小鼠感染病原生物及其细胞免疫现象检查.doc

小鼠感染病原生物及其细胞免疫现象检查
11级设计人：李永梅
日期：2013.06.16
实验目的
掌握小鼠腹腔接种法。
通过小鼠体内吞噬细胞功能检查和淋巴细胞转化实验，识别观察细胞的吞噬现象和转化的淋巴细胞，了解细胞免疫功能的检测方法。
掌握瑞氏染色法。
实验原理
正常的细胞免疫功能依赖免疫细胞的数量和功能正常。执行固有免疫功能的巨噬细胞和执行适应性免疫功能的T淋巴细胞是参与细胞免疫的重要免疫细胞。本实验重检测巨噬细胞的异物的吞噬功能以及T淋巴细胞在抗原刺激下的转换功能。
巨噬细胞起源于骨髓，经血液进入组织中而成，分布于全身各处。当机体受到某些损伤因素时（如微生物或其它病原体或异物侵入），能招引巨噬细胞，同时巨噬细胞有趋化性，主动向病原体或异物游走，在接触到病原体或异物时，细胞膜凹陷伸出伪足包围异物，并发生胞吞作用形成吞噬泡，继而巨噬细胞质中的溶酶体与吞噬泡融合，消化分解异物。通过计算吞噬百分率或吞噬指数可测定小鼠体内吞噬细胞的吞噬功能。
淋巴细胞在体外培养时，受到特异性抗原或有丝分裂原（植物血凝素或刀豆素等）刺激，细胞的代谢和形态可发生一系列变化。主要表现为T细胞体积增大，蛋白质和核酸合成加增，以及细胞形态可转化为淋巴母细胞。淋巴细胞转化百分率的高低可以反映机体的细胞免疫水平，因此可以作为测定机体细胞免疫功能的指标之一。
实验动物
小白鼠（体重20g左右）
实验材料
金黄色葡萄球菌悬液（菌数3~5亿/ml）、2%鸡红细胞悬液、植物血凝素PHA
解剖器材、无菌注射器、尖吸管、橡皮吸头、小试管、载玻片、瑞氏染液、PBS等
实验方法与步骤
1. 小鼠体内吞噬细胞吞噬功能检测
（1） 初始免疫 用无菌注射器吸取金黄色葡萄球菌悬液0.6ml注射于小鼠腹腔内，将小鼠标记为A后置于鼠笼饲养48h。
（2） 腹腔注射鸡红细胞 给初始免疫小鼠腹腔内注射2%鸡红细胞悬液1ml，等待15~30min。
（3） 取小鼠腹腔液 颈椎脱臼处死小鼠，解剖暴露腹腔，用镊子轻轻夹起腹膜，剪一小口，用尖吸管注入少量预温的PBS，以便尽可能多的冲洗出小鼠腹腔内的吞噬细胞。
（4） 腹腔液推片 用尖吸管吸取腹腔液，滴于载玻片上，推片，自然干燥。
（5） 瑞士染色 在干燥后的推片上滴加瑞氏染液数滴覆盖涂片；30s后滴加等量蒸馏水。静置10~15min，流水冲洗，吸水纸吸干，置油镜头下镜检。
2. 小鼠体内淋巴细胞转化实验
（1） 腹腔注射PHA 取小鼠B腹腔注射0.2mlPHA
（2） 取血推片 48~72h后剪小鼠尾末梢，滴1~2滴血在载玻片一端，推片，自然干燥。
（3） 瑞氏染色、镜检 油镜头观察结果
实验结果
镜下观察小鼠吞噬细胞形态并按下列公式计算吞噬百分率/吞噬指数：

吞噬百分率=吞有鸡红细胞的巨噬细胞/100个巨噬细胞*100%
吞噬指数=100个吞噬细胞中所吞噬鸡红细胞的总数/100
镜下观察小鼠转化的淋巴细胞，并按下列公式计算淋巴细胞转化百分率：
转化率%=转化淋巴细胞数/（转化淋巴细胞数+未转化淋巴细胞数）*100%
思考与讨论
1. 病原菌感染小鼠可引起小鼠哪些免疫应答？
2. 吞噬细胞包括哪些细胞？巨噬细胞承担哪些免疫功能？
3. 淋巴细胞在哪些情况下会发生转化？转化的淋巴细胞有何形态特征？
4. 人体淋巴细胞转化率在何种情况下会降低？
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9. （注：专业文档是经验性极强的领域，无法思考和涵盖全面，素材和资料部分来自网络，供参考。可复制、编制，期待你的好评与关注）
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