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香砂养胃片中甘草薄层鉴别研究

摘要：目的：优化香砂养胃片的质量控制方法,为提升其质量控制标准提供试验依据。方法: 以硅胶G板为薄层板；甘草为对照药材；以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15:1:1:2)为展开剂展开，在105°C加热至斑点显色淸晰，在自然光下和在紫外光灯（365nm）下检视，并对其进行方法学考察。结果：供试品色谱在与甘草对照药材相同的位置上，有清晰的黄色斑点，阴性无干扰；在与甘草对照药材相同的位置上，有清晰的黄色荧光斑点，阴性无干扰；背景干扰较小。结论：通过对该方法进行专属性、重现性、耐用性的验证，本方法阴性无干扰，方法重现性好、耐用性良好，可以用该方法对香砂养胃片中甘草进行质量控制。
关键词：香砂养胃片 薄层鉴别 甘草 方法学考察
1．仪器与材料
1.1 样品
甘草阴性样品：云南白药集团股份有限公司自行制备
供试品：香砂养胃片3批，批号：云南白药集团股份有限公司生产，批号：DA1804、BA1606、EA1904，由云南白药集团股份有限公司提供
甘草对照药材,批号：120904-201519，由中国食品药品检定研究院提供
所用试剂均为分析纯，试验用水为纯化水。
1.2 方法选择
照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法进行，该方法是参照《中国药典》2015版一部中甘草薄层色谱鉴别方法，进行了试验而确定的。
1.2.1供试品溶液的制备曾进行了以下方法比较：
方法1：取本品8片，研细，加甲醇25ml，超声30分钟，滤过，滤液在水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材1g，加水适量，煎煮30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至20ml, 用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml, 合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次10ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml 使溶解，作为对照药材溶液。吸取上述供试品溶液10μl与上述对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（40:10:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
下图分别为置日光和紫外光灯（365nm）下检视。
试验结果：从色谱图可见，该方法色谱图中供试品杂质斑点较多，虽然与甘草对照药材色谱相同位置处，有相同颜色的斑点，但背景干扰较大，故该方法不能用于甘草鉴别。
1.2.2方法2：供试品溶液制备方法不变，调整展开剂为正丁醇-冰醋酸-水（7：1：0.5）做为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯（365nm）下检视。
试验结果：从薄层色谱图可见，在日光和紫外光灯（365nm）下检视，由于杂质斑点影响，甘草斑点不明显，阴性有干扰，背景干扰大，故本方法不适用于甘草薄层鉴别。
1.2.3方法3：取本品8片，研细，加乙醇20ml，超声20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用水 20ml 溶解，加盐酸调pH值至2～3，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml, 合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照品溶液。另取甘草对照药材1g，加水适量，煎煮30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至20ml，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml, 合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次10ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml 使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，，以三氯甲烷-甲醇-水（40:10:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光灯和紫外光检视。
试验结果：从薄层色谱图可见，在日光和紫外光灯（365nm）下检视，主斑点附近存在杂质斑点影响，故本方法不适用于甘草薄层鉴别。
1.2.4方法4：取本品8片，研细，加乙醚40ml，加热回流1小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇30ml,加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液,用水洗涤3次,弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材lg，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取供试品溶液10μl，对照药材溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15:1:1:2)为展开剂，展开，取出，晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色淸晰。[3]分别置日光和紫外光灯（365nm）下检视。
试验结果：分别在自然光和紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与甘草对照药材相同的位置上，3批样品均有清晰的黄色斑点或黄色荧光斑点，阴性无干扰，背景干扰较小。
结论：该方法分离度较好，系统适用性良好，专属性满足要求，可适用于甘草薄层鉴别。
2.重现性
取15批样品的测试：参照方法4，使用15批香砂养胃片进行测试。
试验结果：分别在自然光和紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与甘草对照药材相同的位置上，15批样品均有清晰的黄色斑点或黄色荧光斑点，阴性无干扰，背景干扰较小。说明该方法可适用于不同批次样品。
3.方法耐用性
3.1参照方法4，本项下通过更换展开剂比例，观察实验结果。标准展开剂为：乙酸乙酯-甲酸-冰醋
酸-水（15:1:1:2)。因增加展开剂中水的比例，展开剂较为浑浊，未进行相关实验。
展开剂1：乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（20:1:1:2)，
展开剂2：乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15:1:1:1)，
展开剂3：乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（13:1:1:2)。
试验结果：三种展开剂结果除Rf值略有不同，但在自然光和紫外光灯（365nm）下分别检视，供试品色谱中，在与甘草对照药材相同的位置上，3批样品均有清晰的黄色斑点或黄色荧光斑点，阴性无干扰，背景干扰较小。
3.2更换不同品牌薄层板
以上均采用默克公司硅胶G板，现更换为国产青岛海洋硅胶G板进行测试。参照方法4，结果如图

图1日光下的结果图2紫外光灯下的结果
其中：S1-S5为香砂养胃片（云南白药集团股份有限公司生产，批号：AA1612、LA1802、FA1806、GA1901、KA1905），S5为甘草阴性样品（制备同1.21），S4为甘草对照药材。
试验结果：分别在自然光和紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与甘草对照药材相同的位置上，5批样品均有清晰的黄色斑点或黄色荧光斑点，阴性无干扰，背景干扰较小。说明该方法可适用于不同品牌的硅胶G薄层板。
4.通过对该方法进行专属性、重现性、耐用性的验证，本方法阴性无干扰，方法重现性好、耐用性良好，可以用该方法对香砂养胃片中甘草进行质量控制。
参考文献：
1. 中成药地方标准上升国家标准部分(内科 脾胃分册)WS-10392(ZD-0392)-2002
2. 《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法
3. 《中国药典》2015年版一部甘草薄层鉴别项目

-全文完-