DB34T4340-2022法医物证鉴定 线粒体DNA种属鉴定技术规范.pdf

ICS 07.140 CCS C 06 34 安徽省地方标准 DB34/T 43402022 法医物证鉴定 线粒体 DNA 种属鉴定技术规范 Forensic biology identification Specification of mitochondrial DNA for species identification 2022-12-29 发布 2023-01-29 实施 安徽省市场监督管理局 发 布 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由安徽省司法厅提出并归口。本文件起草单位：安徽新莱蒂克司法鉴定中心、安徽省司法鉴定协会、安徽仁吉康生物技术有限责任公司。本文件主要起草人：张黎黎、鲍加琪、赵莎莎、王晓闵、张林杰、徐龙、孔东辉、王陈成、余春晓、王彪、许云斐、刘慧、彭苗苗。法医物证鉴定 线粒体 DNA 种属鉴定技术规范 1 范围 本文件规定了法医物证鉴定线粒体DNA种属鉴定的基本要求、检验程序和鉴定意见书。本文件适用于安徽省法医DNA实验室通过线粒体DNA测序的方法对动物源生物检材（包括但不限于血液、肌肉、毛发、骨骼、牙齿）的种属来源进行确认，确认范围为人和高等脊椎动物。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GA/T 383-2014 法庭科学DNA实验室检验规范 SF/Z JD0105008-2018 法医物证鉴定线粒体DNA检验规范 CNAS-CL08-A002:2018 司法鉴定/法庭科学机构能力认可准则在法医物证 DNA 鉴定领域的应用说明 司法鉴定文书规范 司发通2016112号 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。法医物证鉴定 forensic biology identification 鉴定人运用法医物证学的科学技术或者专门知识，对各类生物检材进行鉴别和判断并提供鉴定意见的活动。种属鉴定 species identification 广义上的种属鉴定包括动植物的类属确定，狭义的种属鉴定指的是动物的生物检材的种属来源鉴定，即确定检材是否属于人体所有，有时还要确定检材属于何种动物。线粒体 DNA mitochondrial DNA,mtDNA 位于线粒体中的DNA，呈双链环状结构。序列比对 alignment 为确定两个或多个序列之间的相似性和同源性，将它们按照一定的规律进行排列。4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。CO I:细胞色素c氧化酶亚基（cytochrome c oxidase subunit I）DNA:脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid）PCR:聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）12SrRNA:12S核糖体核糖核酸（12S ribosomal RNA）5 基本要求 应符合SF/Z JD0105008-2018中4.14.3的要求。6 检验程序 样本采集 6.1.1 含有 DNA 的生物检材（包括但不限于血液、肌肉、毛发、骨骼、牙齿）均可采集。6.1.2 样本应分别包装，注明编号、采样日期、采样地点等信息。6.1.3 样本采集后应及时进行实验。DNA 提取和纯化 按照GA/T 383-2014中附录A的方法执行。PCR 扩增与产物测序 6.3.1 PCR 扩增 根据需要，宜选择通用引物或自行设计引物进行PCR扩增。本文件提供了两个线粒体DNA片段通用引物示例供参考：示例1：12SrRNA 引物对 F：5-AAACTGGGATTAGATACCCCACTAT-3 R：5-GAGGGTGACGGGCGGTGTGT-3 示例2：CO I 引物对 F：5-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3 R：5-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3 6.3.2 PCR 扩增产物测序 宜采用纯化试剂盒或其他同行公认的纯化方法对 PCR 扩增产物进行纯化；宜采用商品化测序试剂盒进行测序PCR反应及毛细管测序电泳，获得DNA序列信息。6.3.3 质量控制 从事DNA种属鉴定的实验室至少应该包括以下质量控制措施：a)对照设置：每次实验需严格设置阳性（已知的 DNA 样品）和阴性（不加 DNA 的空白）对照；b)重复检验：为避免潜在的异质性影响和保证结果的可靠性，宜进行正、反链双向测序或单向二次测序；c)污染防控：实验室应采取措施以防止污染，并符合 CNAS-CL08-A002:2018 中 7.4.4 要求。序列比对鉴定 将测序获得的DNA序列在国际通用的基因数据库中进行核苷酸序列比对，宜结合序列比对结果、物种形态、地理分布、时间等综合信息出具鉴定意见。7 鉴定意见书 鉴定人根据 6.4 结果撰写鉴定意见书。鉴定意见书的格式要求参照司法鉴定文书规范的规定执行。参考文献 1 GA/T 382-2014 法庭科学DNA实验室建设规范 2 SF/T 0069-2020 法医物证鉴定实验室管理规范 3 官大威.法医学辞典M.化学工业出版社,2009 4 CNAS-CL08:2018 司法鉴定/法庭科学机构能力认可准则