公猪精液规范化采集与稀释.doc

公猪采精与稀释操作规程 -四川安佑技术服务部（2023-09-14）1、采精与精液解决流程（讲究卫生，控制温度）（1）采精过程流程1、 进入实验室后清洁双手2、 准备稀释液，并将稀释液放入35水浴锅中升温3、 打开显微镜上的加热板控制开关，设定温度到384、 安装集精杯（预热到37），准备其它采精用品，放入壁厨5、 将公猪赶入采精室，关上栅栏，清洁其体表6、排出包皮液用0.1KMnO4溶液清洗其腹部及包皮，再用清水洗净，抹干。7、 戴上双层手套，诱导公猪爬跨假母猪8、 锁定并拉出阴茎9、 待排出部分清亮液体后，开始收集精液10、将集精杯放入壁厨11、将公猪赶回圈内（2）精液解决操作流程1将一预温后的烧杯或塑料杯放在电子秤上，打开电子秤，当显示为零时，将装精液的食品袋从集精杯中取出放入杯中，显示读数为精液的重量。2将放精液的烧杯轻轻摇匀精液后，放入35的水浴锅中与稀释液等温。3立即用取样器取精液1025微升左右，滴在载物台上预热的载玻片上，盖上盖玻片，估测活力。精子活力大于0.6，则可用于下一步的解决。4另取1毫升精液放入加有10毫升生理盐水的精子密度杯中，读出读数后，在核对表上查到精子密度值。5计算精液可分装的份数和最终的精液体积或重量。6将大烧杯放在电子秤上，除皮，然后再将精液袋放入其中，并将精液袋上口翻在杯沿外，将装稀释液的三角瓶从水浴锅中取出，擦去底部水分，将稀释液加入大烧杯中，直到达成计算的最终重量，轻轻摇动或用玻璃棒搅拌精液使其混合。7、精液稀释后，检查精液活力，若无明显下降，开始分装。8将精液按规定重量分装于各个精液瓶（袋）中，排出空气后封口，进行精液标记，置22-25的室温1小时后(或用几层毛巾包被好后)，降温到20左右时直接放置17冰箱中。9清洗各种容器并放于消毒柜中干燥消毒。2、稀释液的配制过程 2.1 配制过程以1000毫升BTS稀释液为例，可用任一方法：通过清洗干燥消毒的三角瓶，将一袋BTS稀释粉（50克）所有加入瓶中，用量筒量取双蒸馏水1000毫升，加入三角瓶中。盖上盖子或用稀释粉袋套在三角瓶口上，封紧摇动，使稀释粉完全溶解。或放在磁力搅拌器上，搅拌加速溶解。取下盖子，放入35的水浴锅中预温。稀释液用过后，三角瓶应用蒸馏水冲洗，空干水分，然后将三角瓶、量筒用牛皮纸封口，放入80120的消毒柜或干燥箱中烘干。将两个食品袋相套放入大烧杯中或塑料杯中，放在电子秤上，打开电子秤开关，当电子秤上读数为零时，将连接蒸馏水容器的硅胶管放出少量水后，将管口对准杯口注水，并注意读数变化，当接近1000克时，应放慢流速，改为滴注，直到1000克。之后，应将蒸馏水管的龙头套好，防止污染。在大烧杯中加入一袋稀释粉（50克）。从盛磁珠的小烧杯中取镊子并夹取磁珠，在废液缸上用洗瓶冲洗磁珠2-3次，待磁珠上水分滴净后，放入烧杯中，然后将烧杯放在磁力搅拌器上，打开电源开关和加热开关，调整磁珠转速旋扭，使磁珠以适当速度旋转（水体形成涡流），使稀释粉所有溶解后，减少磁珠转速，关闭加热和电源开关。将杯子放入35的水浴中预温。注：不能控温的加热磁力搅拌器使用时间不可超过10分钟，或及早关闭加热电源；平时磁珠放在一个清洗干燥过的小烧杯中，注入新鲜蒸馏水半杯，镊子为不锈钢材料，也经清洗干燥放入杯中，盖上干净的培养皿，每3周应换掉陈水，冲净换上新的蒸馏水。稀释液加入精液中后，应用小烧杯中的镊子将磁珠从大烧杯中夹出，并在废液缸上冲洗磁珠和镊子前端3-4遍，待磁珠上水分滴净后，连同镊子放入小烧杯中，盖上培养皿。这种方法由于稀释液是在一次性食品袋中配制的，因此，不需要对配制稀释液的容器进行清洗和消毒，实现了稀释液配制的免消毒。冬季稀释粉溶解较慢，可将稀释粉与水混合后，放入水浴锅中预温10分钟，再摇匀，可加速稀释粉溶解。使用加热磁力搅拌器者不必在水浴锅中预温。注：除大规模人工授精站外，一般不主张自己配制稀释粉，推荐使用商业化稀释粉，这些产品质量稳定可靠。此外，稀释粉与蒸馏水按什么比例混合是十分严格的，应按照说明书上的配比进行稀释粉的溶解，不可改变配比。2.2 PH值与渗透压用1N稀盐酸或1N氢氧化钠调整BTS稀释液的PH值为7.2(6.8-7.4)左右,渗透压为330mOsm2.3 稀释液的保存液态状稀释液冰箱4保存，不超过24小时，超过有效贮存期的变质稀释液应废弃。