江苏省蛇类新纪录——东亚腹链蛇.pdf

Chinese Journal of Wildlife 2024，45（1）：216-221Chinese Journal of Wildlifehttp：/江苏省蛇类新纪录东亚腹链蛇叶琳1，朱文启2，章铁睿3，虞磊4，高国富1，包浩然1*（1.南京农业大学生命科学学院，南京，210095；2.南京八三医院，南京，211131；3.安徽师范大学生命科学学院，芜湖，241000；4.安徽大学生命科学学院，合肥，230601）摘 要2022 年 79 月，在江苏省宁镇山脉的南京汤山（32359 N，11912 E；海拔179 m）和句容市宝华山（32740 N，119533 E；海拔 288 m）共采集到蛇类标本 5号。通过形态学比对和分子系统学分析，确认标本均为水游蛇科（Natricidae）东亚腹链蛇属（Hebius）东亚腹链蛇 H.vibakari（Boie，1826），为江苏省蛇类分布新纪录，也是本种在长江以南地区的首次发现。A New Snake Distribution Record of Hebius vibakari in Jiangsu Province，ChinaYE Lin1，ZHU Wenqi2，ZHANG Tierui3，YU Lei4，GAO Guofu1，BAO Haoran1*（1.College of Life Science，Nanjing Agricultural University，Nanjing，210095，China；2.Nanjing Eight-three Hospital，Nanjing，211131，China；3.College of Life Science，Anhui Normal University，Wuhu，241000，China；4.College of Life Science，Anhui University，Hefei，230601，China）稿件运行过程收稿日期：2023-09-06修回日期：2023-09-25关键词：东亚腹链蛇；新分布纪录；系统发生分析；江苏省；宁镇山脉Key words：Hebius vibakari；New distribution record；Phylogenetic analysis；Jiangsu Province；Ningzhen Mountain Range中图分类号：Q958.1文献标识码：A文章编号：2310-1490（2024）-01-0216-06DOI：10.12375/ysdwxb.20240129基金项目：南京市生物多样性本底调查及相关配套服务项目（JSGC21G6208）第一作者简介：叶琳（2001），女，本科生。E-mail：*通信作者：包浩然，E-mail：叶琳等：江苏省蛇类新纪录东亚腹链蛇第1期Abstract：Five snake specimens were collected at Nanjing Tangshan（323 59 N，1191 2 E；Alt.179 m）and Jurong Baohua Mountain（327 40 N，1195 33 E；Alt.288 m）in Ningzhen Mountain Range of Jiangsu Province from July to September 2022.The specimens were identified as Hebius vibakari（Boie，1826）（Natricidae，Hebius）based on morphological comparison and molecular phylogenetic analysis.H.vibakari is a new record of snake distribution in Jiangsu Province and also the first discovery of this species in the south region of Yangtze River.东亚腹链蛇 Hebius vibakari（Boie，1826）隶属于水游蛇科（Natricidae）东亚腹链蛇属（Hebius），于1826年命名，模式产地为日本1。全球目前已知的东亚腹链蛇属共有49种25，广泛分布于亚洲东部、南部及东南部地区。东亚腹链蛇属在江苏省仅有锈链腹链蛇（H.craspedogaster）1种，19531964年采集自宜兴69，隶属于宜溧低山丘陵区系9。2021年6月，研究人员在开展南京市陆生脊椎动物调查时，于南京汤山一静水塘（32359 N，11912 E；海拔179 m）旁首次拍摄到东亚腹链蛇属物种的影像，根据口角白色圆斑初步推断为东亚腹链蛇。此后，多次在同区域及周围搜寻，均未能再次发现。2022 年 79 月，研究人员在汤山及邻近区域获取 5号东亚腹链蛇属标本，经形态学鉴定和分子系统学分析，确认标本均为东亚腹链蛇，为江苏省蛇类新纪录，也是本种在长江以南地区的首次发现。