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中中华华人人民民共共和和?家家标标准准GB 5413.32010 食品安全?家标准 婴幼儿食品和乳品中脂肪的测定 National food safety standard Determination of fat in foods for infants and young children,milk and milk products 中中 华华 人人 民民 共共 和和?卫卫 生生 部部 发布 2010-03-26 发布 2010-06-01 实施GB 5413.32010 I 前 言 本标准代?GB/T 5009.46-2003?乳?乳制品卫生标准的分析方法?中脂肪的测定?GB/T 5409-85?牛乳检验方法?中脂肪的测定?GB/T 5416-85?奶?检验方法?中脂肪的测定?GB/T 5413.3-1997?婴幼儿配方食品和乳粉 脂肪的测定?本标准的?录 A 为资料性?录?本标准所代?标准的历次?本发布情况为?GB/T 5409-85?GB/T 5413.3-1997?GB/T 5416-85?GB 5009.46-1985?GB/T 5009.46-1996?GB/T 5009.46-2003?GB 5413.32010 1 食品安全?家标准 婴幼儿食品和乳品中脂肪的测定 1 范围 本标准规定了巴氏杀菌乳?灭菌乳?生乳?发?乳?调制乳?乳粉?炼乳?奶?稀奶?酪和婴幼儿配方食品中脂肪的测定方法?本标准第一法适用于巴氏杀菌乳?灭菌乳?生乳?发?乳?调制乳?乳粉?炼乳?奶?稀奶?酪和婴幼儿配方食品中脂肪的测定?第?法适用于巴氏杀菌乳?灭菌乳?生乳中脂肪的测定?2 规范性引用文件 本标准中引用的文件对于本标准的?用是必?可少的?是注日期的引用文件，仅所注日期的?本适用于本标准?是?注日期的引用文件，其?新?本?包括所有的修改单?适用于本标准?第一法 3 原理 用乙醚和石?醚抽提样品的碱水解液，通过蒸馏或蒸发去除溶剂，测定溶于溶剂中的抽提物的质量?4 试剂和材料 除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的?水?4.1 淀粉?活力?1.5 U/mg?4.2?水?NH4OH?质量分数?25%?注：可使用比?浓度更高的?水?4.3 乙醇?C2H5OH?体?分数至少为 95%?4.4 乙醚?C4H10O?含过?化物，?含抗?化剂，并满足试验的要求?4.5 石?醚?CnH2n+2?程 30 60?4.6 混合溶剂?等体?混合乙醚?4.4?和石?醚?4.5?，使用前制备?4.7 碘溶液?I2?0.1 mol/L?4.8?果红溶液?C32H22N6Na2O6S2?将 1 g?果红溶于水中，稀释至 100 mL?注：可选择性地使用?果红溶液可使溶剂和水相界面清晰，也可使用其他能使水相染色而?影响测定结果的溶液?4.9 盐酸?6 mol/L?量取 50 mL 盐酸?12 mol/L?缓慢倒入 40 mL 水中，定容至 100 mL，混匀?5 仪器和设备 GB 5413.32010 2 5.1 分析?感量为 0.1 mg?5.2 离心机?可用于放置抽脂瓶或管，转速为 500 转/分钟600 转/分钟，可在抽脂瓶外端产生 80 g90 g 的重力场?5.3 烘箱?5.4 水浴?5.5 抽脂瓶?