在采精架上。采精成功 3 次后，发情母羊即可换为非发情母羊或假羊。5.1.2.2.2 对于性欲不强或不会爬跨的后备公羊，可采用以下方法进行调教：在别的公羊配种时让其在旁边“观看”，刺激形成性条件反射；将发情母羊分泌物抹在公羊鼻尖上刺激性欲；将种公羊放入非育种群发情母羊群中，使其先自然交配几次，再进行采精训练；增加运动量和运动强度。5.1.3 补饲配种期间应加强配种公羊日粮营养，增喂鸡蛋、胡萝卜、复合维生素等。2DB32/T 450320235.2 试情公羊5.2.1 试情公羊应选择不参与配种、周岁以上的青年公羊，且体格健壮、性欲旺盛和无疾病的个体。5.2.2 试情公羊的数量可按配种母羊数量 1 1001 200 比例准备。5.2.3 试情公羊参与试情期间应单独饲养。5.3 配种母羊应在配种期到来之前，及时做好羔羊断奶、母羊整群、预防接种、驱虫，并进行短期优饲，母羊膘情以中等水平为宜。6 采精6.1 准备工作6.1.1 器材和物品人工授精所需的器材和物品应在配种期到来之前准备齐全，器材和物品名录见附录 B。6.1.2 器材清洗与消毒器材清洗与消毒方法见附录 C。6.2 采精操作6.2.1 假阴道安装6.2.1.1 将内胎装入外壳内，将两端露出的部分向外壳表面翻卷展平，内胎应松紧均匀、不扭曲。6.2.1.2 在安装消毒好的假阴道一端安装集精杯，从外壳中央充气孔加入 50 55 的热水至充气口处，然后在充气孔上安装好橡胶塞和充气阀（气嘴），从气嘴吹入适量空气，使假阴道采精口的一端内胎呈三角“Y”状为宜。6.2.1.3 用消毒玻璃棒蘸取少许医用凡士林均匀涂于假阴道采精口一端，深度约为内胎 1/2。6.2.1.4 把消毒过的玻璃棒式温度计插入假阴道内检测温度，温度以 40 42 为宜。6.2.2 采精6.2.2.1 采精前先用湿毛巾把公羊阴茎周围污物擦洗干净。6.2.2.2 当公羊爬跨台羊时，迅速拉开公羊，反复 2 次后再进行采精。6.2.2.3 采精时，操作人员用右手掌心握住假阴道和集精杯，气嘴方向朝下，假阴道与地面呈 3540夹角，在公羊爬跨台羊伸出阴茎时，左手迅速轻托包皮将阴茎导入假阴道内，公羊向前耸身射精后迅速将假阴道竖起，集精杯一端向下。6.2.2.4 打开气嘴放气，取下集精杯，盖上盖，在采精杯外壳上注明公羊个体编号，尽快送到检查室内，并放到 30 37 的恒温环境中，集精杯应避免阳光直射，防止污染。6.2.2.5 不宜将不同公羊的精液混合后使用。6.2.3 采精频率每只公羊以每天采精 1 次为宜，特殊情况下 1 d 内需采精 2 次的，则应间隔 1 d 后再采精。3DB32/T 450320236.2.4 采精记录应及时做好当天种公羊的采精记录，种公羊采精记录表样式见附录 D。7 精液品质检查7.1 色泽与气味正常精液应为乳白色或浅乳黄色，略带腥味，无异味。7.2 射精量可用有刻度的集精杯或注射器测定，一次射精量如0.5 mL 的，应检查公羊健康状况或调整采精频率。7.3 精子密度用于人工授精的鲜精的精子密度应6108个/mL。可采用血球计数板法或精子密度仪进行测定，精子密度仪应定期用血球计数板法进行校正。7.4 精子活力用于人工授精的鲜精的精子活力应60%。检测方法按 GB 205572006 中 A.3 的规定执行。7.5 精子畸形率用于人工授精的鲜精的精子畸形率应15%。检测方法按 GB 205572006 中 A.5 的规定执行。8 精液稀释与保存8.1 精液稀释液配制常用精液稀释液（以下简称“稀释液”）配制方法见附录 E。