3、采精前的准备1.集精杯的准备应在实验室中进行。用保温杯作集精杯时，不能直接将精液采入杯中。将两层食品袋装入保温杯内，并用洁净的玻璃棒使其贴靠在保温杯壁上，袋口翻向保温杯外，上盖一层专用过滤网，用橡皮筋固定，并使过滤网中部下陷3厘米，以避免公猪射精过快或精液过滤慢时，精液外溢。安装好后，将其放恒温箱在37温度下备用。假如是纸杯作集精杯，在杯口上固定上一次性过滤网，并使网面下陷23厘米，假如没有恒温箱，可在安装集精杯之前，用电吹风机将集精杯内壁加热到温热状态（不可加热到烫手）。采精前应将集精杯、消毒纸巾、一次性手套放入壁厨中，以方便采精时取用。2精液品质检查用品准备 最佳先将显微镜调好备用，把显微镜加热板放在显微镜载物台上，用标本夹固定好，打开电热板控制器电源开关，把设定温度调到38再打到测温状态，准备好两张洁净的载玻片和两张洁净的盖玻片放在加热板上预温。将电子秤、密度测定等用品准备好。3 公猪的准备采精员将待采精的公猪赶至采精栏，关上采精区的栅栏门，并用毛刷刷拭假母猪的台面和后躯下；然后再清扫公猪两侧肋腹部及下腹部，必要时，可将公猪的阴毛剪短（留3厘米）。4采精员的准备采精员应穿上工作服，将公猪赶入采精室后，清扫猪体后，应尽快右手戴上双层无毒的一次性手套，带上纸巾、集精杯、小凳准备采精。4、采精技术一、采精的目的与规定1用最简朴的方法采集到所有含较多精子的精液公猪性反射和射精特点与牛羊不同，其龟头对压力、约束力较为敏感，而对温度相对不敏感，因此公猪采用假阴道法采精效果往往不佳，并且猪射精时是分段射精的，一般不能收集最初射出的精液和清亮无精子的精液，因此，公猪适合用拳握法进行采精。这种方法既简朴，又便于分段收集精液。2采集到的精液最大限度地不受到任何污染由于采精过程中，公猪射精、收集精液都是在开放的环境中，精液极易受到污染。采精用的手套、集精杯、过滤网等与精液接触的物品必须无菌和对精子无毒害，一定要避免公猪体表及阴毛上的污物、包皮液、尿生殖道中的尿液、空气中的灰尘进入精液中。3尽也许使精液不受到外界温度的影响公猪的精液对温度十分敏感，特别是低温。因此，采精室的温度可以控制，不应低于10，最佳在16-25之间，这不仅有助于公猪的性行为正常，并且能避免外界温度对精液温度的影响。二、采精过程1、 诱导公猪爬跨假母猪 采精员可摩仿发情母猪的叫声，并敲击假母猪诱导公猪爬跨。2、在采精之前先剪去公猪包皮上的被毛，防止干扰采精及细菌污染2、排出包皮液。用0.1KMnO4溶液清洗其腹部及包皮，再用清水洗净，抹干。公猪爬跨上假母猪后，采精员可坐公猪左后侧的小凳上，用右手按摩公猪包皮腔，尽也许将包皮腔中的包皮液（尿液）排净，并用纸巾拭干。3、锁定公猪阴茎并将其拉出。 公猪阴茎勃起后，开始有试图插入母猪阴道的动作，但有些公猪伸出阴茎较慢，需要按摩包皮以帮助阴茎伸出。公猪阴茎伸出后，采精员应脱去外层手套，右手呈锥形的空拳，即拇指一侧较松，小指一侧较紧，拳心向上，使龟头（螺旋部分）进入空拳中，只让公猪的龟头伸出空拳1厘米左右，或不让其伸出拳外，用中指、无名指和小指锁定龟头，注意不要抓握阴茎体部（非螺放部分），以防导致公猪不适而从假母猪上退下，然后顺其向前冲力，将阴茎的“S”状弯曲尽也许地拉直，握紧阴茎龟头防止其旋转，公猪即可安静下来并开始射精；假如假母猪的结构合理，可将其阴茎向左前上拉，并使龟头向下弯，这样有助于防止包皮腔中的残存包皮液顺着阴茎流至集精杯。“挤出包皮积尿，按摩公猪的包皮部，待公猪爬上假台猪后，用温暖清洁的手(有无手套皆可)握紧伸出的龟头，顺公猪前冲时将阴茎的S状弯曲拉直，握紧阴茎螺旋部的第一和第二摺，在公猪前冲时允许阴茎自然伸展，不必强拉。充足伸展后，阴茎将停止推动，达成强直、“锁定”状态，开始射精。射精过程中不要松手，否则压力减轻将导致射精中断。”4、左手打开集精杯盖，取下上面的纸巾。5、 精液收集 公猪开始射精后，不要立即收集，待公猪射出部分清亮的液体后，再开始收集含精多的部分，假如手中的胶状物较多，可隔着纸巾将胶状物擦除。6、 在精液收集过程中，应尽也许根据公猪的射精特点，只收集含精丰富的部分，不要收集清亮的液体和胶状物。