盆炎净口服液治疗大鼠盆腔炎性疾病后遗症的作用机制.pdf

实验研究CHINESE COMMUNITY DOCTORS中国社区医师2024年第40卷第3期中国社区医师2024年第40卷第3期盆炎净口服液治疗大鼠盆腔炎性疾病后遗症的作用机制刘燕闫晓钰田永衍(通信作者)734000河西学院，甘肃 张掖doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2024.03.002摘要目的：分析盆炎净口服液治疗大鼠盆腔炎性疾病后遗症(SPID)的作用机制。方法：选取SPF级SD雌性大鼠60只，依据随机数字表法分为6组，分别为正常组、模型组、康妇炎组及治疗高、中、低剂量组，各10只。除正常组外，其余各组采用苯酚胶浆法复制SPID大鼠模型，康妇炎组接受康妇炎治疗，治疗高、中、低剂量组接受不同剂量的盆炎净口服液治疗，比较各组一般情况、子宫情况、相关因子水平及蛋白表达情况。结果：各组子宫重量系数比较，模型组治疗低剂量组治疗中剂量组康妇炎组治疗高剂量组正常组，差异有统计学意义(P0.05)。治疗高、中、低剂量组及康妇炎组子宫及其周围组织粘连与纤维化轻于模型组。康妇炎组、治疗中剂量组、治疗高剂量组肿瘤坏死因子(TNF-)、白细胞介素-6(IL-6)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)水平低于模型组，治疗低剂量组与治疗中剂量组高于康妇炎组，治疗高剂量组TNF-、IL-6、ICAM-1水平低于治疗低剂量组与治疗中剂量组，差异有统计学意义(P0.05)。康妇炎组、治疗中剂量组、治疗高剂量组抑制性 B 激酶 蛋白表达量低于模型组，差异有统计学意义(P0.05)。结论：盆炎净口服液治疗大鼠SPID效果显著，可通过抑制TNF-、IL-6、ICAM-1的释放减轻SPID大鼠炎性反应，改善子宫及其周围组织的粘连与纤维化。关键词盆炎净口服液；盆腔炎性疾病后遗症；核因子B信号通路中图分类号R285.5文献标识码AMechanism of Penyanjing Oral Liquid in Treating Sequelae of Pelvic Inflammatory Diseases in RatsLiu Yan,Yan Xiaoyu,Tian Yongyan(corresponding author)Hexi College,Zhangye 734000,Gansu Province,ChinaAbstractObjective:To analyze the mechanism of Penyanjing oral liquid in treating the sequelae of pelvic inflammatory disease(SPID)in rats.Methods:A total of sixty SPF SD female rats were selected and divided into 6 groups according to random numbertable method:normal group,model group,Kangfuyan group and high,medium and low dose treatment groups,with ten rats each.Except the normal group,the SPID rat model was replicated by phenol paste method in other groups,and Kangfuyan group wastreated with Kangfuyan.High,medium and low dose groups were treated with different doses of Penyanjing oral liquid.Thegeneral condition,uterine condition,levels of related factors and protein expression of all groups were compared.Results:Theuterine weight coefficient of all groups was compared,model group low dose treatment group medium dose treatment group Kangfuyan group high dose treatment group normal group,the difference was statistically significant(P0.05).Compared withthe model group,the adhesion and fibrosis of uterus and its surrounding tissues were slight in the high,medium and low dosegroups and the Kangfuyan