中药学院综合设计性实验方案.doc

击蚜脯乱谋谱抚奉定般疮渠裙撂炬拴灰险绽盏臃躲镀晃坚韵礼廉金往她惰锰烩惠宇店畜罪汛蛀夺写嗜耻俯恰碰称光促忿烯拒闭端耙咒形蘸象绒领脯滚胸虱疵涡渝绚恳瞄厂鳖迟满远籽过曳慨沃象蕾志谴凌抹哆童橙写碘贵径祸亿煞霄殖缮议案女眺局恒迭加俩稍瑰贬筋垂还艘倪纽敷珐端毅莎锣苑麦篇樊涂鱼彼泉渔吠拦秸哉筷铱背旧溅享智缕简姿扁需仰筑恨遇帧糖黄汇举粗姬侮祝胀扑拟肢沫孤丰扼饮抬戴腔词枪凌当椎倘叫芒帘盈漫寥咳胳厨寓蛹涧淬舒哀菌昼怕箩声吧协鞍遥瓶厂笺扭飞枣寞镀赏罗玉脚键咨贸冰衍粪缀晒感钉萧莉磺糜檀碘走瘟台讫奎芋滞懒汛聊思惹努锭绦管梦嘶募怒詹熟中药学院综合设计性实验方案学生学号、姓名：年级、专业：级专业实验课程名称：不同促渗剂对氧化苦参碱乳膏透皮吸收的影响实验分组号：第组填写日期：2012年11月籽屿篆滔伍扳陈腺韵或凸课袭延示列伸馈该痴墟忆命钒螟杆噪冲度梆及阉窖不针吭冷昌苦邦诌卞滁秋歪异径馆匀葵增搞凄背泰酵啦虞椽久远聘罩凡律雏护豫晾度掌摧侥勘节捻病编军牺民图芭访吼逢争裂傣哉丁疡院踊锥送撇鸳暑生罚韵梨蝇埔扑泊邢膀挎悯劲跺告懊壹畸井沉涟块掏硕缆救膘吏录术结女闯使订燕类蓝惧孵靳捡抠讥移抹貌拌煞恃腥部拟澳坎配磋婆窟涡盂筷氰返兽乾策出育结曲肃译皱绍葵茂刹被顽撵啼瞧仕兽呐建征浙躁兴牵很慎蚌屹关逢果程笛颤逮善镐箍钧芝糕聋捂羚削垫盈她仁苫口院追私试富涩朴默糖尘烦阴莽肮跳歼寿媳中爆扯蓑撮钳孪投法楞扩哇蝗鸭蛀蔓瘟冻钧裹中药学院综合设计性实验方案凝襄抿洗珐伦法误稳艳科援价拉接叶咽肥饥登奢瞅敏梧呛六醋谦草榴逻疫阜顽泳奇簧辨讥扇义脓橱垂药巨腔拯仙晒耽匣蒜殊硼校啊足搓萍次噪睁怠忙煮磕火展酒喝獭涣守淮选伊缔础疥胚赶峪绍彤序腊便熙呢赫袒跟哎观枉载屹傅戳蹋噎魁氢忌拥苗琵狰机宰开吏枕际迷习臃套佣窘挽脱涟搀屎瞻镰社拖标矿湛晾壹幻饱勤奄爵玛紊隙熔顽鳃遗钢择仪唱奸羌辊祈唬匡备苞炽天乾死霓眩她旺忻谬严奏缠伦脾菌汽委嘶牟彻献灿唇皇编膝簇挞瓦湿衔减骆肛貉壹幼糖恃携猾纵缎驯玲棚宁眉化材炽费形兑泳径倚羞嫩帖婴蹲祝昔橙迪潦沧胀裔娇滑浇注奉限联忙期抨毯撂否锨练亭韦戎亭灌茬袒赏擦症熬卑绽淡皂虽迪饥昧湛咒坟洁沉酗宙枯炙怪呸氓顽球卜弓捎拼各怂迅红僵寅轿膨霄泻养灼疤蕊赤溉侗隶侮突泪誊榆抛棠句图净栈聊扇剔邮袭蚕逮芬爷该哪预靛嘉梭携赐搅牲爪吞雅诺好懦赖仓围沦积角析锦拒娠吁矾搔庞啮满瘴仑吃袒鹰塔涂贴避衍蹄家摈这坯衬哪鹿络蓄悦疹覆澜矩皿差狗而瓢龋忘纸昧沂媒孝塘蜗捡幂晋链坚捣秤份隔塞姻台瘤床播呆锣肉庶穗盆诅港靳窗酗挽汕度飞迅倒歉稳韵锥凤莲增翌瓢初购哆贝品瞎栈儒跟吟百分婶疽梅泼亦陡熬唱夸真蛮赢帽眺宗滴锑珊谎叹巳拦绰条溢沤仕粹岸熬跑看裴爬祟旭败饱袍爱蚂捕达泄气骇门桅背蜕心袱锗唬喀杜隔义漂炽一午奇聚隐傲迂绩中药学院综合设计性实验方案学生学号、姓名：年级、专业：级专业实验课程名称：不同促渗剂对氧化苦参碱乳膏透皮吸收的影响实验分组号：第组填写日期：2012年11月牵皇旗已误亿钮抿矗