1研究方法1.1试验材料2022年 79月，在句容市宝华山（32740 N，119533 E；海拔288 m）及南京汤山地区（孔山、石门埝、连山和干山）共获取5号蛇类标本，分别为3号活体标本（NAUH220901、NAUH220902 和 NAUH220903）以及 2 号路杀标本（NAUH220701、NAUH220904），活体中包括1条初孵幼蛇（NAUH220903）。取路杀标本的肌肉组织，取活体标本的蛇蜕固定于95%乙醇中，置于-20 保存，供后续分子鉴定。1.2形态数据测量参考 中国蛇类6中对东亚腹链蛇属的形态特征描述，测量分析 12 个形态学指标，包括头体长（snout-vent length，SVL）、尾长（tail length，TL）、背鳞行数（dorsal scale rows，DSR）、腹鳞（ventral scales，VS）、尾下鳞（subcaudal scales，SC）、肛鳞（anal）、上唇鳞（supralabial，SpL）、下唇鳞（infralabial，IfL）、颊鳞（loreal）、眶前鳞（preocular，Pre）、眶后鳞（postocular，Pos）和颞鳞（temporal，T）。全长（total length，ToL）为头体长和尾长之和。上述数据中，头体长、尾长均使用电子游标卡尺测量，精确到0.01 mm。1.3系统发生分析取20 mg保存在无水乙醇中的标本腹壁肌肉样本或新鲜蛇蜕作为DNA提取样品，使用DNA试剂盒（FastPure Cell/Tissue DNA Isolation Mini Kit-BOX1）提取样本基因组DNA。使用引物L14919（5-AACC-ACCGTTGTTATTCAACT-3）和 H16064（5-CTTTGG-TTTACAAGAACAATGCTTTA-3）10扩增样品的Cyt b基因片段。PCR扩增体系为50 L，反应程序：94 预变性5 min；94 变性30 s，48 退火60 s，72 延伸80 s，35个循环；72 终延伸10 min，4 保存。琼脂糖凝胶电泳后切胶，使用试剂盒（FastPure Gel DNA Extraction Mini Kit）进行胶回收和纯化，将纯化后的PCR产物进行测序，并提交到GenBank数据库（登录号为 OR503047OR503051）。从 GenBank 数据库下载同属19个物种的Cyt b基因序列，选取平头腹链蛇（Herpetoreas platyceps；KJ685690、MW111464、MT571587）、察隅腹链蛇（H.burbrinki；MZ358098）、墨脱腹链蛇（H.tpser；OM313292、MK201567）以及 草腹链蛇（Amphiesma stolatum；KJ685694）作为外群。使用 IQ-TREE v2.2.2.7 搜索最适碱基替代模型，并使用最大似然法（maximum likelihood，ML）构建 系统发生树，Bootstrap重复1 000次，并用ChiPlot11做系统发生树可视化处理。使用 MEGA 11 中的 p-distance模型计算上述东亚腹链蛇属物种间的遗传距离。217野 生 动 物 学 报第45卷2结果2.1形态特征描述标本头、体背面褐绿色，两侧具红褐色不连续纵纹，其中夹杂黄白色小斑；体尾背面呈褐色（图1A、B）。头腹面及尾腹面为黄白色，体腹面为乳黄色，每个腹鳞边缘具短小黑色斑，整体形成“腹链”状斑纹（图1C）。头部为长椭圆形，头颈可区分（图1D、E）。瞳孔圆形；头背绿褐色，杂有黑色和红褐色斑，枕部两侧有1对细长的红褐色枕斑，弯向颈背，左右几乎相接（图1D）；上、下唇鳞多呈白色，其后缘色深，第 4枚上唇鳞往往黑色区域过半，第6枚上唇鳞为深褐色（图1F、G）；口角处有1近白色椭圆斑，稳定出现在最后1枚上唇鳞中（图1A、F、G）。采 集 的 5 号 标 本 中，NAUH220701 不 完 整，NAUH220903为当年初孵幼体，其余3号成体全长为421.60495.81 mm（平均值为465.32 mm），尾长占全 长 平 均 值 的 26.36%。由 于 NAUH220701 和NAUH220904破损较为严重，因此部分鳞片数据未参与统计。其余标本背鳞数均为19-19-17行；腹鳞135154 枚；尾下鳞 7477 对；肛鳞二分；上唇鳞 7枚，2+2+3式，稀见8枚（3+2+3式）；下唇鳞79枚，且左右常不对称；颊鳞1枚（表1）。上述测量结果均符合东亚腹链蛇的形态特征6。2.2分子系统学分析线粒体 Cyt b 基因同源序列比对获得长度为 1 039 bp的数据集。最适碱基替代模型经搜索确定为 TIM2+F+I+G4。在基于最大似然法（ML）构建的系统发生树中（图2），本研究的5号标本先依次与江西东亚腹链蛇属未定种（KJ685683；支持率51%）和安徽东亚腹链蛇相聚（OP573253；支持率 99%），后与东亚腹链蛇大陆亚种（Hebius vibakari ruthveni）的分支聚类（支持率96%），之后再与东亚腹链蛇指名亚种（H.v.vibakari）的分支聚类（支持率100%）。