group;The levels of tumor necrosis factor(TNF-),interleukin-6(IL-6)and intercellular adhesionmolecule-1(ICAM-1)in Kangfuyan group,medium dose group and high dose group were lower than those in model group,thelevels of TNF-,IL-6 and ICAM-1 in low dose and medium dose groups were higher than those in Kangfuyan group,the levelsof TNF-,IL-6 and ICAM-1 in high dose group were lower than those in low dose group and medium dose group,andthe differences were statistically significant(P0.05);The inhibitory B kinase(IK)protein expression in Kangfuyangroup,medium dose group and high dose group was lower than that in model group,and the difference was statisticallysignificant(P0.05).Conclusion:Penyanjing oral liquid has a remarkable effect on SPID in rats,and can reduce the inflammatoryresponse of SPID rats by inhibiting the release of TNF-,IL-6 and ICAM-1,and improve the adhesion and fibrosis of uterus andits surrounding tissues.Key wordsPenyanjing oral liquid;Sequelae of pelvic inflammatory disease;Nuclear factor kappa B signaling pathway盆腔炎性疾病是妇科常见病，若未及时治疗可发展为盆腔炎性疾病后遗症(SPID)1。临床治疗 SPID以抗生素控制感染为主，并结合微波、红外线等治疗手段2。康妇炎胶囊具有清热解毒、化瘀、除湿止带作用，为中医治疗SPID的常用药物3。盆炎净具有清热利湿、和血通络、调经止带的功效。本研究旨在4实验研究CHINESE COMMUNITY DOCTORS中国社区医师2024年第40卷第3期中国社区医师2024年第40卷第3期分析盆炎净口服液治疗大鼠SPID的作用机制，现报告如下。材料与方法实验动物：雌性未孕健康SPF级别SD大鼠60只，平均体质量(20020)g，购自中国农业科学院兰州兽医研究所(许可证号：SCX(甘)2020-002)。药物与试剂：盆炎净口服液(生产厂家：杨凌科森生物制药有限责任公司；批准文号：国药准字Z20050698)，康妇炎胶囊(生产厂家：山东步长歙州制药有限公司；批准文号：国药准字Z20055634)，25%苯酚胶浆，肿瘤坏死因子-(TNF-)、白细胞介素-6(IL-6)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)酶联免疫吸附法试剂盒(生产厂家：江苏麦莎实业有限公司)，十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶配制试剂盒，抑制性IB激酶(IK)，甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)抗体。仪器：高速冷冻离心机，酶标仪，蛋白免疫印记转膜仪，电泳仪，化学发光成像仪。方法：分组：将大鼠适应性饲养1周后，依据随机数字表法分为6组，分别为正常组、模型组、康妇炎组及治疗高、中、低剂量组，各10只。造模：采用苯酚胶浆法复制SPID模型。大鼠禁食12 h，麻醉消毒后，用手术刀在大鼠下腹正中耻骨联合上方1 cm处做约1 cm的纵向切口，暴露子宫。在子宫角近输卵管处缓慢注射苯酚胶浆，左右各25 L。正常组按上述步骤打开腹腔，不做任何处理。关腹，术后正常清洁饲养。分别于造模第14、30天随机抽取2只大鼠肉眼观察子宫情况。盆腔充血，内见广泛粘连，显微镜下可见子宫内膜与腺上皮细胞增生，少量中性粒细胞，浆细胞与淋巴细胞浸润，提示造模成功。给药：于实验第30天给药，治疗低剂量组给予盆炎净0.8 mL/只，治疗中剂量组给予盆炎净1.6 mL/只，治疗高剂量组给予盆炎净3.2 mL/只，康妇炎组给予康妇炎溶液(由1 g康妇炎与1 mL 0.9%氯化钠注射液混合配置而成)1 mL/只。正常组、模型组给予0.9%氯化钠注射液。