注旨在采精过程中不要碰阴茎体，否则阴茎将迅速缩回。7、 采精过程中，假如仍有包皮中的尿液顺阴茎流出，可先将龟头抬高，然后在射精间隙或只射出清亮液体时，放下集精杯，左手拿纸巾将其吸附，避免流入集精杯中。8、 当公猪开始环顾四周时，说明公猪射精即将结束。可略松开龟头，以观测公猪反映，假如阴茎又开始转动，说明射精没有结束，应立即锁定龟头；假如阴茎软缩，说明射精结束，可结束采精。8采精后，小心地将集精杯上的过滤网去掉，防止其掉入集精杯中，将集精杯中集精袋束口，将袋口上部放在集精杯沿上，盖上集精杯盖，然后应看着公猪爬下假母猪。将精液放入采精室与实验室之间的壁厨内，然后将公猪赶回圈内。5、精液的稀释1精液稀释的目的新采集的动物精液精子浓度高，并且温度较高，精子的代谢强度大，不久就产生大量的代谢产物，并使其自身的生命耗尽。即使很短的时间内，都也许因精子的代谢产物对精子产生毒害，而使精子保存时间缩短。而用合理的稀释液稀释精液，则可给精子提供营养，中和代谢产物，并且允许精液降温，从而大大延长精子的存活时间，并能保持精子的受精能力。所以，对人工授精来说，猪精液尽快进行稀释十分重要，这也是为什么要将实验室建在采精室的隔壁的因素。此外，原精液的精子浓度大，而一次输精的总精子数仅几十个亿，只相称于几毫升到十几毫升的原精，而母猪受精时需要的总精液量又不能低于100毫升，这也是必须稀释的另一个因素。因此，精液稀释的目的是：（1）增长精液容量，以保证每头母猪输精的总精液量。（2）有助于精子的体外存活和受精能力的保持。猪精液的稀释液配方有很多种，如在常温下可保存35天的配方有BTS，Kiev、Modena等，保存57天的长效保存稀释液有ZorPVA。也有冷冻精液稀释液。最常用的稀释液为BTS稀释液。2每份精液的总精子数目前还没有一个每头份精液的最低精子数标准和体积标准，但一般认为一次输入15亿以上个精子，对受胎率和产仔数是可靠的。但也没有必要超过60亿个精子。在实际生产中，建议刚刚开展人工授精的猪场，每份精液应有5060亿个精子；假如人工授精人员技术已经纯熟，可将每份精液总精子数降到40亿。而个体人工授精站每份精液的总精子数应在2530亿。从精液的容量上讲，初配母猪一次输入精液量应为100毫升，经产母猪一次输精的精液量为120毫升。原精液的活力（大于0.6）必须合格。（1ml精液约为1克）3精液稀释相关数据的计算原精液总精子数=原精液体积（或重量）原精液精子浓度*活率（活率通常为0.91，考虑有畸形精子）原精液可分装的份数=原精液总精子数每份精液的总精子数（通常40亿）（取整数部分，不按四舍五入，而是舍去小数点后面的数）原精液稀释后的最终体积（或重量）=可分装的份数每份精液的体积（100或120ml）最大稀释的倍数最佳不超过原精液体积的10倍。举例说明：某头公猪一次采精精液的重量为230ml（或克），经测定精子浓度为1.8亿/毫升（或克），规定每份精液的总精子数为40亿，体积为100毫升（或重量100克），计算原精液稀释后最终的体积或重量。（以重量计算）总精子数=原精液体积（或重量）原精液精子浓度=2301.8= 230*1.8 =414亿（是不是尚有个活力问题？414*活力）原精液可分装的份数=原精液总精子数每份精液的总精子数=41440=10.35份实际按10份计算。原精液稀释后的最终重量=可分装的份数每份精液的重量=10100=1000克（所需的稀释液为1000-230=770克）稀释后总重量小于原精液量的10倍（即2300克），说明稀释倍数在正常范围内。特殊情况：假如精子浓度很高，则可先进行5倍左右的稀释，摇匀后，过30分钟后，再将剩余的稀释液加入，混合均匀。两次稀释后，总稀释体积也不能超过原精液体积的15倍，但不推荐这样。4稀释过程把空塑料杯或大烧杯放在电子秤上，除去皮重，然后将原精液从集精杯中提出，放入杯中，根据计算出的稀释后的最终重量，将与精液等温的稀释液缓缓加入杯中，直到重量达成最终稀释后总重量为至。如上例，原精液与稀释液的总重量应为1000克。稀释加入后，应轻轻摇动或用洁净的玻璃棒搅拌精液，使其混合均匀。精液稀释要注意以下事项：（1）精液和稀释液的温差应尽也许小或是在等温情况下进行稀释。 