抽脂瓶?带有软木塞或其他?影响溶剂使用的瓶塞?如硅胶或聚四氟乙烯?软木塞?先?于乙醚中，后放入 60 或 60 以?的水中保持至少 15 min，冷?后使用?用时需?泡在水中，?泡用水每?更换一次?注：也可使用带虹吸管或洗瓶的抽脂管?或烧瓶?，但操作?骤有所?同，见?录 A 中规定?接头的内部长支管?端可成勺状?6 分析步骤 6.1 用于脂肪收集的容器?脂肪收集瓶?的准备 于?燥的脂肪收集瓶中加入?粒?石，放入烘箱中?燥1 h?使脂肪收集瓶冷?至室温，?量，精确至0.1 mg?注：脂肪收集瓶可根据实?需要自行选择?6.2 空白试验 空?试验?样品检验同时进行，使用相同?骤和相同试剂，但用10 mL水代?试样?6.3 测定 6.3.1 巴氏杀菌乳?灭菌乳?生乳?发酵乳?调制乳?取充分混匀试样10 g?精确至0.0001 g?于抽脂瓶中?6.3.1.1 加入 2.0 mL?水?4.2?，充分混合后立?将抽脂瓶放入 65 5 的水浴中，加热 15 min20min，?时取出振荡?取出后，冷?至室温?静?30 s 后可进行?一?骤?6.3.1.2 加入 10 mL 乙醇?4.3?，缓和但彻?地进行混合，避免液体?接近瓶颈?如果需要，可加入两滴?果红溶液?4.8?6.3.1.3 加入 25 mL 乙醚?4.4?，塞?瓶塞，将抽脂瓶保持在水?置，小球的延伸部分朝?夹到摇混器?，按?100 次/min 振荡 1 min，也可采用手动振摇方式?但均?注意避免形成持久乳化液?抽脂瓶冷?后小心地打开塞子，用少量的混合溶剂冲洗塞子和瓶颈，使冲洗液流入抽脂瓶?6.3.1.4 加入 25 mL 石?醚?4.5?，塞?重新润湿的塞子，按 6.3.1.3 所述，轻轻振荡 30 s?6.3.1.5 将加塞的抽脂瓶放入离心机中，在 500 转/分钟600 转/分钟?离心 5 min?否?将抽脂瓶静?至少 30 min，直到?层液澄清，并明显?水相分离?6.3.1.6 小心地打开瓶塞，用少量的混合溶剂?4.6?冲洗塞子和瓶颈内壁，使冲洗液流入抽脂瓶?如果两相界面?于小球?瓶身相接处，?沿瓶壁边缘慢慢地加入水，使液面高于小球和瓶身相接处?见?1?，以便于倾倒?6.3.1.7 将?层液尽可能地倒入已准备好的加入?石的脂肪收集瓶中，避免倒出水层?见?2?GB 5413.32010 3?1 倾倒醚层前?2 倾倒醚层后 6.3.1.8 用少量混合溶剂冲洗瓶颈外部，冲洗液收集在脂肪收集瓶中?要防?溶剂溅到抽脂瓶的外面?6.3.1.9 向抽脂瓶中加入 5 mL 乙醇，用乙醇冲洗瓶颈内壁，按 6.3.1.2 所述进行混合?重复 6.3.1.36.3.1.8 操作，再进行第?次抽提，但只用 15 mL 乙醚和 15 mL 石?醚?6.3.1.10 重复 6.3.1.26.3.1.8 操作，再进行第?次抽提，但只用 15 mL 乙醚和 15 mL 石?醚?注?如果产品中脂肪的质量分数?于5%，可只进行两次抽提?6.3.1.11 合并所有提取液，既可采用蒸馏的方法除去脂肪收集瓶中的溶剂，也可于?水浴?蒸发至?来除掉溶剂?蒸馏前用少量混合溶剂冲洗瓶颈内部?6.3.1.12 将脂肪收集瓶放入 102 2 的烘箱中加热 1 h，取出脂肪收集瓶，冷?至室温，?量，精确至 0.1 mg?6.3.1.13 重复 6.3.1.12 操作，直到脂肪收集瓶两次连续?量差值?