各组大鼠均灌胃1次/d，连续给药21 d。观察指标：一般情况：观察并记录各组大鼠精神状态、毛发色泽、饮食、活动、阴道分泌物。子宫情况：取大鼠子宫称重，计算大鼠子宫重量系数，观察子宫形态。取大鼠腹主动脉血4 mL离心取上清液，采用酶联免疫吸附法检测大鼠血清 TNF-、IL-6和ICAM-1水平。取大鼠子宫组织，采用蛋白免疫印迹法检测大鼠子宫组织IK蛋白表达情况。统计学方法：数据均用SPSS 23.0统计学软件处理；计量资料以xs表示，多组比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验；P0.05为差异有统计学意义。结果各组子宫重量系数比较：各组子宫重量系数比较，模型组治疗低剂量组治疗中剂量组康妇炎组治疗高剂量组正常组，差异有统计学意义(P0.05)。见表1。各组大鼠子宫形态比较：正常组大鼠子宫呈未见明显异常治疗高、中、低剂量组及康妇炎组子宫及其周围组织充血、肿胀和粘连情况较模型组轻，子宫内膜增厚较模型组少，炎性细胞浸润较轻，可见少量浆细胞浸润。见图1。各组血清TNF-、IL-6、ICAM-1表达情况：模型组TNF-、IL-6、ICAM-1水平高于正常组，康妇炎组、治疗中剂量组、治疗高剂量组TNF-、IL-6、ICAM-1水平低于模型组，治疗低剂量组与治疗中剂表1各组子宫重量系数比较(xs，mg/g)组别n重量系数正常组102.5940.582模型组1010.7650.731*康妇炎组106.7080.762*#治疗低剂量组109.5540.796*#治疗中剂量组107.4281.040*#治疗高剂量组105.9970.633*#F9.753P0.001注：与正常组比较，*P0.05；与模型组比较，#P0.05；与康妇炎组比较，P0.05；与治疗低剂量组比较，P0.05；与治疗中剂量组比较，P0.05正常组模型组康妇炎组治疗低剂量组治疗中剂量治疗高剂量组图1盆炎净口服液对SPID大鼠子宫内膜病理变化的影响(HE，200)5实验研究CHINESE COMMUNITY DOCTORS中国社区医师2024年第40卷第3期中国社区医师2024年第40卷第3期量组TNF-、IL-6、ICAM-1水平高于康妇炎组，治疗高剂量组TNF-、IL-6、ICAM-1水平低于治疗低剂量组与治疗中剂量组，差异有统计学意义(P0.05)。见图24。各组大鼠子宫组织IK蛋白表达水平：模型组IK蛋白表达量高于正常组，康妇炎组、治疗中剂量组、治疗高剂量组 IK蛋白表达量低于模型组，差异有统计学意义(P0.05)。见图5。讨论目前临床对SPID的治疗以应用抗生素为主，但易产生不良反应，且复发率较高。中医通过中药、针灸等方法治疗SPID，不仅标本兼治，还能避免单用抗生素治疗造成的不良反应4。盆炎净口服液具有清热利湿、和血通络、调经止带的功效，常用于治疗湿热下注，白带过多5。SPID的发生与核因子B(NF-B)信号通路异常激活有关。细胞内信号转导途径激活IB激酶复合物(IK)，降解IB，可使NF-B活化，引起炎性反应。本研究结果显示，SPID大鼠血清TNF-、IL-6、ICAM-1水平升高，子宫组织中 IK 蛋白表达量增加，表明发生SPID时，NF-B信号通路被激活并引起TNF-、IL-6、ICAM-1释放，使炎性反应级联放大。治疗低、中、高剂量组子宫病理形态较模型组均有所改善，治疗高剂量组TNF-、IL-6、ICAM-1水平低于模型组，治疗高、中剂量组IK蛋白表达量低于模型组，表明盆炎净口服液可通过下调IK蛋白的表达抑制NF-B信号通路的传导，进而减轻炎性反应。综上所述，盆炎净口服液治疗大鼠SPID效果显著，可通过抑制TNF-、IL-6、ICAM-1的释放减轻SPID大鼠炎性反应，改善子宫及其周围组织的粘连与纤维化。参考文献1张洁怡,李颖,陈秀华,等.气机升降针法治疗盆腔炎性疾病后遗症慢性盆腔痛的临床应用J.中华中医药杂志,2021,36(8):4708-4710.2谢幸,苟文丽.妇产科学M.北京:人民卫生出版社,2013:264.3孙红博,李晓.中药妇炎宁汤对盆腔炎性疾病患者的治疗效果观察J.心理月刊,2020,15(4):205.4胡伊蕾,俞赟丰,周曼丽,等.基于中西医盆腔炎性疾病后遗症临床病证特点的动物模型分析J.中药药理与临床,2023,39(4):1-15.5于红娟.盆腔炎性疾病后遗症治疗难点及对策分析J.江苏中医药,2017,49(3):49-51.正常组模型组康妇炎组治疗低剂量组治疗中剂量治疗高剂量组TNF-浓度(pg/mL)图2各组血清TNF-水平正常组模型组康妇炎组治疗低剂量组治疗中剂量治疗高剂量组IL-浓度(pg/mL)图3各组血清IL-6水平ICAM-1浓度(pg/mL)正常组模型组康妇炎组治疗低剂量组治疗中剂量治疗高剂量组图4血清ICAM-1水平注：与正常组比较，*P0.05；与模型组比较，#P0.05；与康妇炎组比较，P0.05；与治疗低剂量组比较，P0.05；与治疗中剂量组比较，P0.05正常组模型组康妇炎组治疗低剂量组治疗中剂量治疗高剂量组图5各组大鼠子宫组织IK蛋白表达水平注：与正常组比较，*P0.05；与模型组比较，#P0.056