精液稀释关键是温度，在精液稀释前，必须使精液和稀释液尽也许等温，在温度下降到32摄氏度以前，两者的温度最多相差1。否则就也许对精子的活力产生不良影响。假如也许，在精液品质检查过程前，应将装精液的集精袋放入大烧杯，然后将其放入同一个水浴锅中，待精液品质检查完毕，一般精液的温度与稀释液温度已经很接近了。但最佳的办法是根据季节，实测采集精液的温度，以便在这个季节中，采精前，将水浴锅温度事先设定在合适的温度值上。（2）应将稀释液加入精液中，而不应当相反。（3）稀释液应尽量从低处沿杯壁流入装精液的大烧杯中，避免将稀释液从高处倒下，形成冲击。6、精液的分装精液的分装可以先稀释精液，再进行分装，也有先将鲜精根据每份的应加入的原精液量分装于精液容器中，再加入稀释液。但我们推荐第一种方法。6.1 精液分装的体积精液容器既是精液贮存的地方，又是输精时的容器。也就是说，分装时，是按每头母猪一次输精的剂量进行灌装的。精液容器种类不同，其容量也不同，一般可容纳的总体积为80毫升，100毫升，袋装精液往往能装到120毫升。从形状上可分袋装精液、瓶装精液、牙膏式管装精液等。最常用的是瓶装和袋装两种。6.2、分装方法瓶装精液较容易分装，一是它有盖，瓶口较大，二是它有刻度。将塑料杯或烧杯中上口翻卷到外壁的食品袋拉紧，然后将精液从杯嘴处向精液瓶中注入精液，直到达成相应刻度值。但是要注意，分装时精液瓶不能直接与桌面接触，下面应当垫有干燥的毛巾防止精液温度散失。瓶装精液加至刻度线后，上部仍会有一定的空间，会存留空气，对精子保存不利，可先将精液瓶盖旋上半圈，然后，轻轻挤压精液瓶，使精液上升至瓶口处，旋紧瓶盖，这样精液瓶内基本上没有空气。袋装精液分装时较为困难，假如购买昂贵的精液分装机，肯定大多数场、站不能接受。建议的分装方法是：一个有机玻璃架（分装架），顶上安装两个螺钉，用来将精液袋的两孔挂在上面，在架上有两个有机玻璃孔或金属箍用来固定漏斗使漏斗的玻璃管插入精液袋中。将分装架连同漏斗、精液袋放在电子秤上，打开电子秤，除皮，然后将精液从漏斗口加入精液袋中。当重量达成规定重量时，取下精液袋，放在热封口机上，排出空气后，封口。6.3 标记与降温稀释的精液分装后，应在输精瓶（袋）上贴上标签（也可用标记笔标记），注明分装日期、公猪号、品种、失效期。分装后，应将输精瓶（袋）放在泡沫塑料箱中，让其缓慢降温（在2225环境温度下1小时左右），大约达成20-25时，将装有分装过的输精瓶（袋）放入17摄氏度（1518）的恒温冰箱中保存。7、猪精液的保存1保存温度不应低于15，不高于20，最佳保存温度为17假如有条件应尽量使用恒温设备来保存精液，应注意不可将精液保存在普通冰箱中，由于普通冰箱冷藏室内最高温度为8，而猪的精液的最低保存温度不能低于14。也不宜将稀释后的精液保存在20以上的室温下，即使室温在1620范围内，也最佳不规定在这种环境中保存，由于室温日夜变化太大，除非24小时内就使用，否则不能在这种环境下保存。适当减少保存温度有助于延长精子的存活期，减少代谢产物对精子的伤害。但温度不可低于16，否则精子就会受到损伤。在各种动物中，猪的精子对温度的变化十分敏感，特别是低温，其因素不详。猪的精子对较高保存温度（2025）有一定的耐受力，假如保存时间在12小时内，精子活力不会受到什么影响。我们推荐的保存温度是17，上下温差不超过2。2精液稀释分装后应尽也许在72小时内使用完平时要有经常检查保存精液精子活力的习惯。假如保存时间超过48小时用前应进行活力检查，一般稀释液假如精液的保存时间超过72小时，就应废弃。应当注意的是，自精液被稀释分装保存开始，在有效的保存时间内，精子的受精能力是逐步下降的，尽管精液保存96小时，受胎率仍没有明显减少，但在72小时用完，受胎率是十分可靠的。天天隔812小时将精液摇匀一次。 在精液保存中，精子会沉淀到底部，天天应由工作人员分两次轻轻摇动或上下翻转输精瓶（袋），使精液再次混合后再放入保温箱中。3精液保存的设备（1）常规保存设备一般应使用专用的恒温冰箱，它可以保证在气温较高时制冷降温，在气温较低时加热，在供电正常的情况下全天候使用，而恒温（培养）箱通常只能在气温较低的情况下使用，高于精液保存温度的气温，则保温箱无控温能力。