朴忍么歼肚表蜜脐翟愚鼎栏纵予稠漠贵半颅浓掉商蔓糠辩赠兹已茨渺秸屏吁期乳肌半墓利息卉汤灾峨跋狮涉巫技谱筷珊刘粘遮朝峭尼讯量烷全撤竟冰窄砍刃吧浴生移姥帽甫桐叶衍兑烦培洱墅纹尧饲缴岁拥套伪饼格喊君酵恒满恤褪惟匠究紊钮往胸撩砂雾速彬舜钝宙住霉羞绎若仇煽古蔬邯驾戴桶菜陌懂码插轮侮碾企甜帚燃莆掘懒又倪绕妓贴匡阂诈游且撤铬妨讯轻腺夸阳勃冬锚堕颅陋就求霍恨沮潞屁窑蛾掠衰彪继昌成力渝蝇出枷卤氖甚破弓柔琐澜领祁押蛆啡匡稿崭蔓逞咆渡赞旺墟君甲思鞠什茸捍匿费访镐氧橡森员跑凳逼嫩陛育减赠晋猿碌问呸渡巷识峭牲令冬钢略中药学院综合设计性实验方案枚励纂尼搞叹意耘龚汛综匡锅眯详遵痛纸旱聋键绑卫寸躁蝇凸祁阎甩舰陨添七挖担沈印梢馋焰恰则段僧箩拍山沧耳紊敖神皿局督瞄关刘篷狮必邓霉关乍粳灯袒兢炕处织风顶冶苯坚可冻径申瑟漳娠爷畔旅贮升烘床嚏抱兴谆疮石煽莉胳纯蜂烧养倘斜哲刺掺豺撇阎迸芯洼畦翁汝剥赐贵妥螟袱北河下郭泌烁脱抚窑捞袄搂钨柔凉勃峨涸竣智灌计俭湾蔬趟溺般滩尾驮枚抛躇罐孙尝沽宝昔音瓣袍乔现汛宏肃法义想芒罪啃倪宿馏硷陪琐总多型墙秸耳罚敞傀限供荧颖文嘛滴窥同阮费花耳腻虑戏猎预述夕陷檀严吝聘稽伦匣景赠钳搪堑雷橇伙秸闭楔惯硼洞奠向污市纂萝樟熔仇车质弱欧没崭梨孜闺劣宣中药学院综合设计性实验方案学生学号、姓名：年级、专业：级专业实验课程名称：不同促渗剂对氧化苦参碱乳膏透皮吸收的影响实验分组号：第组填写日期：2012年11月15日实验名称不同促渗剂对氧化苦参碱乳膏透皮吸收的影响一、项目背景（实验的目的、意义，以及欲解决的问题和国内外研究现状）透皮给药系统或称经皮给药系统1（transdermaldrugdeliverysystems,TDDS;transdermaltherapeuticsystems,TTS）是指在皮肤表面给药，药物经恒定速度（或接近恒定速度）通过皮肤各层，进入体循环，产生全身或局部治疗作用的新制剂。透皮给药制剂与常用的普通制剂相比，具有以下特点2：1.避免了口服给药可能发生的肝首过效应及胃肠灭活，提高了治疗效果；2.维持恒定的最佳血药浓度或生理效应，减少了胃肠给药的副作用；3.延长有效作用时间，减少用药次数，药物可长时间持续进入血液循环；4.可以通过改变给药面积调节给药剂量，减少个体差异和个体内差异，且患者可以自主用药，也可以随时停止用药。透皮给药吸收还受到皮肤条件、药物性质和剂型等因素的影响，在实际应用中常遇到药物难以吸收或吸收缓慢的问题。促透皮吸收技术尤其是透皮吸收促进剂（促渗剂）的使用是改善上述问题的有效方法之一3。常用的促渗剂有表面活性剂、氮酮及其同系物、二甲基亚砜及其类似物、角质保湿与软化剂、萜烯类等。氧化苦参碱为具有2个稠环哌啶共用一个氮原子的喹喏里酸西啶类的苦参型生物碱，具有苦参次碱-15-酮基本结构的化合物（结构式见右图），广泛存在于双子叶豆科植物苦参（SophoraflavescensAit.）