18学时药理实验.doc

18学时药理实验
实验一 不同给药途径对药物作用的影响
【目的】
1．观察给药途径不同对药物作用的影响．
2．练习小鼠的捉拿方法及腹腔注射法、灌胃注射法、皮下注射法。
【原理】
戊巴比妥钠为镇静催眠药，依据不同剂量及吸收情况的不同依次会出现：镇静-催眠-抗惊厥抗癫痫-麻醉-麻痹-死亡作用。用相同剂量，不同给药途径的药物，从而观察其差异。
【实验材料】
1、动物：小鼠
2、药品： 0.4%戊巴比妥钠溶液
3、器材：电子秤1台、1ml注射器2支、灌胃器1支、苦味酸1瓶、棉签1根。
【方法与步骤】
1、取小鼠6只，雌雄各半，称重.编号，分成3组。

2、甲组-腹腔注射
乙组-皮下注射 0.4%戊巴比妥钠溶液0.10ml/10g
丁组-灌胃
3、立即记录时间，观察每只动物翻正反射消失时间及翻正反射恢复时间
【结果与处理】
组别
鼠号
途径
体重
0.4%戊巴
给药剂量
翻正反射消失（t）
翻正反射恢复（t）
时间（m）
平均值
时间（m）
平均值
甲
1
ip

2

乙
1
iH

2

丙
1
ig

2

【注意事项】
1、注意给药途径的正确操作。
2、注意小鼠翻正反射消失时间判定＞1min。

实验二 药物的抗炎作用（足肿胀法）
【目的】
熟悉致炎物质致大鼠后肢足跖炎症性肿胀模型制作方法。
了解糖皮质激素的抗炎作用。
【原理】
鲜蛋清等致炎物质被注入大鼠后肢足跖后，可引起局部血管扩张，通透性增强，组织水肿等炎症反应，最后致足跖体积变大。糖皮质激素通过抑制炎症产生的多个环节，从而避免致炎物质的致炎作用。
【实验材料】
1. 动物：♂大鼠2只。
2. 药品： 10％鲜蛋清、0.5%氢化可的松溶液、生理盐水、。
3. 器材：大鼠固定器1台，1ml注射器3支，PV-200足趾容积测量仪，苦味酸、棉签1根、手套1只。
【方法与步骤】
1. 取大鼠2只，称重，做好标记。一只大鼠腹腔注射生理盐水0.3mL／100g，
另一只腹腔注射0.5%氢化可的松溶液0.3mL／100g。
2.在鼠足某处用记号笔画线作为测量标线，将鼠足缓缓放如测量筒内，当水平面与鼠足上的测量标线重叠时，踏动脚踏开关，记录足趾容积，为正常值。
3. 待二鼠注射药物30min后，从右后足掌心向踝关节方向皮下注射10％鲜蛋清0.lmL/只。
4. 在注射致炎物后的15min、30min、45min分别测量足趾容积。
5. 计算：足跖肿胀度及肿胀率。
肿胀度= 致炎后的足趾容积—致炎前足趾容积
肿胀率= (致炎后的足趾容积—致炎前足趾容积)÷致炎前足趾容积×100%

【结果与处理】
将所得数据填入表内并加以比较得出结论。
表1 氢化可的松对大鼠足跖肿胀的影响
鼠 号
体
重
（g）
药物
药量
（mL）
正常右后足跖容积
致炎后足跖肿胀度
（mL）
致炎后足跖肿胀率
（%）
15min
30min
45min
15min
30min
45min
甲

乙

【注意事项】
1.抗炎实验中动物性别的选择：雄性
2.测定大鼠足体积时，选定统一测量位置（大鼠足外踝关节突起）
3. 10％鲜鸡蛋清溶液需在临用前配制。
4.体重120～150g的♂大鼠对致炎剂最敏感，肿胀度高，差异性小。
5. 测量时，应固定1人完成所有测量任务。
6.注射致炎剂时注意药液勿外漏。