精液的保存环境重点是温度，应尽也许使温度在合适的范围内，保存容器应使精液不受强光的影响。没有全面开展人工授精的猪场，从其它场购回的精液，可存放在地窖中，地窖温度一般在1525。可进行精液的短期存放，但在使用前应进行精子活力的检查。（2）停电或冰箱故障的应急措施猪的精子对低温十分敏感，因此，重点要防止精液温度过低。假如恒温冰箱停电或出现故障，在适宜的室温条件下，即室温在1525内变化，可不必采用特殊措施，由于这种室温下，对精液的短期存放不会有太大影响。停电时间假如不超过3小时，一般也不会有太大问题。但假如气温高于25或低于15，则需要进行特殊解决。在冬季可将热水袋或输液瓶充入5070的热水用厚毛巾包好，放入冰箱中，使其缓慢散热；在夏季，则可用袋装冰块（可用普通冰箱制冰），同样用毛巾包好，放入冰箱中。每2小时观测一次箱内温度，使箱内温度在1620之间，假如温度不合适，应调整水温或增减外部隔热材料的厚度，以控制散热或吸热的速度。4、注意定期摇动保存过程中规定每812小时将精液混匀一次,防止精子沉淀而引起死亡。辅助知识1、如何调教公猪爬跨假母猪采精？猪人工授精规定训练公猪爬跨假母猪，以方便采精。用活台猪采精不仅不方便，受母猪是否发情的影响，并且存在一定的生物安全性问题。调教的目的是诱导公猪对的地爬跨假母猪，并进行正常的采精。1调教公猪的方法（1）公猪达成6个月龄后，一般都会有爬跨其它公猪、小母猪和一些物体的行为，这是公猪的一种特性。7个月龄开始，就可以考虑调教后备公猪爬跨假母猪采精。天天将假母猪赶进采精室，并防止公猪逃跑，敲（拍）击假母猪以诱导其爬跨，每次调教时间20分钟，一旦公猪爬跨上假母猪，采精人员应随时进行对的的采精，因此，调教公猪的人员必须采精技术十分纯熟。假如公猪没有爬跨假母猪，应将公猪赶回，第二天再进行调教。（2）假如想尽快调教成功，可将发情母猪尿或分泌物涂在假母猪的后部，然后让公猪与假母猪接触、熟悉，待其爬跨后从后侧上前采精（3）有些公猪胆小或不爱活动，可用发情母猪尿涂在布上，当将公猪赶入采精室时，让公猪嗅闻，并逐步诱导其爬上假母猪。（4）对采用以上方法调教不成功的公猪，可采用下面的方法：先将一头体格中档，发情旺盛的母猪赶入采精室，并在其背部搭上麻袋；然后将待调教的公猪赶入采精室，公猪会不久爬跨发情母猪，由两人将其抓耳拉下，公猪会再次爬跨，待其达成性高潮时，表现为暴躁、呼吸急促，这时将公猪拉下后，立即用麻袋遮住公猪眼，赶走发情母猪，将麻袋搭在假母猪上，诱导公猪爬跨假母猪。（5）对性欲较差的小公猪可先让其与发情旺盛的经产母猪进行23次本交，以激发其性欲，然后再调教其爬跨假母猪。2调教公猪爬跨假母猪应注意的事项（1）要有足够的耐心 采精员的耐心是公猪调教成功的关键，不要盼望一次调教就能成功；不要逼迫公猪爬跨假母猪；不要将公猪长时间关在采精室；不要对公猪进行各种处罚。否则，公猪对采精训练会产生厌恶，不愿进入采精室，调教难度会更大。假如第一次训练连续2030分钟，公猪仍不爬跨假母猪，应将公猪赶回圈内，第二天再进行同样的训练。（2）采精室要能防止公猪逃跑。 待调教的公猪对采精室开始不熟悉，也不能理解采精员的意图，往往总想逃出采精室。只有通过一段时间熟悉后，才会积极探索周边环境，并尝试爬跨假母猪。（3）谨慎接近公猪，保证安全。 一些性情暴躁的小公猪也许会袭击人，特别是用发情母猪诱导其爬跨假母猪时，更易产生袭击人的行为。因此，一是不要离公猪的头部太近，二是不要对着看不见公猪的方向进行操作。（4）必要时采精员亲自饲喂和管理待调教公猪。 建立人畜亲和关系是公猪调教的一个重要条件，在调教公猪前先由采精员对公猪进行一段时间的饲喂，并天天刷拭公猪体表，可以避免公猪对采精员产生好奇、恐惊、防御等行为，有助于接近公猪进行相应操作。（5）公猪爬上假母猪后从后面靠近公猪，并轻轻按摩其包皮。 这样有助于激起性反射，并排出包皮液，便于采精。（6）采精员必须操作纯熟。 不对的的采精方法往往会导致公猪巨大的痛苦，特别是用手握住公猪阴茎体部（非螺旋部分），公猪会非常痛苦而从假母猪上退下来；在采精过程，假如锁定力度不合适，可会导致公猪的不舒适；采精过程龟头脱手也都会导致公猪痛苦；假如公猪爬跨上假母猪后，因不舒适而从假母猪上退下，那么会对此后调教成功的难度会增大，但即使如此，也不能急燥冒进，要吸取教训，审查操作过程以便在下一次调教中进行相应调整。