8.2 稀释方法8.2.1 精液和稀释液的温度应保持相同或接近，稀释过程中应避免温度大幅度反复波动。具体操作步骤如下：将配制好的稀释连瓶置于 30 37 的恒温环境中；将检查合格的精液连同玻璃容器（集精杯或试管）同样置于相同的恒温环境中；根据精子密度、活力和当天需要配种的母羊数确定稀释倍数，应保证每只羊每次输精剂量（0.1 mL0.2 mL）的有效精子数不少于 3 000 万个；稀释前用注射器先吸入少量稀释液清洗内壁，弃去后再按需要量正式吸入稀释液，稀释时应沿精液容器壁缓缓注入精液内并轻轻摇动混匀；用移液枪吸取一滴稀释后的精液，检查精子活力；将稀释后的精液放回 30 37 的恒温环境中，盖上盖子；8.2.2 精液稀释后，应尽快使用。如有分装和保存需要，应在分装瓶上注明公羊个体编号、采精时间、精子密度、活力和稀释倍数。4DB32/T 450320238.3 精液常温保存8.3.1 将稀释分装好的精液置于 20 25 下 1 h2 h 后，放入 16 18 恒温箱内避光保存；也可用8 层10 层纱布包裹严实直接放入 16 18 恒温箱内。8.3.2 保存的精液每隔 8 h12 h 摇动一次，摇动时应轻缓均匀。8.3.3 精液常温保存时间不宜超过 48h，使用前应检查精子活力，精子活力30%的不宜使用。8.4 精液低温保存8.4.1 将稀释分装好的精液用 8 层10 层纱布包裹严实，放于冰箱 4 6 保鲜层固定位置。8.4.2 保存期间应避免频繁开启冰箱门。8.4.3 精液低温保存时间不宜超过 72 h，使用前应检查精子活力，精子活力30%的不宜使用。9 母羊发情鉴定9.1 宜采用“试情公羊”法进行发情鉴定，试情时间以每天早、晚饲喂前为宜。9.2 试情时，可用试情布兜住试情公羊腹部并确保覆盖住阴茎。绵羊用试情布规格为 50 cm40 cm，山羊用试情布规格为 40 cm30 cm。9.3 试情公羊应放入母羊圈内进行试情，配有运动场设施的也可在运动场内进行试情。试情人员应认真观察，遇到母羊挤在一起时，还应进行人为驱散，以保证每只母羊均有接触试情公羊的机会。9.4 以母羊站立不动、接受爬跨为发情配种的最佳时机。9.5 被试情公羊找出的所有发情母羊可集中到配种圈进行配种。9.6 每次试情完毕，应将试情布解下，洗净晾干备用。10 输精10.1 母羊准备10.1.1 母羊保定可采用站立方式或倒立方式。每日配种母羊较多的羊场或体型较大的母羊适用站立方式保定。10.1.2 站立方式保定可在距离输精员站立地面 1m 左右的输精台上用保定架保定母羊，以使站在台下的输精员视线比母羊的输精部位高 10 cm15 cm 为宜。10.1.3 倒立方式保定可在发情母羊圈旁设置一根高度在 60 cm80 cm 可调的横杆，将母羊后肢搭在横杆上，前肢着地进行保定，1 次可保定多只母羊。10.1.4 母羊被保定在保定架上后，先用抹布蘸清水清除粪便等脏物，接着用纸巾擦干余液，再用无液滴渗出的酒精纱布块消毒，自然干燥即可。清洗时不应使用消毒剂。10.2 输精方法10.2.1 输精时由助手掀起羊尾，输精员配戴 LED 头灯，左手将用生理盐水温润过的闭合状态的开膣器沿母羊阴门的形状缓慢插入阴道后，再轻轻转动 90张开开膣器，调整头灯照射角度观察阴道内有无出血、炎症等疾病症状，确认正常后，通过调节深度和角度找到子宫颈口，并稳定住开膣器，右手将吸入精液的输精枪插入子宫颈口内约 1 cm，同时注入精液，输精完成后，右手先抽出输精枪，然后左手一边慢慢松开开膣器，一边从阴道中抽出。