超过 0.5 mg，记录脂肪收集瓶和抽提物的?质量?6.3.1.14 为验证抽提物是否全部溶解，向脂肪收集瓶中加入 25 mL 石?醚，微热，振摇，直到脂肪全部溶解?如果抽提物全部溶于石?醚中，?含抽提物的脂肪收集瓶的?终质量和?初质量之差，?为脂肪含量?6.3.1.15 若抽提物未全部溶于石?醚中，或?疑抽提物是否全部为脂肪，?用热的石?醚洗提?小心地倒出石?醚，?要倒出任何?溶物，重复?操作 3 次以?，再用石?醚冲洗脂肪收集瓶口的内部?后，用混合溶剂冲洗脂肪收集瓶口的外部，避免溶液溅到瓶的外壁?将脂肪收集瓶放入102 2 的烘箱中，加热1 h，按6.3.1.12和6.3.1.13所述操作?6.3.1.16 取 6.3.1.13 中测得的质量和 6.3.1.15 测得的质量之差作为脂肪的质量?注：选择带有虹吸管或洗瓶?件的抽脂管时，?骤如?录A?标准的?录?所述?6.3.2 乳粉和乳基婴幼儿食品?取混匀后的试样，高脂乳粉?全脂乳粉?全脂加糖乳粉和乳基婴幼儿食品?1 g?精确至0.0001 g?，脱脂乳粉?乳清粉?酪乳粉?1.5 g?精确至0.0001 g?6.3.2.1?含淀粉样品 加入 10 mL 65 5 的水，将试样洗入抽脂瓶的小球中，充分混合，直到试样完全分散，放入流动水中冷?6.3.2.2 含淀粉样品 将试样放入抽脂瓶中，加入?0.1 g的淀粉?4.1?和一小磁性搅拌棒，混合均匀后，加入8 mL10 mL 45 的蒸馏水，注意液面?要?高?盖?瓶塞于搅拌状?，置65 水浴中2 h，每隔10 min摇混一次?为检验淀粉是否水解完全可加入两滴?0.1 mol/L的碘溶液?4.7?，如无蓝色出?说明水解完全，否?将抽脂瓶重新置于水浴中，直至无蓝色产生?冷?抽脂瓶?GB 5413.32010 4 以?操作同6.3.1.16.3.1.16?6.3.3 炼乳 脱脂炼乳?全脂炼乳和部分脱脂炼乳?取?3 g5 g?高脂炼乳?取?1.5 g?精确至0.0001 g?，用10 mL蒸馏水，分次洗入抽脂瓶小球中，充分混合均匀?以?操作同6.3.1.16.3.1.16?6.3.4 奶油?稀奶油 先将奶?试样放入温水浴中溶解并混合均匀后，?取试样?0.5 g样品?精确至0.0001 g?，稀奶?取1g于抽脂瓶中，加入8 mL10 mL 45的蒸馏水?加 2 mL?水充分混匀?以?操作同6.3.1.16.3.1.14?6.3.5 干酪?取?2 g研碎的试样?精确至0.0001 g?于抽脂瓶中，加10 mL盐酸?4.9?，混匀，加塞，于?水中加热20 min30 min?以?操作按6.3.1.26.3.1.16操作?7 分析结果表述 样品中脂肪含量按式?1?计算?1004321=m)mm()mm(X(1)式中?X样品中脂肪含量，单?为克每?克?g/100g?m样品的质量，单?为克?g?m16.3.1.13 中测得的脂肪收集瓶和抽提物的质量，单?为克?g?m2脂肪收集瓶的质量，或在有?溶物?在?，6.3.1.15 中测得的脂肪收集瓶和?溶物的质量，单?为克?g?m3空?试验中，脂肪收集瓶和 6.3.1.13 中测得的抽提物的质量，单?为克?g?m4空?试验中脂肪收集瓶的质量，或在有?溶物?在时，6.3.1.15 中测得的脂肪收集瓶和?溶物的质量，单?为克?g?以重复性条件?获得的两次独立测定结果的算术?均值表示，结果保留?