即使已经成功采精几次的小公猪，假如采精方法不妥，也会削弱已经建立起来的条件反射。所以，在公猪爬跨上假母猪后，纯熟、准确的操作，对调教成功是十分重要的。（7）采精成功后应在第二、三天同一时间反复一次 重要目的是巩固记忆，使公猪形成牢固的条件反射。3调教的年龄不同品种的公猪的性成熟时间不同，调教的最佳时机也不同，一般6.57.5月龄的小公猪较好调教。夏季公猪性机能发育较慢，在6.5月龄时也许性欲并不旺盛，应适当推迟调教时间。夏季调教公猪，应选择天天清晨天气凉爽时进行。2、采精室的设计与环境规定1.采精室的温度控制 采精室的温度应控制在1028之间。采精室最佳是一个安装有空调的房间，以使公猪的性欲表现和精液不受影响。2.物品传递应方便。 采精室最佳与解决精液的实验室只有一墙之隔，隔墙上安装一个两侧都能启动的壁厨，以便从实验室将采精用品传递到采精精室和采集的精液能尽快传递到实验室进行解决。3.应有安全区。 公猪是非常危险的动物，在采精时，工作人员不能掉以轻心，采精室设计应考虑到采精员的安全。在距采精区距外门口80100厘米处，设一道安全栏，用直径12厘米的钢管埋入地下，使高出地面7075厘米 净间距28厘米，并安装一个栅栏门。这样就形成里边的采精区和外边的安全区，栅栏门打开时，使采精室与外门形成一个通道，让公猪直接进入采精区，而不会进入安全区。当公猪进入采精区后，将栅栏门关闭，可防止公猪逃跑。一旦公猪进攻采精员，采精员可以迅速进入安全区。此外，采精室最佳有一个赶猪板，防止公猪进攻人时，采精员可用赶猪板将猪与人隔开，避免受到袭击。4.假母猪。 假母猪的台面可用钢材、木材或塑料制成，一般用钢材作支撑使其与地面保持适当距离。也可从提供设备的公司定制钢制假母猪。假母猪在设计上应尽也许考虑到公猪爬跨时的舒适性，钢制假母猪冬季会较冷，如能在表面上喷塑，就会起到一定的隔热作用，木制假母猪台面便于加工，并能根据母猪的实际体型尽也许使假母猪的表面曲线接近，并且木制假母猪冬季不凉，便于清洁。木制假母猪也许会被公猪咬损，但一般并不影响使用。塑料或玻璃钢制的假母猪台面更好。假母猪的表面最佳不要覆盖物品，由于这样易被公猪咬坏，此外，覆盖物容易藏物纳垢，在采精时，会污染集精杯。5.地面。 采精室地面要略有坡度，以便进行冲刷，水泥地面不要提浆打光，以保持地面粗糙防公猪摔倒。6.其它物品。采精室还应配备一个水槽，防滑垫，水管、扫把、毛刷等用品，用来清扫冲刷地面。3、采精中应注意的事项（1）采精时间不宜在公猪饥饿时采精，也不能在公猪饱食后立即采精，应在喂食后1.52个小时后采精（2）注意人畜安全 （1）采精员应注意安全，平时要善待公猪，不要强行驱赶，恐吓，以免引起公猪烦燥情绪和袭击行为；（2）初次训练采精的公猪，应在公猪爬上假母猪后，再从后方靠近，并握住龟头，一旦采精成功，一般都能避免公猪的袭击行为；但假如更换新的采精员，就需要更加小心；（3）平时仍应注意观测公猪的行为，并保持合适的位置关系，一旦公猪出现袭击行为，采精员应立刻逃至安全角；（4）保证假母猪的牢固，并保证假母猪上没有会对公猪产生伤害的地方，如钢管制作的踏板不能有锋利的边角。（3）要有耐心 由于采精也许花费820分钟。公猪射精完毕前，不要放松阴茎，当采集含精较多的部分后就放松阴茎是不合适的。不要催促采精过程，否则会使公猪受挫而变得危险起来。（4）采精频率要适当 应根据公猪每次射精的总精子数、公猪的年龄、每次采精的性欲表现、每次采精的射精量变化以及不成熟精子的比例，判断公猪的采精频率是否适当，并进行调整。最高采精频率为隔日一次，最佳每3天采一次精。刚刚开始采精的小公猪（8个月龄）每57天采精一次，至15月龄后，每3天采一次。两岁的公猪可根据情况，允许每2天采精一次，但仍要注意观测公猪精液及性欲的各种变化。健康公猪休息时间不得超过两周，以免发生配种障碍。若公猪患病，一个月内不准使用。（5）使公猪形成良好的条件反射 每次采精时间要固定，以形成良好的条件反射，最佳在天天的9时到10时左右采精，夏季可提前到67时。当也应寻找公猪每次采精的最佳时间。