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医疗器械产品无菌检测方法

(第00版)

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年 月 日 发布 年 月 日 实行

1. 目的
建立无菌检测标准规程，对灭菌后的医疗器械产品进行无菌检测，以拟定灭菌的有效性。
2. 范围
本规程合用于本公司对医疗器械产品的无菌检测。
3. 依据
《中国药典》2023版二部
4. 设备、器皿、药品的准备
4.1 设备的准备
电子天平、干热灭菌箱、高压灭菌箱、洁净工作台、放大镜、移液枪、电热培养箱、霉菌培养箱、冰箱、斜口钳、接种环、酒精灯
4.2 器皿的准备
锥心瓶（500ml）、烧杯（1000ml）、试剂瓶（60ml）、量筒（50ml、1000ml）、培养皿（Ф90mm×15mm）、斜口钳、玻璃棒。
4.3 药品的准备
硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁琼脂培养基、纯化水、pH7.0 无菌氯化钠溶液。
5. 器皿的清洗
将所需的锥形瓶、烧杯、试剂瓶、培养皿、玻璃棒放入超声波清洗机中用纯化水清洗两次，每次15分钟，将清洗完的器皿在180℃条件下进行干热灭菌2小时。
6. 取样
按灭菌批次或者生产批次进行取样，随机抽取同一型号的产品4件作无菌检测样品
7. 培养基的制备
7.1 硫乙醇酸盐流体培养基的制备
取15g硫乙醇酸盐流体培养基和500ml纯化水于烧杯中混合，加热至微沸（注意加热过程中要不断地搅拌，使其混合均匀）用棉花塞塞紧复用无尘布和绳子绑好后转移至高压灭菌锅内灭菌，灭菌温度为121℃，灭菌时间30分钟。灭菌后摇均，冷却至45℃待用。
7.2 改良马丁培养基的制备
取21g改良马丁培养基粉末和500ml纯化水于烧杯中混合，操作方法同6.1。
8. 培养基灵敏度检查
8.1 菌种的规定
培养基灵敏度检查所用的菌株（金黄色葡萄球菌、白色念珠菌）传代次数不得超过5代。
8.2 菌液的制备
接种金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基上，30-35℃培养24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基上，23-28℃培养24小时。
将上述经24小时培养后的培养物用0.9﹪无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu(菌落形成单位)的菌悬液。制备好的菌液应在2-8℃条件下保存，并在24小时内使用。
8.3 接种及培养
取每管装量12ml的硫乙醇酸盐流体培养基3支，其中2支接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌，另一支不接种作为空白对照，30-35℃培养3天逐日观测并记录。
取每管装量9ml的改良马丁琼脂培养基3支，其中2支接种小于100cfu的白色念珠菌，另1支不接种作为空白对照，23-28℃培养5天，逐日观测记录。
8.4 灵敏度检测结果判断
空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基试管菌落均生长良好，则鉴定该培养基的灵敏度检查符合规定。
9. 供试品的无菌检测
9.1 对照实验
取每管装量12ml的硫乙醇酸盐流体培养基3支，接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌，另一支不接种作为空白对照，30-35℃培养14天逐日观测并记录。
取每管装量9ml的改良马丁琼脂培养基3支，其中2支接种小于100cfu的白色念珠菌，另1支不接种作为空白对照，23-28℃培养14天，逐日观测记录。
9.2 供试品的准备及接种
于微生物实验室超净工作台内将样品剪成小碎段（2～3cm）,其中2件接种于各培养皿足以浸没供试品的适量硫乙醇酸盐流体培养基中，此外2件接种于各培养皿足以浸没供试品的适量改良马丁琼脂培养基中，冷却。
9.2 培养
将接种过的硫乙醇酸盐流体培养基的培养皿倒置于电热培养箱中30～35℃条件下培养14天，逐日观测是否有菌落生长并记录；
将接种过的改良马丁琼脂培养基的培养皿倒置于霉菌培养箱中23～28℃条件下培养14天，逐日观测是否有菌落生长并记录。
10. 供试品无菌检测结果鉴定
若上述接种后的培养基经14天培养后均无菌落生长，则可鉴定供试液为无菌，即为合格；反之，则为不合格。
11. 检测频次
外包灭菌产品的无菌验证应每年做一次，并以最难灭菌产品的无菌检测为准；外包灭菌产品的无菌检测按灭菌批次随机取样检测，每月一次
12. 无菌检测报告（见附表1）
13. 文献版本修改记录（见附表2）

无菌检测报告
WIL/QR 6.4—13
NO：
检测依据
《中国药典》2023版 二部
检测日期

样品数量
4
样品批号

样品名称

样品规格

培养基的灵敏度检测
硫乙醇酸盐流体培养基（培养3天）
改良马丁培养基（培养5天）
培养天数
接种金黄色葡萄球菌
接种金黄色葡萄球菌
空白
接种白色念珠菌
接种白色念珠菌
空白
1

2

3

4

5

结论：

日期：
供试品的无菌检测
培养天数
硫乙醇酸盐流体培养基（培养14天）
改良马丁培养基（培养14天）
金黄色葡萄球菌
样品1
样品2
空白
白色念珠菌
样品3
样品4
空白
1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

结论：

报告日期：
备注
“+”表达有菌生长；“-”表达无菌生长；
培养基的灵敏度检测中空白实验应无菌生长，接种过菌液的应生长良好，否则培养基不合格；
在培养基灵敏度检测合格的前提下，若供试品的无菌检测中接种过菌液的应生长良好，空白实验和样品的检测应无菌生长；否则供试品的无菌检测不合格。
检测者

复核者