整个东亚腹链蛇的分支再逐次与桑植腹链蛇（H.sangzhiensis；支持率99%）、华西腹链蛇（H.maximus；支持率100%）等相聚。分子系统学的分析结果支持上述基于形态学的判断，提示本研究采集自江苏省宁镇表1东亚腹链蛇形态学特征Tab.1 Morphological characters of Hebius vibakari标本号Voucher No.产地Source of specimen头体长/mm SVL尾长/mm TL全长/mm ToL尾长/全长TL/ToL背鳞行数 DSR腹鳞/枚 VS尾下鳞/对 SC肛鳞/枚 Anal上唇鳞/枚 SpL下唇鳞/枚 IfL颊鳞/枚 Loreal眶前鳞/枚 Pre眶后鳞/枚 Pos颞鳞/枚 TNAUH220901孔山358.98136.83495.810.27619-19-171357428（3+2+3）L7（2+2+3）R1231+3 L1+1+3 RNAUH220902石门埝353.77124.77478.540.26119-19-171547527（2+2+3）7（4）L8（4）R1221+0+2NAUH220903连山157.1468.03225.170.30219-19-171527727（2+2+3）71121+1+2NAUH220904干山314.26107.34421.600.2541526229（4）L8（4）RAHULJ21082212安徽庐江2881294170.30919-19-171508027（2+2+3）8（4）1231+1CIB74512113吉林3511074580.23419-19-171506222+1/2+37（4）131+1（2）注：L、R 分别代表左、右侧鳞片数据。Note：L and R represent left and right scales data，respectively.218叶琳等：江苏省蛇类新纪录东亚腹链蛇第1期山脉的蛇类标本为东亚腹链蛇。基于 p-distance模型估算的江苏省宁镇山脉东亚腹链蛇属标本与东亚腹链蛇的遗传距离为 03.9%（平均值为2.2%），与近缘种桑植腹链蛇和华西腹链蛇的遗传距离分别为6.0%6.3%（平均值为6.1%）和7.0%7.5%（平均值为7.2%）；而与其他东亚腹链蛇属物种的遗传距离均大于8.9%。综上所述，分子系统发生分析和遗传距离结果均支持本研究中的东亚腹链蛇属标本为东亚腹链蛇。A.正背侧面；B.体背；C.体腹；D.头背；E.头腹；F.头部右侧；G.头部左侧。A.General view；B.Dorsal of body；C.Ventral of body；D.Dorsal of head；E.Ventral of head；F.Right lateral of head；G.Left lateral of head.图1采集自江苏省宁镇山脉的东亚腹链蛇（标本号：NAUH220902）Fig.1 Hebius vibakari collected from Ningzhen Mountain Range of Jiangsu Province（Voucher No.NAUH220902）219野 生 动 物 学 报第45卷2.3生态习性宁镇山脉是位于长江中下游平原丘陵地带的一条弧形山脉，西起南京，东达镇江，是江苏省长江以南地区的重要山脉。本研究中的东亚腹链蛇标本均采集于宁镇山脉，采集生境多为常绿阔叶林中的水塘、水库及灌丛附近，林下多落叶等腐殖质。采集地同域分布的蛇类物种有短尾蝮（Gloydius brevicaudus）、中国小头蛇（Oligodon chinensis）、赤链蛇（Lycodon rufozonatus）、王锦蛇（Elaphe carinata）、黑眉锦蛇（E.taeniura）、双斑锦蛇（E.bimaculata）、紫灰锦蛇（Oreocryptophis porphyraceus）、翠 青 蛇（Cyclophiops major）和乌梢蛇（Ptyas dhumnades）等。实验室饲养结果表明，东亚腹链蛇偏好取食鲢鱼苗、鳑鲏和青鳉等小型鱼类，较排斥取食蛙类蝌蚪，其食鱼习性与东北地区东亚腹链蛇13基本吻合。具体野外食性如何，是否取食同域分布的东方蝾螈（Cynops orientalis）幼体等，还有待后续野外调查监测。图2基于线粒体Cyt b基因序列构建的东亚腹链蛇属部分物种的最大似然树Fig.2 The maximum likelihood tree of partial species of genus Hebius based on mitochondrial Cyt b gene sequences220叶琳等：江苏省蛇类新纪录东亚腹链蛇第1期3讨论东亚腹链蛇的地理分布范围包括日本（本州、九州、四国、伊豆大岛和男女群岛）、朝鲜半岛和俄罗斯远东地区1，1415，国内分布于东北地区6，13和安徽省大别山区12，在 中国生物多样性红色名录 中列为易危级（VU）16。