对于初产母羊，可采用羊用阴道内窥镜进行辅助输精。10.2.2 输精应采用一次试情两次输精的方式，两次输精应间隔 12h，即早晨试情发情的母羊当日早、晚5DB32/T 45032023各输精一次。完成两次输精的母羊即可放回圈内，如果 24 h 后母羊通过试情仍表现为发情，应进行第三次输精，但在一个发情期内，输精不超过 3 次。11 配种记录11.1 所有完成输精的母羊应及时作好配种记录，并通过分析配种记录评价配种成绩，定期检查受胎情况。配种记录表样式见附录 F。11.2 超过三个情期仍未怀孕的母羊应作为难孕羊处理。6DB32/T 45032023附录A（资料性）羊用采精架设计示意图图 A.1给出了羊用采精架设计示意图，可根据羊品种大小酌情调整。单位为毫米图 A.1羊用采精架设计示意图7DB32/T 45032023附录B（资料性）羊人工授精器材与物品表 B.1给出了羊人工授精所需器材与物品的名录。表 B.1羊人工授精器材与物品仪器设备玻璃器材常用器械生物显微镜显微镜载物台恒温板消毒柜电子天平恒温水浴箱超声波清洗机电冰箱电热高压消毒锅超纯水机盖玻片载玻片烧杯三角烧瓶容量瓶广口瓶玻璃磨砂下口瓶量筒玻璃漏斗玻璃搅拌棒温度计移液枪移液器吸头移液器支架不锈钢镊子不锈钢消毒桶不锈钢药勺手术剪试管架双目镜，带显示屏室温-50 可调上层臭氧、下层电热500 g/0.01 g带排水阀，数显温控13 cm28 cm15 cm24 L数显可调温18 L自控或蒸馏水机20 mm20 mm76 mm26 mm50 mL500 mL50 mL500 mL100 mL500 mL500 mL（茶色、无色）5 000 mL100 mL500 mL90 mm250 cm0 100 0 uL200 uL200 uL20 cm63 cm350 cm18 cm套台台台台台台台台盒盒个个个个个个个根支个包个把个个把个11111111151各 2各 2各 2各 21各 224221112221显示屏分辨率 1 024768以上数显控温家用型精液及稀释液保温器材清洗精液低温保存高压蒸汽消毒稀释液配制每盒 100片50片/盒无色为酒精棉球用蒸馏水存用1 000支/包金属输精器消毒用分类器材名称规格单位数量备注8DB32/T 45032023专用器械试剂耗材假阴道外壳假阴道内胎气嘴开膣器塑料量杯集精瓶头灯输精器75%酒精柠檬酸钠葡萄糖青、链霉素生理盐水丁腈手套2 000 mLLED、可调焦、充电式金属分析纯、500 g/瓶分析纯、500 g/瓶80万单位/瓶中号个条个把个个套支瓶瓶瓶盒1020205220210适量11各 20适量10盛装开膣器带感应控制开关表 B.1羊人工授精器材与物品（续）分类器材名称规格单位数量备注9DB32/T 45032023附录C（资料性）器材清洗与消毒方法C.1 器材清洗C.1.1 器材清洗按照“浸泡初步清洗精细清洗自来水冲洗蒸馏水过洗”流程操作，洗涤剂宜选用泡沫少、中性、易清除的产品，如家用洗洁精类。C.1.2 精细清洗过程宜用超声波清洗机来完成。C.1.3 精细清洗后器材可置于自来水龙头下反复冲洗，对于容器类器材可采用“灌入倒出”方式反复操作 5次以上，此步骤不宜采用盆洗方式。C.1.4 自来水冲洗后器材可置于两盆蒸馏水中分别过洗一次，对于直接与精液或稀释液接触的器材（如输精器、集精瓶、稀释液储存容器和载玻片等）可增加过洗次数。