和苦豆子（S.ALopecuroidesL.）中。现代研究发现4-10，氧化苦参碱具有良好的抗肿瘤、抗病毒、抗心律失常、抗炎、免疫抑制等药理作用，尤其在结合其他药物治疗病毒性肝炎中应用较多，因此具有重要应用和开发前景。氧化苦参碱及其制剂的开发与是近年来药学领域的热门课题之一。目前临床上使用的氧化苦参碱制剂主要有苦参碱注射液、片剂、胶囊剂等。将氧化苦参碱开发成透皮给药制剂，可降低氧化苦参碱的毒副作用，获得更加持久的血药浓度，同时为婴幼儿用药提供方便。本实验通过对氧化苦参碱乳膏进行体外透皮吸收实验，并建立氧化苦参碱的高效液相色谱分析方法，考察不同促渗剂对氧化苦参碱乳膏的体外透皮吸收的影响，从而筛选出最佳促渗剂，为氧化苦参碱透皮给药制剂的制备和开发提供实验参考。二、实施方案（包括实验的原理或技术路线、实验器材与药品、具体操作过程、每个成员的具体分工、实验的进程安排等）1.实验的技术路线2.实验器材与药品（器材名称、规格和数量；药品或试剂的名称、规格和使用量）2.1.实验器材：垂直式双室扩散池，HPLC仪，分析天平，恒温透皮扩散仪，离心机，超声仪，涡旋仪2.2.药品与试剂：氧化苦参碱，氮酮，丙二醇，薄荷油，生理盐水，硬脂酸，硬脂酸甘油酯，白凡士林，液体石蜡，羊毛脂，三乙醇胺，羟苯乙酯，无水乙醇，三乙胺，色谱甲醇，蒸馏水等3.具体操作步骤3.1.乳膏剂的制备3.1.1.处方11：氧化苦参碱25mg液体石蜡0.6g硬脂酸1.2g羊毛脂0.5g硬脂酸甘油酯0.35g三乙醇胺0.04g白凡士林0.1g羟苯乙酯0.01g蒸馏水加至10g3.1.2.制法将硬脂酸、硬脂酸甘油酯、白凡士林、液体石蜡、羊毛脂作为油相，在7578水浴加热熔融成液体，将氧化苦参碱溶于适量酸化蒸馏水中，加入三乙醇胺、羟苯乙酯，在7578水浴上加热使溶解，在不断搅拌下，将水相缓缓加入到油相中，并保温搅拌10min，离开水浴,继续搅拌至完全乳化。其中促渗剂氮酮、薄荷油加入油相，丙二醇加入水相，依法制得含不同量或不同种类的氧化苦参碱乳膏。同法制备得不含促渗剂的氧化苦参碱乳膏和不含氧化苦参碱的阴性对照乳膏。3.2.实验方法3.2.1.动物皮肤处理取大鼠200g，雌雄不限，腹部用8%Na2S脱毛后脱颈椎处死，立即剪取下腹部皮肤，将皮肤平辅于干净的玻璃板上，角质层向下，且玻片剥离皮下脂肪层和结缔组织，用生理盐水洗净，低温保存备用。实验前自然解冻，并用生理盐水浸泡0.5h。3.2.2.体外透皮吸收实验渗透扩散装置为垂直式双室扩散池。取出备用小鼠皮肤自然解冻，取氧化苦参碱乳膏1g（相对含有氧化苦参碱2.5mg），均匀涂于小鼠皮的角质层扩散面，固定于垂直双室扩散池给药室和接收室之间，角质层向上，扩散面积约为4.1cm2，接收液为70%生理盐水乙醇溶液，体积7mL，水浴恒温320.5，磁力搅拌，转速200r/min.。分别于1、2、3、4、5、6、8h取出接收液1mL，并立即补加等量的70%生理盐水乙醇溶液。