长管贝壳杉素A通过PI3K_AKT_mTOR通路抑制结肠癌细胞活性.pdf

42 消化肿瘤杂志电子版2024年3月第16卷第1期J Dig Oncol(Electronic Version).March 2024.Vol 16.No.I 长管贝壳杉素A通过PI3K/AKT/mTOR通路抑制结肠癌细胞活性李悦予，冯霞南京医科大学附属脑科医院药学部，江苏南京210029【摘要】目的探讨长管贝壳杉素A(longikaurin A,LK-A)对结肠癌细胞的抗肿瘤效应及其潜在的分子机制。方法将结肠癌HCT116、HT-29细胞分为对照组和实验组，其中对照组给予二甲亚巩溶剂，实验组给予不同浓度LK-A于预，采用CCK-8法评价细胞增殖能力，流式细胞仪分析细胞凋亡情况，以及裸鼠皮下移植瘤实验评价LK-A抑瘤效应，蛋白质印迹法检测PBK/AKT/mTOR通路蛋白的变化。结果低浓度的LK-A对结肠癌细胞具有显著生长抑制和促进凋亡的作用。LK-A于预HCT116和HT-29细胞24h的半抑制浓度(halfmaximal inhibitory concentration,IC50)分别为2.18mol/L和1.42mol/L,48 h的IC50分别为0.88mol/L和0.72mol/L。在HCT116细胞中，2或4mol/L LK-A于预24 h细胞凋亡率分别为(17.36士2.05)和(34.75士7.01)，高于对照组(6.60士1.10)%(P0.05)；而在HT-29细胞中分别为(15.47丑65)和(26.30 士2.25)，高于对照组(4.69士0.91)%(PObjectiveTo investigate the antitumor effect oflongikaurin A(LK-A)on colon cancer cells and its potential molecular mechanism.Method Colon cancer HCTl 16 and HT-29 cells were divided into control group and experimental group,and the control group was administered dimethyl sulfoxide solvent,while the experimental group was administered different concentrations of LK-A.The cell proliferation ability was evaluated by CCK-8 assay.The cell apoptosis was analyzed by flow cytometry.The tumor suppressive effect of LK-A was evaluated by subcutaneous xenograft assay in nude mice.The protein changes of PI3K/AKT/mTOR pathway were detected by western blot.Result Low concentrations of LK-A can significantly inhibit the growth of colon cancer cells and increase their apoptosis.The half maximal inhibitory concentration(IC50)ofLK-A intervening HCT116 and HT-29 cells for 24 h were 2.18 mol/L and 1.42 mol/L,respectively,and the IC50 for 48 h were 0.88 mol/L and 0.72 mol/L,respectively.In HCT116 cells,the apoptosis rates of 2 or 4 mol/L LK-A intervened for 24 h were(17.36士2.05)%and(34.75士7.01)%,which were higher than 通信作者：冯霞，E-mail: i仑著消化肿瘤杂志电子版2024年3月第16卷第1期J Dig Oncol(Electronic Version).March 2024.Vol 16.No.I 43 that of the control group(6.60习10)%(P0.05);while in HT-29 cells were(15.47丑65)%and(26.30士2.25)%,higher than that of the control group(4.69士0.91)%(P0.05).Western blot analysis showed that with the increase of LK-A concentration,the protein expressions of phosphorylated phosphatidylinositol-3 kinase(p-PI3K),phosphorylated serine-threonine kinase(p-AKT)and phosphorylated mammalian target of rapamycin(p-mTOR)showed a significant downward trend.After adding AKT agonist SC79,the ability of LK-A to inhibit the proliferation and induce