实验三 药物的抗炎作用（耳片法）
【目的】
熟悉二甲苯致大鼠耳廓炎症性肿胀模型制作方法。
了解糖皮质激素的抗炎作用。
【原理】
化学刺激物可致动物急性炎症；毛细血管扩张，渗出增加，出现局部肿胀，重量改变。比较給予药物前后动物局部肿胀程度的变化从而观察到药物的抗炎作用。
【实验材料】
1. 动物：♂小鼠4只。
2. 药品：0.1%地塞米松、二甲苯、 生理盐水。
3. 器材：分析天平1台、称量纸1张、打孔器1支、眼科镊1把、打孔垫1个、手术剪1把、1mL注射器3支、苦味酸1瓶、棉签1根。
【方法与步骤】
1. 取♂小鼠4只，称重，做好标记，分成2组。
2、一组腹腔注射0.1﹪地塞米松0.1ml/10g 体重，另一组腹腔注射生理盐水0.1ml/10g 体重。
3. 给药30min后，用二甲苯0.05ml均匀涂抹每只鼠的右耳内外两面。
4. 涂抹45min后，小鼠脱臼处死，分别用打孔器取相同部位左右耳片，电子天平称重。
5. 计算： 肿胀度=右耳重量-左耳重量
肿胀率= (右耳重量-左耳重量)÷左耳重量×100%
【结果与处理】
将所得数据填入表内并加以比较得出结论。
地塞米松对小鼠耳片肿胀重量的影响
组别
鼠号
体重（g）
药物
剂量
耳片重量
各组肿胀率平均值
右
左
肿胀度
肿胀率
甲
1

生理盐水

2

乙
1

地塞米松

2

【注意事项】
1、小鼠耳廓滴加二甲苯时，正反面均匀涂抹。避免滴入耳廓内。
2、小鼠左右耳打耳片位置统一（耳廓中间部位）。

实验四 传出神经药物对离体肠肌的作用

【目的】
观察乙酰胆碱、阿托品、氯化钡对胃肠平滑肌的作用，了解阿托品的作用机制。
掌握离体器官的测定方法。
【实验材料】
1、动物：家兔。
2、药品：0．01％氯化乙酰胆碱溶液、0．05％硫酸阿托品溶液、1%氯化钡溶液、台氏液。
3、器材：离体平滑肌槽1台、420E型生物机能实验系统1套、肌张力换能器1支、电脑1台、双凹夹1个、手术剪1把、注射器3支、烧杯1个、缝线2根。
【方法与步骤】
1、 将离体平滑肌槽加水，通电加热，设定温度为37±0.5℃。
2、 安装换能器，与420E型生物机能实验系统第一通道连接。
3、 离体肠肌的制备：
取家兔1只，颈椎脱臼处死，立即打开腹腔，找到幽门部，分离十二指肠，以2cm左右穿线，分段结扎，剪取肠段。将肠段一端连结固定钩上，置测定管（麦氏浴槽）中。另一端连结张力换能器弹簧片上。上下调节双凹夹，控制张力的大小。打开气量调节旋钮，让气泡缓慢通入。
4、 离体肠肌收缩力测定：
打开电脑，点击桌面中BL-420图标，进入主菜单，点击工具栏上的“实验项目”，——消化道实验，——消化道平滑肌生理特性（2）。
肠管稳定10分钟左右，记录一段正常收缩曲线，然后依次用药。
1．加0.01％氯化乙酰胆碱溶液0.2ml，观察结果如何。
2．当肠段收缩明显时，立即加入0．05％硫酸阿托品溶淡0．2ml，观察对肠段收缩的影响．
3．当描笔下降到基线时，再次加人0．01％氯化乙酰胆碱溶液0．2ml，观祭结果。
4．更换浴槽中的台氏液3次，待肠段恢复收缩后，加人l％氯化钡溶液0．2ml，观察肠段有何反应。
5.当作用出现后，立剧加人0．05％硫酸阿托品溶液0.2ml，观察结果如何。
实验结束后，暂停记录，打开反演窗口，寻找所需波形的开始处，压缩图形，剪切整理图形，保存资料。
【结果】
描绘或剪贴肠肌活动曲线图，标明所给药物的名称和剂量，分折讨论所得结果。
【注意事项】
1、冲洗和分离肠管时动作应轻柔，尽量避免牵拉肠管。
2、如需换液，台氏液液面高度及温度应与以前保持一致。
3、加药时不要把药液直接加到标本上，以免影响结果。
4、浴温和肠肌的张力均可影响实验结果，应注意调节。