（6）注意精液卫生并防止精液温度急剧变化 （1）经常保持采精栏和假母猪的清洁干燥；（2）保持公猪体表卫生，采精前应将公猪的下腹部及两肋部污物清除，同时注意治疗公猪皮肤病如疥癣（驱虫），以减少采精时异物（碎屑）进入精液中。（3）采精前尽也许将包皮腔中的尿液排净，假如包皮液（尿液）进入精液中，可使精子死亡，精液报废。假如前一天剩有稀释液，可装在输精瓶中预温到3038，采精时，在收集精液前冲洗龟头，使龟头更洁净。（4）寒冷季节集精杯要预温以避免精子受到冷应激。（7）尽量只收集浓份精液 浓份精液通过稀释，精液容易长期在体外保存，而清亮的精液中具有激活精子代谢的成分，不利于精子保存，故应尽也许少收集。4、猪人工授精实验室的设计不管是大型的商业化或小型的家庭式的人工授精实验室，都要按最高的卫生标准设计实验室。人工授精实验室的设计规定是：1、人工授精实验室必须有相对稳定的环境，保证环境和精液不会受到微生物和化学的污染。2、人工授精实验室最佳与采精室隔壁并用一壁厨相通。3、根据需要，设计实验室的面积，一般不低于10平方米。4、实验室台面高7080厘米，台宽60厘米。台面和靠台面的墙壁50厘米高，应用无辅射的浅色光面瓷片贴成。5、实验室应安装空调，并能使室温保持在1525，配备照明设施。6、应根据精液解决的规定和所使用的设备，进行内部合理的布局，并安装带有接地线的插座约10个。7、实验室应有大于10平方米的面积，并根据实验功能进行分区：（见图）湿区进行用品清洗、稀释液配制。干区进行精液品质检查。分装区进行精液的稀释、分装、标记和保存。湿区稀释液配制与用品清洗区：1.水槽 2.蒸馏水口瓶 3.稀释液配制用品：量筒、三角瓶 4.水浴锅 5.微电脑消毒柜 干区精液品质检查区：6.消毒纸巾 7.显微镜恒温加热板控制器 8.电光源显微镜 9. 玻璃棒 10.精子密度杯 11.精子密度对照表 13. 取样器 分装区精液稀释与分装：12. 塑料杯、稀释后精液 14.恒温冰箱 15.电子秤、袋装精液分装架与漏斗 16.采精记录 17.袋装精液封口机 18.分装精液标记标签 19. 临时存放分装精液的泡沫塑料箱5、猪人工授精实验室操作规范人工授精实验室工作和人工授精操作同样，工作人员必须通过培训，并具有严格按照操作规程操作的素质，保证精子不受到危害，并能良好地进行保存。保证从实验室送出的每一份精液输精的可靠性和安全性。人工授精实验室是进行稀释液的配制、采精用品的准备、精液品质检查、精液的稀释与保存、输精前准备等工作的场合，为了生产出优质的符合输精规定的精液，一定把好质量关，保证从实验室送出的每一袋精液的活力不低于0.6，72小时内活力不受影响。1.实验室规定整洁、干净、卫生，每周彻底清洁一次；2.非实验室工作人员在正常情况下不准进入实验室，采精员也不准进入实验室，如采精员同时兼任实验室工作，则每次进入实验室时要更换衣、鞋和洗手；3.实验室工作人员每次进入实验室要更换衣、鞋，洗手，一般情况下实验室应有外间作为缓冲间，并在此更换衣、鞋；4.各种电器设备应按其规定选择适当插座，除冰箱、精液保存用的恒温冰箱外，一般电器规定人走电断，干燥箱无人值守时，设定温度不应高于80，连续通电时间在3个小时以内；规定接地的电器均应安装接地线；5.物品、器皿的清洗、消毒方法：所有接触用于输精的精液的器皿（除一次性用品外）应用对皮肤无危害性的易洗涤的清洁剂清洗，并用自来水冲净，再用蒸馏水冲洗三至四遍，空干水分。玻璃用品干燥温度为80150。多次性输精器使用后，立即用清水冲洗，不得使用热水和任何洗涤剂，冲洗后，再用蒸馏水冲洗，最后用75%的乙醇冲洗，然后放入消毒柜中80100消毒1小时。6.稀释液的配制、精液检查、稀释、分装应按照人工授精操作规程进行。7.所有接触精液的用品必须是干燥的，由于水分（低渗液）可杀死精子。8.实验室仪器设备应保持清洁卫生：实验室内使用的仪器设备，如显微镜、干燥箱、水浴锅、17冰箱、37恒温板、电子天平等，必须保持清洁卫生，显微镜头每2周应用蒸馏水浸泡擦洗一遍，保持清洁。恒温冰箱内部应每月用软布擦拭一遍，以防滋生霉菌。9.作为采精室与实验室之间的传递口的窗只有在传递物品时才干启动使用，并尽量缩短启动时间。10实验室地板、实验台保持干净清洁，天天清洁一至二次。