apoptosis of HCTl 16 and HT-29 cells was significantly decreased.The results of experiments on nude mice suggest that LK-A has obvious anti-tumor ffect i.effect in vivo.Conclusion LK-A inhibits the proliferation of colon cancer cells and increased their apoptosis,and its mechanism is related to the inhibition of PI3K/AKT/mTOR signaling pathway.LongikaurinA;Colon cancer;Proliferation;Apoptosis 结肠癌是胃肠道最常见的恶性肿瘤。虽然早期治愈的概率很高，但几乎所有晚期和转移性疾病患者都没有有效的治愈方法1。即使联合手术、放疗、化疗、免疫治疗及靶向治疗等综合治疗措施，转移性结肠癌的5年生存率仍很低，约为11%2。此外，多药耐药是晚期或复发结肠癌治疗中面临的难题。因此，迫切需要开发更有效的治疗药物，以降低结肠癌的死亡率。长管贝壳杉素A(longikaurin A,LK-A)是一种从异山蕨中分离出来的贝壳莲类二帖，巳被证明对鼻咽癌细胞具有强大的细胞毒性作用3，但是LK-A治疗结肠癌的有效性尚未见报道。本研究将以HCT116和HT-29细胞为研究对象，分析LK-A对结肠癌细胞增殖和凋亡能力的影响及其潜在的作用机制。1 材料与方法1.1 材料人结肠癌细胞系HCT116和HT-29购自中国科学院上海细胞库。CCK-8试剂盒购自H本同仁公司，货号ck04。AnnexinV-APC细胞凋亡检测试剂盒购自江苏凯基生物技术股份有限公司，货号KGA1022。Matrigel基质胶购自美国Corning公司，货号354234。磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(phosphorylated phosphatidylinositol-3-kinase,p-PI3K)抗体(abl82651)购自美国Abeam公司。PI3K抗体（货号20662-1-AP)，丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(serine/threoninekinase,AKT)（货号60203-2-lg)购自武汉Proteintech公司。LK-A购自南京百方医药科技有限公司。SC79购自上海碧云天生物科技有限公司，货号SF2730。1.2 方法1.2.1 实验分组HCT116和HT-29细胞使用90%McCOY 5A 培养基(GIBCO货号16600082)和10优质胎牛血清(GIBCO货号10099-141)，在95空气、5二氧化碳的37C恒温孵箱中培养。实验分为实验组和对照组，其中实验组为加入不同浓度LK-A千预的HCT116和HT-29细胞组，对照组为加入二甲基亚讽(dimethylsulfoxide,DMSO)的溶剂组。1.2.2 CCK-8法评价细胞增殖能力5xl03个孔的HCT116和HT-29细胞接种于96孔培养板中培养24h后除去培养基，分别加入含0、0.25、0.5、1、2和4mol/L LK-A的培养基继续培养72h。实验终止时，向每个孔中加入10l CCK-8溶液，继续孵育14h，然后用酶标仪测定在450nm处的吸光度。1.2.3 流式细胞仪分析细胞凋亡情况5xl03个I孔的HCT116和HT-29细胞接种千6孔培养板中培养24h,加入含LK-A的培养基继续培养24h后利用AnnexinV-APC细胞凋亡检测试剂盒分析细胞凋亡情况。细胞使用不含乙二胺四乙酸的0.25胰酶消化后，2000r/min离心5 min收集细胞，磷酸盐缓冲液(phosphatebuffer solution,PBS)洗涤2次，再次2000r/min离心5min 收集细胞，加入500l的结合缓冲液悬浮细胞和5 l Annexin V-APC染液，混匀，在室温、避光下反应5-15min后，上流式细胞仪检测。1.2.4 蛋白质印迹法检测蛋白表达lxl05个I孔的HCT116和HT-29细胞接种在6孔培养板中培养24h后，加入LK-A干预48h 后，每孔加入150l RIPA裂解液充分裂解。充分裂解后，收集混合悬液，12000 r/min离心3-5min，提取总蛋白。电泳条件：100V恒压电泳，当淏酚蓝指示剂距分离胶底部1cm处停止。转膜条件：300mA 恒流转膜，1.5h。然后，5的脱脂牛奶封闭1h。加入一抗(p-PI3K,PI3K,p-AKT,AKT,p-mTOR，或44 消化肿瘤杂志电子版2024年3月第16卷第1期J Di Oncol Electronie Version March 2024 Vol 16 No.l mTOR,按1:1000稀释）置千旋转摇床上4C过夜。加入lxTBST漂洗3次，每次10min。加入二抗（按1:5000稀释）孵育1h后，加入lxTBST漂洗3次，每次10min。加入ECL发光液避光3min,对条带进行显色，并使用成像仪扫描成像。1.2.5 体内移植瘤实验本实验采用的裸鼠均为6周龄，雄性，平均体重20g，无特定病原体(specificpathogen free,SPF)级，共24几饲养环境：SPF级动物房，饲养期间自由饮食，相对湿度40%-60%，每日维持光照10h。在裸鼠左侧腋下接种5xl06个HCT116或HT-29细胞。当移植瘤体积达到50m旷时，根据肿瘤大小将裸鼠随机分为三组（每组8只）。