有效数?8 精密度 在重复性条件?获得的两次独立测定结果之差?符合?脂肪含量?15%，?0.3g/100g?脂肪含量 515%，?0.2g/100g?脂肪含量?5%，?0.1g/100g?9 其他 实验过程注意?项?9.1 空白试验检验试剂 要进行空?试验，以消除?境及温度对检验结果的影响?进行空?试验时在脂肪收集瓶中放入 1 g 新鲜的无水奶?必要时，于每 100 mL 溶剂中加入 1 g无水奶?后重新蒸馏，重新蒸馏后必须尽快使用?GB 5413.32010 5 9.2 空白试验与样品测定同时进行 对于?在非挥发性物质的试剂可用?样品测定同时进行的空?试验值进行校?抽脂瓶?室之间的温差可对抽提物的质量产生影响?在理想的条件?试剂空?值?，?室温度相同，脂肪收集瓶充分冷?，该值通常小于 0.5 mg?在常规测定中，可忽略?计?如果全部试剂空?残余物大于 0.5 mg，?分别蒸馏 100 mL 乙醚和石?醚，测定溶剂残余物的含量?用空的控制瓶测得的量和每种溶剂的残余物的含量都?超过 0.5 mg?否?更换?合格的试剂或对试剂进行提纯?9.3 乙醚中过氧化物的检验 取一只玻璃小量筒，用乙醚冲洗，然后加入 10 mL 乙醚，再加入 1 mL 新制备的 100 g/L 的碘化钾溶剂，振荡，静置 1 min，两相中均?得有黄色?也可使用其他适当的方法检验过?化物?在?加抗?化剂的情况?，为长久保证乙醚中无过?化物，使用前?按?法处理?将锌箔削成长条，长度至少为乙醚瓶的一半，每升乙醚用 80 cm2锌箔?使用前，将锌?完全?入每升中含有 10 g 五水硫酸铜和 2 mL 质量分数为 98%的硫酸中 1 min，用水轻轻彻?地冲洗锌?，将湿的镀铜锌?放入乙醚瓶中?可?也可以使用其他方法，但?得影响检测结果?第二法 10 原理 在乳中加入硫酸破坏乳胶质性和覆盖在脂肪球?的蛋?质外膜，离心分离脂肪后测量其体?11 试剂和材料 11.1 硫酸?H2SO4?分析纯，20?1.84 g/L?11.2 异戊醇?C5H12O?分析纯?12 仪器和设备 12.1 乳脂离心机?12.2 盖勃氏乳脂计?小刻度值为 0.1%，见?3?GB 5413.32010 6?3 盖勃氏乳脂计 12.3 10.75 mL 单标乳吸管?13 分析步骤 于盖勃氏乳脂计中先加入 10 mL 硫酸?11.1?，再沿着管壁小心准确加入 10.75 mL 样品，使样品?硫酸?要混合，然后加 1 mL 异戊醇?11.2?，塞?橡皮塞，使瓶口向?，同时用布包裹以防冲出，用力振摇使呈均匀棕色液体，静置数分钟?瓶口向?，置 65 70 水浴中 5 min，取出后置于乳脂离心机中以 1100 转/分钟的转速离心 5 min，再置于 65 70 水浴水中保温 5 min?注意水浴水面?高于乳脂计脂肪层?取出，立?读数，?为脂肪的?分数?14 精密度 在重复性条件?获得的两次独立测定结果的绝对差值?得超过算术?均值的 5%?GB 5413.32010 7 附 录 A?资料性附录?使用带虹吸管或洗瓶的抽脂管的操作步骤 A.1 步骤 A.1.1 脂肪收集瓶的准备?见6.1?A.1.2 空?试验?见6.2和9.2?A.1.3 测定 A.1.3.1 巴氏杀菌?灭菌乳?生乳?发?乳?调制乳?取充分混匀样品 10 g?精确至 0.001 g?于抽脂管?部?乳粉及乳基婴幼儿食品?取混匀后的样品高脂乳粉?全脂乳粉?