GB 500993-2010 食品安全国家标准 食品中硒的测定.pdf

中中华华人人民民共共和和国国国国家家标标准准GB 5009.932010 食品安全国家标准 食品中硒的测定 National food safety standard Determination of selenium in foods 中中 华华 人人 民民 共共 和和 国国 卫卫 生生 部部 发布氯 氯2010-03-26 发布 2010-06-01 实施GB 5009.932010 I 前 言 本标准代?GB/T 5009.93-2003?食品中硒的?定?本标准所代?标准的历次版本发布情况为?GB/T 5009.93-2003?GB/T 12399-1996?GB 13105-1991?GB 5009.932010 1 食品安全国家标准 食品中硒的测定氯1 范围 本标准规定了用氢化物原子荧?谱法和荧?法?定食品中硒的方法?本标准适用于食品中硒的?定?2 规范性引用文件 本标准中引用的文?对于本标准的应用是必?可少的?是注日期的引用文?，仅所注日期的版本适用于本标准?是?注日期的引用文?，其?新版本?包括所有的修改单?适用于本标准?第一法 氢化物原子荧光光谱法 3 原理 试样经酸加热消化后，在 6 mo1/L 盐酸介质中，将试样中的六?硒?原成四?硒，用硼氢化钠或硼氢化钾作?原剂，将四?硒在盐酸介质中?原成硒化氢?H2Se?，?载气?气?带入原子化器中进行原子化，在硒空心阴极灯照射?，基态硒原子被激发?高能态，在去活化回到基态时，发射出特征波长的荧?，其荧?强度?硒含量成?比?标准系列比较定量?4 试剂和材料 除非另有规定，本方法所使用试剂均为?析纯，水为 GB/T 6682 规定的?水?4.1 硝酸?优?纯?4.2 高?酸?优?纯?4.3 盐酸?优?纯?4.4 混合酸?将硝酸?高?酸按 9?1 体?混合?4.5 氢?化钠?优?纯?4.6 硼氢化钠溶液?8 g/L?取 8.0 g 硼氢化钠?NaBH4?，溶于氢?化钠溶液?5 g/L?中，然后定容?1000 mL，混?4.7 铁?化钾?100 g/L?取 10.0 g 铁?化钾?K3Fe?CN?6?，溶于 100 mL 水中，混?4.8 硒标准储备液?精确?取 100.0 mg 硒?谱纯?，溶于少量硝酸中，加 2 mL 高?酸，置沸水浴中加热 3 h4 h，冷?后再加 8.4 mL 盐酸，再置沸水浴中煮 2 min，准确稀释?1000 mL，其盐酸浓度为 0.1 mo1/L，?储备液浓度为每毫升相当于 100 g 硒?GB 5009.932010 2 4.9 硒标准应用液?取 100g/mL 硒标准储备液 1.0 mL，定容?100 mL，?应用液浓度为 1g/mL?注：也可购买该元素有证国家标准溶液?4.10 盐酸?6 mol/L?量取 50 mL 盐酸?4.3?缓慢加入 40 mL 水中，冷?后定容?100 mL?4.11 过?化氢?30%?5 仪器和设备 5.1 原子荧?谱仪，带硒空心阴极灯?5.2 电热板?5.3 微波消解系统?5.4 天?感量为 1 mg?5.5 粉碎机?5.6 烘箱?6 分析步骤 6.1 试样制备 6.1.1 粮食?试样用水洗?次，于 60 烘?，粉碎，储于塑料瓶内，备用?6.1.2 蔬菜及其他植物性食物?取可食部用水洗净后用纱布吸去水滴，打成?浆后备用?6.1.3 其它固体试样?粉碎，混?，备用?6.1.4 液体试样?混?，备用?6.1.5 试样消解 6.1.5.1 电热板加热消解?取 0.5 g2 g?精确?0.001g?试样，液体试样吸取 1.00mL10.00 mL，置于消化瓶中，加 10.0 mL 混合酸及?粒玻璃珠，盖?表面皿冷消化过夜?次日于电热板?加热，并及时补加硝酸?当溶液变为清亮无色并伴有白烟时，再继续加热?剩余体?2 mL?右，?可蒸?冷?，再加 5.0 mL 盐酸?4.10?，继续加热?溶液变为清亮无色并伴有白烟出?，将六?硒?原成四?硒?冷?，转移?50 mL 容量瓶中定容，混?备用?同时做空白试验?6.1.5.2 微波消解?取 0.5 g2 g?精确?0.001g?试样于消化管中，加 10 mL 硝酸?2 mL 过?化氢，振摇混合均?，于微波消化仪中消化，其消化推荐条?