（高清正版）DB32_T3901-2020脱毒矮化自根砧苹果苗木繁育技术规程.pdf

ICS 65.020.20B 61DB32江苏省地方标准DB32/T 39012020脱毒矮化自根砧苹果苗木繁育技术规程Technical regulation for propagation apple seedings with virus-free dwarf rootstocks2020-10-13 发布2020-11-13 实施江苏省市场监督管理局发 布DB32/T 39012020I前言本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由南京农业大学提出。本标准由江苏省园艺标准化委员会归口。本标准起草单位：南京农业大学、江苏徐淮地区徐州农业科学研究所、江苏省大沙河现代农业综合开发集团有限公司。本标准主要起草人：渠慎春、赵林、张忠伟、侯应军、陈卫平、王磊彬、高志红。DB32/T 390120201脱毒矮化自根砧苹果苗木繁育技术规程1范围本标准规定了采穗圃营建、矮化砧木的选择、砧木苗培育、嫁接及定植、嫁接苗管理、嫁接苗出圃等矮化自根砧苹果苗木繁育技术。本标准适用于脱毒苹果矮化自根砧苗木的繁育。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 8370苹果苗木产地检疫规程GB 9847苹果苗木GB/T 129432007苹果无病毒母本树和苗木检疫规程NY/T 10852006苹果苗木繁育技术规程3采穗圃营建按 NY/T 10852006 规定执行。4矮化砧木的选择矮化砧木可以选择M9T337、M9、B9等。5脱毒砧木苗及苹果品种苗获取见附录A。6砧木苗培育6.1 砧木组培苗移栽经过病毒检测的脱毒组培苗进行炼苗并移栽到营养钵中，然后在设施大棚内驯化培育到30 cm高，根颈部位粗在0.5 cm左右。按株距30 cm、行距150 cm，把以上驯化苗木移栽到田间培育。6.2 第一年管理6.2.1水肥管理DB32/T 390120202生长季根据天气情况灌水，保持土壤相对含水量75%左右。施肥23次（最后一次时间为压条后），每次施肥量为复合肥20 kg/亩30 kg/亩，根据长势追加适量尿素，同时补充叶面肥(顶绿螯合铁6000倍+优聪素700倍)。6.2.2除草杂草高于5 cm时，应进行人工除草。期间可以适当增加短截促进分枝的处理，以保证后面压条的枝条数量。6.2.3病虫害防治按 NY/T 10852006规定执行。6.2.4压条6.2.4.1时间10月中下旬（新梢停长后）。6.2.4.2方法6.2.4.2.1 修剪压条前剪去梢部不充实部分，同时剪去长势弱、生长方向与压条方向相反的侧枝（剪到离侧枝的基部3 cm5 cm处）。6.2.4.2.2 开沟沿砧木行两侧开宽50 cm左右（宽度须足够容纳全部压条）、深约10 cm的浅沟。6.2.4.2.3 压条采用顺行编织，辅以竹签别枝的办法将所有大枝错落压实，必须将全部枝条平卧在浅沟底部。6.2.4.2.4 覆土压条后用细土将裸露在外的枝条覆盖。6.3第二年管理6.3.1水肥管理在苗木高度10 cm15 cm和覆锯末之前分两次进行追肥，每次施复合肥20 kg/亩30 kg/亩。覆完锯末以后，适时灌水，自根砧压条繁殖，水分是生根的关键，始终保持土壤相对含水量75%左右。6.3.2覆锯末6.3.2.1 第一次覆腐熟锯末子砧苗高度30 cm左右时开始第一次覆锯末，厚度5 cm10 cm。6.3.2.2 第二次覆腐熟锯末子砧苗高度40 cm45 cm时开始第二次覆锯末，厚度5 cm10 cm。以后多次覆盖，直至锯末厚度达到50 cm。6.3.2.3 覆土每次覆锯末后，持续灌水，待锯末湿度达到手握成团时开始覆土，覆土高度3 cm5 cm。6.3出圃秋季落叶后即可出圃，可采用机械出苗，按GB 9847分级并贮藏。7嫁接及定植7.1接穗准备落叶后剪取脱毒优良苹果品种芽体饱满的一年生中庸枝条为接穗，沙藏或保湿冷藏。