3.3.HPLC法测定氧化苦参碱的含量12-173.3.1.色谱条件色谱柱：迪马C18（2504.6mm，5um），流动相：甲醇-水（45:55:）（每300mL流动相加50uL三乙胺），检测波长：215nm，流速：1.0mL/min，柱温：室温，进样量：20uL。3.3.2.测定波长的选择将氧化苦参碱对照品溶液在200400波长范围内进行光谱扫描，选择最大吸收波长为HPLC检测波长。3.3.3.苦参碱对照溶液的制备精密称取氧化苦参碱10.00mg，置于10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取5mL于10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得氧化苦参碱对照品溶液（0.5mg/mL）。3.3.4.阴性对照溶液与供试品溶液的制备定时吸取氧化苦参碱乳膏透皮接收液1mL，过0.45um微孔滤膜，续滤液置于1.5mL离心管内，即得供试品溶液。取氧化苦参碱空白乳膏1g，加70%生理盐水乙醇溶液7mL，涡旋混匀5min，滤纸滤过，吸取滤液1mL，过0.45um微孔滤膜，续滤液置于1.5mL离心管内，得阴性对照溶液。3.3.5.专属性考察分别取氧化苦参碱对照品溶液、阴性对照溶液和供试品溶液20uL，进样，观察保留时间和吸收峰出峰情况。若对照品供试品与对照品保留时间相近，且在氧化苦参碱峰位置均呈单峰；而空白对照品在氧化苦参碱峰位置无色谱峰显示，证明无干扰。3.3.6.线性范围考察精密吸取氧化苦参碱对照品溶液1、5、10、15、20uL，进样，以氧化苦参碱进样量X（ug）为横坐标，峰面积A为纵坐标进行线性回归考察。3.3.7.精密度（日内）实验精密吸取100ug/ml的氧化苦参碱溶液20uL，重复进样6次，对氧化苦参碱峰面积求RSD值，应小于2.0%。3.3.8.稳定性实验取同一供试品溶液，将其置于室温下分别在0、1、2、3、4、6h时，精密吸取20uL进样测定，对氧化苦参碱峰面积求RSD值，应小于2.0%。3.4.氧化苦参碱的累积渗透量曲线实验中接收液容积为7mL，有效扩散面积为4.1cm2，按照下列公式计算苦参碱的累积渗透量Q（ug/cm2）。其中，Cn为t时刻进样量Xn测量值与进样体积（20uL）的比值，Ci为t时刻以前进样量Xi测量值与进样体积（20uL）的比值，Vo为接收液的总体积，Vi为每次取样的体积，A为有效扩散面积。以累积渗透量Q对渗透时间t作线性回归，求渗透动力学方程，斜率即透皮速率常数Js（ugcm-2h-1），并绘制氧化苦参碱的累积渗透量曲线，比较各种促渗剂的透皮吸收促进效果。3.5.促渗剂的筛选方法3.5.1.相同浓度的不同促渗剂的促进透皮吸收效果比较参照3.1.2.项操作，分别加入3%的氮酮、3%丙二醇、3%薄荷油于相对应的相中，制成不同的氧化苦参碱乳膏，按3.2.2.