11.下班离开实验室前一定要检查电源、水龙头、窗是否关闭好，做到万无一失方可离开实验室，保证安全。6、公猪精液的质量评估采精后应立即检查精液，没有必要每次对精子进行形态检查，但应对新公猪的最初几次射精进行形态检查。以后每月检测一次形态。假如感觉这些工作专业性太强，可将精液样品送到相关的科研部 门进行精子形态检查。精液的常规检查涉及精液的量、气味、色泽、活力和密度。（1）精液的容量通常一头公猪的射精量为150250毫升，但范围可在50500毫升之间。一般建议用电子秤称量精液的重量，由于猪的精液的比重为1.03接近于1，所以，1克精液的体积约等于1毫升。将烧杯放入一张食品袋放在电子秤上置零取出食品袋后，放入装精液的袋子，显示读数即精的克数（2）气味正常、纯净的精液只有一点腥膻味。气味异常的精液涉及：（1）精液臊味很大，精液也许受包皮液污染；（2）精液有臭味，则也许混有脓液。气味异常的精液必须废弃。（3）色泽猪的精液呈浅灰白色到浓乳白色（见右图），而公猪刚射出的浓份精液则呈奶油色（略偏黄）。异常精液有血精（呈红色）、脓精（呈绿色），均应废弃。（4）活力活力是精液中前进运动的精子所占总精子数的比例。对精子活力评估，通常只能作估测，所以需要有一定经验的技术人员进行评估。显微镜载物台应在活力检查前预热到3739，并把载玻片、盖玻片一起预热。用取样器取10或15ul精液（注意取样器的吸咀是一次性的，并用消毒纸巾擦净，再取样，以防污染精液），注在预热后的载玻片中间。并盖上盖玻片。盖盖玻片的方法是，先将盖玻片放在精液滴的左侧与载玻片形成一个角度，呈一个锐角，并向右移动盖玻片，盖玻片与精液接触时，再将盖玻片放下，这样可避免产气愤泡，影响检查结果。盖上盖玻片可以在显微镜视野里看到一薄层的精子，视野清楚，避免因不同层精子的活力不同而使判断出现人为误差。用100倍或400倍的显微镜来检测精子的活力，即判断视野中前进运动精子所占的比例。活力5级评分方法是：整个视野中有明显的大的运动波 很好 5分出现一些运动波和精子成群运动 好 4分出现成群运动 较好 3分无成群运动，部分呈前进运动 一般 2分只有蠕动差1分无精子活动0分注：运动波是指精子成群运动时，推动液体运动形成的云雾状翻滚现象。取精液滴在预温后的载玻片上盖上盖玻片后，观测精液运动状况精子运动活泼可形成运动波对稀释保存的精液，在进行精子活力评估时，一般采用十级制评分。即估测视野中前进运动精子的百分率，由于，稀释后的精液，精子的运动较容易看清，可根据前进运动精子和非前进运动精子的大体比例，来进行估计。例如，有70%的精子呈前进运动，则活力为0.7，以此类推。不管是原精液还是稀释保存的精液，假如在检查中精子的活力很差，应仔细检查每个环节，进行第二次检查，应注意吸咀、载玻片和盖玻片必须洁净，对精子无毒害，载玻片温度适宜。假如第二次检查仍很差，则精液必须废弃。（5）精子的浓度（或密度）精子的浓度是指单位体积精液所含的总精子数（通常为亿/ml）。（1）血球计数板法浓度测定精子的浓度可用血球计数板法进行测定：轻轻摇动精液，用微量移液器（取样器）取精液100微升，擦去外部精液，加入一次性试管中，用移液管吸取3%氯化钠溶液3.9毫升(即3900微升)加入精液中，混合均匀，原精液被稀释了40倍。将血球计数板放在载物台上，加盖盖玻片，用取样器吸取25微升稀释后精液加入计数板与盖玻片之间的计算室中使计算室充满（见图）。放在显微镜下找到计算室，计数计算室内的总精子数，为了减少计数的工作量，可选择有代表性的五个中方格，如四角一中心，或斜对角线的五个方格（见图用红色框标记的中方格）计数精子。为了避免计数精子时反复，应以精子的头数为准，对在格线上的精子，可依照数上不数下，数左不数右的原则，计数五个中方格中的总精子数。为计算室的一个中方格，在计数量，在右侧线和下端上的精子（为了辨认，标记为白色）是不应进行计数的精子。五个中方格总精子计数完后得出的结果，依下列公式进行计算原精子密度（此公式已被简化）：精子密度（亿个/毫升）=五个中方格总精子数0.02血球计数板法是其它光学测定方法的基础，由于光学的度数是根据光学仪器的原理得出的，与精子密度并没有直接关系，必须有已知的密度值才干获得对照表。