见表 1?可根据?同的仪器自行设定消解条?表1 微波消化推荐条件 冷?后转入?角瓶中，加?粒玻璃珠，在电热板?继续加热?近?，?可蒸?再加 5.0 mL 盐酸?4.10?，继续加热?溶液变为清亮无色并伴有白烟出?，将六?硒?原成四?硒?冷?，转移试样STAGE POWER RAMP HOLD 1 1600 W 100%6:00 120 1:00 2 1600 W 100%3:00 150 5:00 3 1600 W 100%5:00 200 10:00 GB 5009.932010 3 消化液于 25 mL 容量瓶中定容，混?备用?同时做空白试验?吸取 10.0 mL 试样消化液于 15 mL 离心管中，加盐酸?4.3?2.0 mL，铁?化钾溶液?4.7?1.0 mL，混?待?6.2 标准曲线的配制?别取 0.00 mL，0.10 mL，0.20 mL，0.30 mL，0.40 mL，0.50 mL 标准应用液于 15 mL 离心管中用去离子水定容?10 mL，再?别加盐酸?4.3?2 mL，铁?化钾溶液?4.7?1.0 mL，混?，制成标准?作曲线?6.3 测定 6.3.1 仪器参考条?负高压?340 V?灯电流?100 mA?原子化温度?800?炉高?8 mm?载气流速?500 mL/min?屏蔽气流速?1000 mL/min?量方式?标准曲线法?读数方式?峰面?延?时间?1 s?读数时间?15 s?加液时间?8 s?进样体?2 mL?6.3.2?定?设定好仪器?佳条?，逐?将炉温升?所需温度后，稳定 10 min20 min 后开始?量?续用标准系列的零管进样，待读数稳定之后，转入标准系列?量，绘制标准曲线?转入试样?量，?别?定试样空白和试样消化液，每?同的试样前都应清洗进样器?试样?定结果按 7 计算?7 分析结果的表述 按式?1?计算试样中硒的含量?100010001000)(0=mVCCX.?1?式中?X试样中硒的含量，单?为毫克每千克或毫克每升?mg/kg 或 mg/L?C试样消化液?定浓度，单?为纳克每毫升?ng/mL?0C试样空白消化液?定浓度，单?为纳克每毫升?ng/mL?m试样质量?体?，单?为克或毫升?g 或 mL?V试样消化液总体?，单?为毫升?mL?以重复性条?获得的两次独立?定结果的算术?均值表示，结果保留?有效数?8 精密度 在重复性条?获得的两次独立?定结果的绝对差值?得超过算术?均值的 10%?第二法 荧光法 9 原理 将试样用混合酸消化，使硒化合物?化为无机硒 Se4+，在酸性条?Se4+?2,3二?基萘?2,3Diaminonaphthalene，缩写为 DAN?应生成 4,5苯并苤硒脑?4,5Benzo piaselenol?，然后用?己烷萃取?在激发?波长为 376 nm，发射?波长为 520 nm 条?定荧?强度，从而计算出试样中硒的含量?10 试剂和材料 GB 5009.932010 4 除非另有规定，本方法所使用试剂均为?析纯，水为 GB/T 6682 规定的?水?10.1 硒标准溶液?准确?取元素硒?谱纯?100.0 mg，溶于少量浓硝酸中，加入 2 mL 高?酸?70%72%?，?沸水浴中加热 3 h4 h，冷?后加入 8.4 mL HCl?盐酸浓度为 0.1 mol/L?再置沸水浴中煮2min?准确稀释?1000 mL，?为储备液?Se 含量?100 g/mL?使用时用 0.1 mol/L 盐酸将储备液稀释?每毫升含 0.05 g 硒?于冰箱内保?，两?内有效?10.2 DAN 试剂?1.0g/L?试剂在暗室内配制?取 DAN?纯度 95%98%?200 mg 于一带盖锥形瓶中，加入 0.1 mol/L 盐酸 200 mL，振摇?15 min 使其全部溶解?加入?40 mL?己烷，继续振荡 5 min?将?液倒入塞有玻璃棉?或脱脂棉?的?液漏斗中，待?层后滤去?己烷层，收集 DAN 溶液层，?复用?己烷纯化直?己烷中荧?降?时为?纯化 56 次?将纯化后的 DAN 溶液储于棕色瓶中，加入?1 cm 厚的?己烷覆盖表层，?冰箱内保?必要时在使用前再以?己烷纯化一次?警告：?试剂有一定毒性，使用本试剂的人员应有?规实验室?作经验?使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关规定的条例?