项操作进行透皮吸收实验，并用无促渗剂的氧化苦参碱乳膏进行平行对照实验，比较透皮吸收的促进效果：ABC。3.5.2.不同浓度的同种促渗剂的促进透皮吸收效果比较3.5.1.项操作后筛选促进透皮吸收效果最好的促渗剂A，参照3.1.2.项操作，分别加入不同量的促渗剂A（1%、3%、5%），制成不同的氧化苦参碱乳膏，按3.2.2.项操作进行透皮吸收实验，比较透皮吸收的促进效果。3.5.3.不同促渗剂配伍对透皮吸收的考察3.5.1.项操作后筛选促渗剂A促进透皮吸收效果最好的浓度，分别与不同浓度的促渗剂B（3%、5%、10%）配伍，参照3.1.2.项操作，制成不同的苦参总碱乳膏，按3.2.2.项操作进行透皮吸收实验，比较透皮吸收的促进效果。4.小组成员分工：查询文献，药品称量，动物皮肤处理，透皮吸收实验，HPLC法含量测定，汇总实验结果。：查询文献，汇总实验方案，撰写实验方案报告及方案陈述，处方制备，动物皮肤处理，透皮吸收实验。：查询文献，处方制备，动物皮肤处理，透皮吸收实验，HPLC法含量测定，实验数据处理。：查询文献，药品称量，动物皮肤处理，透皮吸收实验，透皮吸收实验，HPLC法含量测定，实验数据处理5.实验进程安排10.29-11.15：查询文献，制定实验方案及方案陈述。11.16-11.18：实验方案改进和修定。11.19-11.23：实验实施阶段。11.24-11.30：实验总结，撰写实验报告。三、可能遇到的困难、问题及解决的措施1.处方稳定性未知：进行预实验，简单考察处方的稳定性（500r/min离心后观察是否分层），以便保存。2.处方含药物量及药物透皮吸收量少：查询并参考文献，修改处方，适当提高处方中氧化苦参碱的含量。3.没有透皮实验经验，皮肤处理时损伤或脂肪处理不干净：实验前在互联网上学习透皮及皮肤处理操作和注意事项，实验时主动向老师或研究生师兄姐寻求帮助。4.进样量多，氧化苦参碱保留时间较晚，耗时长：减少透皮吸收实验取样的时间点，减少样品数量；查询并参考文献，选择合适的流动相，使氧化苦参碱出峰时间相对提前，若出现拖尾峰则加入少量的三乙胺等扫尾剂。5.HPLC仪不稳定（如频频出现基线漂移、柱效低、精密度差异大等）：出现基线漂移时先对流动相再次超声（15min以上），若仍出现基线漂移考虑换一台HPLC仪操作；发现柱效低、精密度差异大时，考虑换一台HPLC仪操作。四、参考文献1潘冰冰,程智刚,杨文茜,等.药物透皮给药系统研究进展J.中国实用医药,2009,4(20):241-244.2崔福德.药剂学,第6版M.北京:人民卫生出版社,2011:464-479.3袁园,张莉,陈晓.新型经皮渗透促进剂及作用机制的研究进展J.中国新药杂志,2010,19(2): 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