DB32/T 3901202037.2嫁接时期和方法嫁接时期为春季，方法为枝接。采用坐地嫁接或室内嫁接；砧木粗度要求0.8 cm1.0 cm。7.3嫁接苗定植将嫁接好的苗木栽植到苗圃中，栽植密度为株距30 cm、行距80 cm。8嫁接苗管理8.1成活率检查嫁接后10天检查成活率，及时补接。8.2嫁接苗修剪秋季落叶后嫁接苗剪除分枝，第二年当植株长至120 cm时定干，同时连续施用整枝灵2次，间隔1周，促进分枝，并立支架绑缚。第一次整枝灵亩用12 ml，兑水20 kg喷雾，第二次亩用13 ml，兑水20kg25kg喷雾，要喷在枝条的嫩尖和顶芽上。8.3肥水管理同6.1.1。8.4病虫害防治同6.1.3。9嫁接苗出圃嫁接苗在苗圃中生长2年，当苗木分枝达到5个以上，嫁接口上10 cm处苗木直径达到1.5 cm以上可以出圃。按GB 8370进行苹果苗木产地检疫，检疫合格可以出圃。10记录对生产全过程进行记录，生产档案保存2年。DB32/T 390120204附录A（规范性附录）脱毒苹果砧木苗及苹果品种苗的获得A.1苹果品种和砧木初代组培苗获得A.1.1培养基的配制采用1/2MS培养基，培养基成分为：1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1g/L PVP+30g/L蔗糖+7g/L琼脂。A.1.2植物材料准备和灭菌接种剪取幼苗顶部1 cm2 cm（含生长点）茎段作为外植体进行初代培养。用75%酒精处理45 s，然后再用10%过氧化氢消毒20 min后接种。A.2组培苗继代增殖扩繁继代增殖扩繁培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA+30 g/L蔗糖+7 g/L 琼脂，pH=5.8。A.3苹果茎尖超低温脱毒处理A.3.1茎尖预培养取组培苗约2 mm左右的茎尖，接种于MS+6.0 g/L琼脂粉+0.75 mol/L蔗糖的培养基中，25暗培养3d。A.3.2装载取预培养过的茎尖，放入装载溶液中，装载溶液为MS+2 mol/L甘油+0.75 mol/L 蔗糖，pH=5.8。处理温度为25，处理时间为60 min。A.3.3超低温处理将装载过的茎尖转移到pH5.8的PVS-2溶液中，处理温度为0，处理时间为2 h。然后转入10 mL冻存管中，直接投入液氮中处理1 h。PVS-2 溶液为：MS+30%(W/V)甘油+15%(W/V)聚乙二醇+15%(W/V)DMSO(二甲基亚砜)+0.4 mol/L蔗糖。A.3.4解冻从液氮中取出冻存管，快速转移到40的水浴锅中，处理2 min。然后取出茎尖放入MS+1.2 mol/L的蔗糖溶液中20 min，直到茎尖漂浮在液体表面。A.3.5茎尖再生培养将处理过的茎尖转入增殖培养基中，暗培养1周后进行光照培养。一个月后将再生株系进行继代扩繁，增殖扩繁培养基为：MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA+30 g/L蔗糖+6 g/L 琼脂，pH5.8。DB32/T 390120205A.4再生植株的病毒检测按GB/T 129432007进行苹果无病毒母本树和苗木检测，根据GenBank登录的ACLSV、ASGV、ASPV、APMV、ASSVD等5种病毒外壳蛋白序列设计引物，结合苹果内参基因TUB特异性片段分别进行PCR扩增验证，从而检测再生植株是否含有病毒。A.5扩繁、炼苗和移栽经过病毒检测的无病毒组培苗进行扩繁、炼苗和移栽。A.6脱毒原种的保存脱毒原种的保存的方式有田间原种保存圃保存和室内组培保存。A.6.1 田间原种保存圃保存无病毒原种树定植于有防虫保护网设备的网室内或专门的温室里，并远离有病毒潜伏来源的果园2km以上。A.6.2 组培保存由组织培养方法获得的无病毒原种可以保留在瓶内继代培养。如果需用接穗，可以扩繁几代，移至田间。A.6.3 病毒检测无病毒原种树每5年应进行1次病毒检测，发现问题即剔除。_