氯10.3 混合酸?将硝酸及高?酸按 9+1 体?混合?10.4 去硒硫酸?取浓硫酸 200 mL 缓慢倒入 200 mL 水中，再加入 48%氢溴酸 30 mL，混?，?沙浴?加热?出?白浓烟，?时体?应为 200 mL?10.5 EDTA 混合液 10.5.1 EDTA 溶液?0.2 mol/L?取 EDTA 二钠盐 37 g，加水并加热?完全溶解，冷?后稀释?500 mL?10.5.2 盐酸羟胺溶液?100 g/L?取 10 g 盐酸羟胺溶于水中，稀释?100 mL?10.5.3?酚红指示剂?0.2 g/L?取?酚红 50 mg 溶于少量水中，加?水?1+1?1 滴，待完全溶解后加水稀释?250 mL?10.5.4 取 EDTA 溶液?10.5.1?及盐酸羟胺溶液?10.5.2?各 50 mL，加?酚红指示剂?10.5.3?5 mL，用水稀释?1 L，混?10.6?水?1+1?10.7 盐酸?10.8?己烷?需?试有无荧?杂质，否则重蒸后使用，用过的?己烷可回收，重蒸后再使用?10.9 盐酸?1+9?11 仪器和设备 11.1 荧?度计?11.2 天?感量为 1mg?11.3 烘箱?11.4 粉碎机?11.5 电热板?11.6 水浴锅?GB 5009.932010 5 12 分析步骤 12.1 氯氯试样处理 12.1.1 粮食 试样用水洗?次，?60 烤箱中烘去表面水?，用粉碎机粉碎，储于塑料瓶内，放一小包樟脑精，盖紧瓶塞保?，备用?12.1.2 蔬菜及其他植物性食物 取可食部，用蒸馏水冲洗?次后，用纱布吸去水滴，?锈钢刀?碎，取一定量试样在烘箱中于 60 烤?，?重，计算水?粉碎，备用?计算时应折合成鲜样重?12.1.3 其它固体试样 粉碎?混?试样，备用?12.1.4 液体试样 混?试样，备用?12.2 氯试样的消化?含硒量?为 0.01 g0.5 g 的粮食或蔬菜及动物性试样 0.5 g2 g?精确?0.001g?，液体试样吸取 1.00mL10.00 mL 于磨口锥形瓶内，加 10 mL 5%去硒硫酸，待试样湿润后，再加 20 mL 混合酸液放置过夜，次日置电热板?逐渐加热?当剧烈?应发生后，溶液呈无色，继续加热?白烟产生，?时溶液逐渐变成淡黄色，?达终点?某些蔬菜试样消化后出?浑?，以?难以确定终点，?时可注意瓶内出?滚滚白烟，?刻立?取?，溶液冷?后又变为无色?有些含硒较高的蔬菜含有较多的 Se6+，需要在消化完成后再加 10 mL 10%盐酸，继续加热，使再回终点，以完全?原 Se6+为 Se4+，否则结果将偏?12.3 测定?述消化后的试样溶液加入 20.0 mL EDTA 混合液，用?水?10.6?及盐酸?10.9?调?淡红橙色?pH 1.52.0?以?骤在暗室操作?加 DAN 试剂?10.2?3.0 mL，混?后，置沸水浴中加热 5 min，取出冷?后，加?己烷 3.0 mL，振摇 4 min，将全部溶液移入?液漏斗，待?层后弃去水层，小心将?己烷层?液漏斗?口倾入带盖试管中，?使?己烷中混入水滴，于荧?度计?用激发?波长376 nm?发射?波长 520 nm?定 4,5苯并苤硒脑的荧?强度?12.4 硒标准曲线绘制 准确量取标准硒溶液?0.05 g/mL?0.00 mL，0.20 mL，1.00 mL，2.00 mL 及 4.00 mL，相当于 0.00 g，0.01 g，0.05 g，0.10 g 及 0.20 g 硒，加水?5.0 mL 后，按试样?定?骤同时进行?定?当硒含量在 0.5 g 以?时荧?强度?硒含量呈线性关系，在常规?定试样时，每次只需做试剂空白?试样硒含量相近的标准管?份?可?12.5 分析结果的表述 试样中硒含量按式?2?计算?mFFFFmX02011=(2)式中?X试样中硒含量，单?为微克每克或微克每毫升(g/g 或g/mL)?GB 5009.932010 6 m1试管中硒的质量，单?为微克?g?F1标准硒荧?读数?F2试样荧?读数?F0空白管荧?读数?m试样质量，单?为克或毫升?g 或 mL?以重复性条?获得的两次独立?定结果的算术?均值表示，结果保留?有效数?13 精密度 在重复性条?获得的两次独立?定结果的绝对差值?得超过算术?均值的 10%?氯氯氯