实验五 镇痛药实验（热板法）
【目的】
观察吗啡的镇痛作用。
掌握镇痛药实验（热板法）操作方法。
【原理】
利用一定的温度刺激动物躯体的某一部位以产生疼痛反应。把小鼠放在事先加热到55℃的金属盘上，以舔后足为“疼痛”反应指标，以产生痛反应所需的时间为痛阈值。通过测定给药前后痛阈值的变化而反映药物的镇痛作用。
【实验材料】
1、 动物：小鼠(雌性)
2、 药品：0.1%吗啡溶液、生理盐水。
3、 器材：RB-200智能热板仪1台、1mL注射器3支、电子称1台、苦味酸1瓶、棉签1根。
【方法与步骤】
将智能热板仪温设定为55℃，仪器升温至设定值后，取雌性小鼠若干只,逐一将小鼠置热板仪上,按下计时开关（T）记录时间，观察小鼠对热刺激的反应，以小鼠舔后足作为痛觉指标，一旦出现舔后足动作，再次按下计时开关停止计时，立即将鼠取出。5分钟后重新测试,如果两次痛觉反应均发生在5—30秒内，则为合格。对痛觉过分敏感或迟钝及喜跳窜小鼠，应弃去。将合格鼠两次正常痛觉反应时间的均数算做给药前的平均痛觉反应时间（既痛阈值）。将挑选合格的小鼠4只称重、标号，分成二组，分别给各小鼠下列药物：
甲组鼠： 腹腔注射0.1%吗啡溶液0.1mL/10g。
乙组鼠： 腹腔注射生理盐水0.1mL/10g作对照。
分别在给药后15、30、45分钟各测痛觉反应（痛阈值）一次，如小鼠在60秒内不出现痛觉反应，则按60秒计，取出实验鼠，不再继续刺激。
【结果与处理】
×100%
痛阈值提高百分率=
用药后平均痛阈值--用药前平均痛阈值
用药前平均痛阈值

吗啡的镇痛作用（热板法）
组别
剂量
动物数
药前平
均痛阈
值（s）
药后平均痛阈值(s)
药后痛阈值提高百分率(%)
15min
30min
45min
15min
30min
45min
0.1%吗啡
0.1ml/10g
2

生理盐水
0.1ml/10g
2

（另外，也可根据给药后不同时间的痛阈提高百分率作图，横坐标表示时间，纵坐标表示痛阈提高百分率，观察吗啡的镇痛作用，作用起始时间及维持时间。与生理盐水组的曲线比较。）
【注意事项】
1、热板法小鼠个体差异较大, 应选择痛阈值在5—30秒之间的实验动物,凡特别喜跳跃的小鼠应淘汰。
2、实验应选择雌性小鼠,因雄性小鼠在遇热时睾丸下降,阴囊触及热板反应过敏,易致跳跃,影响实验准确性。
3、室温以15—20℃为宜。
4、 作用较弱的镇痛药此法不太敏感。

实验六 镇痛药实验（小鼠扭体法）
许多刺激性化学物质（如醋酸、酒石酸锑钾、缓激肽、钾离子等）腹腔注射刺激腹膜，均能使动物产生疼痛反应，可用作疼痛模型，研究疼痛生理及筛选镇痛药物。其中小鼠扭体法最常用。
【目的】
观察药物的镇痛作用，掌握小鼠扭体法实验方法。
【原理】
小鼠腹腔注射一定容积和浓度的化学物质，由于刺激腹膜而致小鼠出现腹部收缩内凹、躯干与后肢伸张、臂部高举等行为反应，称为扭体反应。镇痛药可抑制这种反应。
【实验材料】
1动物：小鼠
2药品：0.1%吗啡溶液、生理盐水。
3器材： 1mL注射器3支、电子称1台、苦味酸1瓶、棉签1根。
【方法与步骤】
取体重18-22g的健康小白鼠4只，称重，编号。分成二组。
甲组各鼠；腹腔注射0.1% 吗啡溶液0.1mL/10g。
乙组各鼠； 腹腔注射生理盐水0.1mL/10g，作对照。
给药后30min，各鼠腹腔注射0.7%冰醋酸溶液（或0.1%酒石酸锑钾）0.2mL/只
记录小鼠出现疼痛的时间（潜伏期），给致痛剂后15min内产生扭体反应（腹部收缩内凹、躯干与后肢伸张、臂部高举）的次数。
【结果与处理】
对照组扭体反应次数—实验组扭体反应次数
对照组扭体反应次数　　　　　　　　　　　　　　　　
一、疼痛潜伏期
二、扭体反应次数减少百分率=　　　　　　　　　　　　　　　　　 ×100%
吗啡对小鼠的镇痛作用（扭体法）
组别
鼠号
体重
药物与
剂量
疼痛
潜伏期
潜伏期均值
15min内
扭体次数
15min内扭体
次数均值
吗啡组
1

2

对照组
1

2

（疼痛潜伏期超过15mim以15mim记录）
【注意事项】
1、0.7%醋酸溶液（也可用1%酒石酸锑钾溶液）宜新鲜配制。
2、室温宜恒定于20℃,过高或过低均不易发生扭体反应。