全脂加糖乳粉和乳基婴幼儿配方食品?1g，脱脂乳粉?乳清粉?酪乳粉?1.5 g?精确至0.001 g?，于抽脂管?部，加入10 mL 65 5 的水，充分混合，直到样品完全分散，放入流动水中冷?炼乳?脱脂炼乳?取?10 g?全脂炼乳和部分脱脂炼乳?取?3 g5 g?高脂炼乳?取?1.5g?精确至 0.001g?，于抽脂管?部?加入 10 mL 水，充分混合均匀?奶?稀奶?先将奶?样品放入温水浴中溶解并混合均匀后，奶?取?0.5 g 样品，稀奶?取 1g 于抽脂管?部?精确至 0.001 g?述样品接以?A.1.3.1.1 操作?酪?取?2 g 研碎的样品?精确至 0.001 g?加水 9 mL?水 2 mL，用玻璃棒搅拌均匀后微微加热使酪蛋?溶解，用盐酸?4.9?中和后再加盐酸?4.9?10 mL，加?砂 0.5 g，盖好玻璃盖，以文火煮?5 min，冷?后将烧杯内容物移入抽脂管?部，用 25 mL 乙醚冲洗烧杯，洗液并入抽脂管中，以?操作按 A.1.3.1.4?加软木塞?以后操作?A.1.3.1.1 加入2 mL?水，?管?部已稀释的样品彻?混合?加入?水后，?立?进行?操作?A.1.3.1.2 将抽脂管放入65 5 的水浴中，加热15 min20 min，偶尔振荡样品管，然后冷?至室温?A.1.3.1.3 加入10 mL乙醇，在管?部轻轻彻?地混合，必要时加入两滴?果红溶液?A.1.3.1.4 加入25 mL乙醚，加软木塞?已被水饱和?，或用水?湿的其他瓶塞，?反转1 min，?要过度?避免形成持久性乳化液?必要时，将管子放入流动的水中冷?，然后小心地打开软木塞，用少量的混合溶剂?使用洗瓶?冲洗塞子和管颈，使冲洗液流入管中?A.1.3.1.5 加入25 mL石?醚，加塞?塞子重新用水润湿?，按A.1.3.1.3所述轻轻振荡30 s?A.1.3.1.6 将加塞的管子放入离心机中，在500 转/分钟600 转/分钟?离心1 min5 min?或静?至少30 min，直到?层液澄清，并明显地?水相分离，冷?A.1.3.1.7 小心地打开软木塞，用少量混合溶剂洗塞子和管颈，使冲洗液流入管中?A.1.3.1.8 将虹吸管或洗瓶接头插入管中，向?压长支管，直到距两相界面的?方4 mm处，内部长支管?管轴?行?小心地将?层液移入含有?石的脂肪收集瓶中，也可用金属皿?避免移入任何水相?用少量混合溶剂冲洗长支管的出口，收集冲洗液于脂肪收集瓶中?A.1.3.1.9 松开管颈处的接头，用少量的混合溶剂冲洗接头和内部长支管的较?部分，重新插好接头，将冲洗液移入脂肪收集瓶中?用少量的混合溶剂冲洗出口，冲洗液收集于瓶中，必要时，按6.3.1.11所述，通过蒸馏或蒸发去除部分溶剂?A.1.3.1.10 再松开管颈处的接头，微微抬高接头，加入5 mL乙醇，用乙醇冲洗长支管，如A.1.3.1.3GB 5413.32010 8 所述混合?A.1.3.1.11 重复A.1.3.1.4A.1.3.1.9?骤进行第?次抽提，但仅用15 mL乙醇和15 mL石?醚，抽提之后，在移开管接头时，用乙醚冲洗内部长支管?A.1.3.1.12 重复A.1.3.1.4A.1.3.1.9?骤，?加乙醇，进行第?次抽提，仅用15 mL乙醇和15 mL石?醚?注：如果产品中脂肪的质量分数?于5%，可省略第?次抽提?A.1.3.1.13 以?按6.3.1.116.3.1.15所述进行?