猪瘟ELISA抗体检测试剂盒说明书备课讲稿.doc

猪瘟ELISA抗体检测试剂盒

猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒
使用说明书
【简介】
试剂盒由抗原包被的微孔板，酶标羊抗猪IgG及其它试剂制成，应用间接ELISA原理检测猪血清中抗猪瘟病毒抗体。
【用途】
猪瘟ELISA诊断试剂盒用于检测猪血清中猪瘟病毒抗体。评估猪场猪瘟疫苗免疫状况，感染猪的血清学诊断。
【原理】
本试剂盒是采用猪瘟抗原包被微孔板，在试验中，加入稀释的对照血清和待检血清，经温育后，若样品中含有抗猪瘟病毒的特异性抗体，则将与检测板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与检测板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，加入HF溶液终止反应后，用酶标仪630nm波长测定各反应孔中的OD值。
【试剂盒主要成分】
1  包被抗原的微孔板                   2块                   （96孔/块）
2  阴、阳性对照血清                 各1管                   （0.5ml/管）
3  羊抗猪酶标二抗                     1瓶                   （20ml/瓶）
4  20倍浓缩洗涤液                     1瓶                   （30ml/瓶）
5  底物A液、B液                   各1瓶                   （10ml/瓶）
6  终止液                              1瓶                   （10ml/瓶）
7  样品稀释液                          1瓶                   （50ml/瓶）
8  血清稀释板                          2块                   （96孔/块）
9  说明书                              1张
【样品制备】
取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。
【洗涤液配制】
使用前，浓缩的洗涤液应恢复至室温（25℃左右），并摇动使沉淀的盐溶解（最好在37℃水中加热5-10min），然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释（例如：每板用20 ml浓缩液加上380ml水），稀释好的洗涤液在4℃可以存放7天。
【样品稀释】
在血清稀释板中按1：40的体积稀释待检血清（195μl样品稀释液中加5μl待检血清）。
注意：阳性对照和阴性对照1：40稀释，（234μl样品稀释液中加6μl对照血清）。
【注意事项】
1  试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用后放回2-8℃。
2  不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。
3  不要用口移液。
4  TMB（底物液B）不要暴露于强光，避免接触氧化剂。
5  检测板拆封后避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，应尽快置于4℃)。
6  待检血清样品数量较多时，应先使用血清稀释板稀释完所有要检测血清，再将稀释好的血清转移到检测板，使反应时间一致。
7  浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释，如果发现有结晶加热使其溶解后再使用。
8  严格按照操作说明书可以获得最好的结果，操作过程中移液，定时和洗涤等的全过程必须精确。
【操作步骤】
1  取预包被的检测板（根据样品多少，可拆开分次使用），将稀释好的待检血清取100μl加入到检测板孔中。阴性对照和阳性对照各设2孔，每孔100μl。轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置37℃温育30分钟。
2  甩掉板孔中的溶液，用洗涤液洗板5次，200μl/孔，每次静置3分钟倒掉，再在干净吸水纸上拍干。
3  每孔加羊抗猪酶标二抗100μl，置37℃温育30分钟。
4  洗涤5次, 方法同2。切记每次在干净吸水纸上拍干。
5  每孔先加底物液A一滴（50µl）、再加底物液B一滴（50µl），混匀，室温(18℃-25℃)避光显色10分钟。
6  每孔加终止液1滴(50μl)，10分钟内测定结果（测定前在震荡器上轻轻震动一下）。
【结果判定】  在酶标仪上测各孔OD630值。试验成立的条件是阳性对照孔平均OD630值大于或等于1.0，阴性对照孔平均OD630值必须小于0.3。
样品OD630值大于0.35，判为阳性；样品OD630值小于0.35，判为阴性。
注意：用620 ~650纳米波长测定结果均有效。
【贮    存】2-8℃避光保存
【有 效 期】6个月