C.2 器材消毒C.2.1 金属、玻璃器材宜采用电热干燥箱 120 消毒 30 min。C.2.2 橡胶、尼龙、塑料等不耐高温的器材宜采用紫外线或臭氧消毒。C.2.3 纱布、毛巾等器材宜采用蒸汽消毒，消毒时间达到 30 min。C.2.4 开膣器在每次清洗擦干后，可用酒精灯火焰消毒，然后插入生理盐水杯中备用。C.2.5 输精枪在每一只母羊输精完成后，可用 75%酒精棉球从后向前擦拭消毒，后用生理盐水棉球反复擦拭，然后再给另外一只母羊输精。C.2.6 玻璃棒式温度计可用 75%酒精棉球擦拭消毒，后用生理盐水棉球反复擦拭。C.2.7 采精、输精器材不可放入水中煮沸消毒。10DB32/T 45032023附录D（资料性）种公羊采精记录表表 D.1给出了种公羊采精记录表的样式。表 D.1种公羊采精记录表公羊个体编号：品种：年龄：来源：第 页采精日期（月、日、时）原精液品质射精量mL密度亿/mL活力%稀释后精液品质稀释液（代码）稀释比例密度亿/mL活力%保存精液保存方式保存时间h活力%输精剂量mL授精母羊数量只输精员备注记录人（签字）：11DB32/T 45032023附录E（资料性）精液稀释液配制E.1 基础稀释液配制E.1.1 基础稀释液配方配方一：0.9%注射用生理盐水。配方二：葡萄糖 3.3 g，柠檬酸三钠 1.4 g，溶于 100 mL的蒸馏水中。配方三：乳糖 5.5 g，葡萄糖 3.0 g、柠檬酸三钠 1.5 g、柠檬酸 0.02 g，溶于 100 mL的蒸馏水中。基础稀释液仅用于输精时的精液稀释，不宜直接用于精液的保存。E.1.2 配制方法E.1.2.1 按配方称取试剂放入烧杯中，再用量筒量取双蒸馏水 100 mL加入其中，用磁力搅拌器或玻璃棒搅拌使其溶解。E.1.2.2 将烧杯中的溶液，用一层定性滤纸过滤溶液至三角瓶中，三角瓶口用加硫酸纸或牛皮纸盖住并用橡皮筋固定，放在盖有石棉网的电炉上加热至沸腾，迅速将其取下，冷却至常温。也可装入耐高温样品瓶用高压蒸汽灭菌。E.1.2.3 密封的基础稀释液可在低温环境下长期保存，已启用的基础稀释液可放入在 2 5 冰箱中备用，保存时间不超过 12 h。E.2 常温保存稀释液配制E.2.1 取 E.1.1 中配方三配制的基础稀释液 100 mL 放入消毒过的三角烧瓶或样品瓶内，加入青霉素和链霉素各 10万单位，充分混合均匀后备用。E.2.2 常温保存稀释液不可用于精液低温保存。E.2.3 常温保存稀释液现用现配，剩余的弃用。E.3 低温保存稀释液配制E.3.1 取 E.1.1 中配方三配制的基础稀释液 80 mL 放入消毒过的三角烧瓶或样品瓶内，加入新鲜卵黄20 mL，再加入青霉素和链霉素各 10万单位，充分混合均匀后备用。E.3.2 低温保存稀释液也可用于常温精液稀释。E.3.3 低温保存稀释液现用现配，剩余的弃用。12DB32/T 45032023附录F（资料性）母羊配种记录表表 F.1给出了母羊配种记录表的样式。表 F.1母羊配种记录表年度：品种群别：核心群繁育群后备群第 页母羊编号注：AI表示为人工授精；NM 表示为本交配种。圈号（舍-栏）第一情期配种日期（月/日）与配公羊配种方式（AI、NM）第二情期配种日期（月/日）与配公羊配种方式（AI、NM）第三情期配种日期（月/日）与配公羊配种方式（AI、NM）预产日期（年/月/日）实产日期（年/月/日）产羔登记（编号、只）畸形死胎备注记录员（签字）：13DB32/T 45032023参 考 文 献1 NY/T 13352022牛人工授精技术规程14