本研究中的江苏省宁镇山脉东亚腹链蛇标本背鳞数均为19-19-17行，与近缘种桑植腹链蛇相同，而与华西腹链蛇背鳞数 17-17-17 行可明显区分。本种最后1枚上唇鳞中的近白色椭圆斑，是其与同属其他物种区分的关键形态特征。NAUH220901与NAUH220902标本前颞鳞形态差异较大，前者较宽，后者较窄，这可能是个体间的形态差异。本文报道江苏省宁镇山脉发现东亚腹链蛇，系江苏省蛇类分布新纪录，也是中国长江以南地区的首次记录，采集到东亚腹链蛇幼体也表明该区域有稳定的野外繁殖种群。本研究进一步补充了东亚腹链蛇的形态描述，丰富了该物种的地理分布信息。东亚腹链蛇在传统意义上属于古北种，本次在长江以南地区被发现，暗示本种可能属于广布种，在安徽省长江以南地区、江西省和浙江省等地均可能有分布；同时推测该物种在整个宁镇山脉的东、西侧及附近山系均有分布，有待深入调查研究。在后续研究中，应综合种群遗传学和谱系地理学方法，揭示东亚腹链蛇的亚种、地理居群的谱系分化规律和时空演化格局，为探讨该物种的种群扩散、分化机制和地理格局形成积累资料。致谢：中国药科大学陆耕宇和南京大学高凡提供部分研究标本。参考文献：1 BOIE H.Merkmale einiger japanischer Lurche M/LORENZ O.Isis von Oken.Jena：Expedition der Isis，1826：203-216 2023-09-06.https：/www.biodiversitylibrary.org/page/27510759.2 ZHOU Z Y，SUN Z Y，QI S，et al.A new species of the genus Hebius（Squamata：Colubridae：Natricinae）from Hunan Province，China J.Zootaxa，2019，4674（1）：68-82.3 DAVID P，VOGEL G，NGUYEN T Q，et al.A revision of the dark-bellied，stream-dwelling snakes of the genus Hebius（Reptilia：Squamata：Natricidae）with the description of a new species from China，Vietnam and Thailand J.Zootaxa，2021，4911（1）：1-61.4 HOU S B，YUAN Z Y，WEI P F，et al.Molecular phylogeny and morphological comparisons of the genus Hebius Thompson，1913（Reptilia：Squamata：Colubridae）uncover a new taxon from Yunnan Province，China，and support revalidation of Hebius septemlineatus（Schmidt，1925）J .Zoological Research，2021，42（5）：620-625.5 LI M L，REN J L，HUANG J J，et al.On the validity of Hebius sauteri maximus（Malnate，1962）（Squamata，Natricidae），with the redescription of H.maximus comb.nov.and H.sauteri（Boulenger，1909）J.Herpetozoa，2022，35：265-282.6 赵尔宓.中国蛇类：上 M.合肥：安徽科学技术出版社，2006：160-176.ZHAO E M.Snakes of China：M.Hefei：Anhui Science&Technology Publishing House，2006：160-176.7 黄 松.中 国 蛇 类 图 鉴：下M.福 州：海 峡 书 局，2021：392-426.HUANG S.Sinoophis：M.Fuzhou：The Straits Publishing House，2021：392-426.8 邹寿昌，陈才法.江苏省（含上海市）爬行动物区系及地理区划J.四川动物，2002，21（3）：130-135.ZOU S C，CHEN C F.Reptile fauna and zoogeographic division of Jiangsu（including Shanghai Municipality）J.Sichuan Journal of Zoology，2002，21（3）：130-135.9 周开亚.江苏爬行动物地理分布及地理区划的初步研究 J.动物学报，1964，16（2）：283-294.CHOU 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