对照组给小鼠腹腔每2天注射1次溶媒（生理盐水）；实验组1，每2天注射1次LK-A(6mg/kg)；实验组2，每2天注射1次LK-A(12mg/kg)。上述处理均持续3周。每隔1d用卡尺测量1次肿瘤体积，并使用以下公式计算：肿瘤体积(mm3)长度x宽度x高度x0.5。实验结束时，处死小鼠，收集异种移植物保存在液氮中或石蜡包埋。所有动物实验方案均经本院动物伦理保护委员会批准（批准号：2022-KY120-01)。1.2.6 免疫组织化学分析方法移植瘤样本中Ki-67、p-PI3K和p-AKT的免疫组织化学分析采用以下步骤进行。首先，对固定的移植瘤样本进行包埋，并从蜡块中切制薄片，厚度为45m。随后，进行脱蜡和抗原修复处理，确保切片的适当反蜡和抗原修复。接下来，使用免疫组织化学试剂盒提供的蛋白封闭试剂，对切片进行蛋白封闭处理，以防止非特异性结合。随后，分别加入适当浓度的抗Ki-67、抗p-PI3K和抗pAKT抗体，按照生产商的说明进行4C孵育过夜。之后，PBS洗3次，每次2min。接着，加入与一抗宿主动物种类相对应的二抗，并孵育30min。之后，PBS洗3次，每次2min。最后，加入DAB显色液，室温显色2-5min。自来水冲洗2min后苏木精复染。完成免疫组织化学染色后，通过显微镜观察和图像获取，阳性结果为在抗原定位处染棕黄或棕褐色。1.3 统计学方法所有数据均使用SPSS22.0统计软件进行统计分析。计盘资料呈正态分布，采用均数土标准差（正s)表示，组间比较采用t检验或单因素方差分析。P0.05为差异有统计学意义。2 结果2.1 LK-A对结肠癌HCT116和HT-29细胞增殖能力的影响为了评价LK-A对结肠癌细胞增殖的抑制作用，分别用0、0.25、0.5、1,2和4mol/L LK-A千预HCT116和HT-29细胞24h和48h后，利用CCK-8法分析细胞增殖能力。如图1A所示，LK-A干预后HCT116和HT-29细胞的增殖能力受到明显抑制，并呈现出剂量和时间依赖性。经计锌得出LK-A干预HCT116和HT-29细胞的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,ICSO)分别为24h 2.18 mol/L和1.42mol/L,48 h 0.88 mol/L 和0.72mol/L（图1B)。2.2 LK-A对结肠癌HCT116和HT-29细胞凋亡的影响进一步利用AnnexinV-APC/PI分析LK-A对结肠癌HCT116和HT-29细胞凋亡的影响。如图2A所示，在HCT116细胞中，2或4mol/L LK-A 干预24h的细胞凋亡率分别为(17.36士2.05)和(34.75士7.01)，高千对照组(6.60丑10)%(P0.05);而在HT-29细胞中分别为(15.47玑65)和(26.30士2.25)%，高千对照组(4.69士0.91)%(P0.05)（图2B)。可见，2或4mol/L LK-A干预24h后可显著诱导HCT116和HT-29细胞发生凋亡。2.3 LK-A对PI3K/AKT/mTOR通路的影响对HCT116和HT-29细胞分别采用2或4 mol/L的LK-A进行干预24h，然后利用蛋白质印迹法检测PI3K/AKT/mTOR通路的蛋白变化。如图3A所示，增加LK-A剂量的干预导致pPI3K、p-AKT和p-mTOR的表达较对照组下调，差异有统计学意义(P0.05)。进一步利用经典的AKT通路激活剂SC79逆转LK-A对PI3K/AKT通路的抑制，如图3B所示，SC79(10.96 mol/L)联合LK-A(4 mol/L)，逆转了LK-A对AKT和下游mTOR磷酸化的影响。CCK-8测定提示，SC79联合LK-A明显降低了LK-A对HCT116和HT-29细胞增殖的抑制（图4A)。此外，流式细胞分析也表明，与单独使用LK-A相比，联合使用SC79后，HCT116和HT-29细胞凋亡率明显下降（图4B)。这些结果表明，PI3K/AKT/消化肿瘤杂志（电子版）2024年3月第16卷第1期J Dig Oncol(Electronie Version),March 2024,Vol 16,No.l 45 A HCT116 HT-29 150。1(吝)R端腰翌盈思千LK-A24h-LK-A48 h B(苏)尺端嗅Im踞导50。100 80 60 40 20 0.25 0.5 2 药物浓度(mol/L)HCT116 半抑制浓度2.18mol/L 半抑制浓席0.88mol/L 4 千24h.-48 h 150。1(苏)R翟蒙击盈思千LK-A24h-LK-A48 h 50。0.25 0.5 2 4 药物浓度(mol/L)HT-29 100 80 60 40 20.(苏)R端憬翌踞思于24h.-48 h 半抑制浓度；0.72mol/L o.一1.0-0.5。药物浓度(log)0.5 1.0 o.-1.0-0.5。药物浓度(log)0.5 1.0 图1LK-A对结肠癌细胞增殖的影响注：A,LK-A对HCT116和HT-29细胞增殖能力的影响；B,LK-A干预HCT116和HT-29细胞的半抑制浓度值。A 对照组IO 1.21 0.32 10气王，O1 3 1 卫三三；OAnnex i nV检测细胞凋亡1013.32 10 汇，O10 2 mol/L LK-A 0.79 l(Ii,807,I.l,15 2 1010101010 Annex;nV检测细胞凋亡lJ 4.mol/L LK-A 10c 1.88 10 10;10.,久2.18 一，众开氏扣?”汒旷、10，巴一可一叮巴l“1010101010 Annex i nV检测细胞凋亡HCT11.50*432(芩)丹心室八对照组2JLmol/L 4 JLmol/L 5 2 F.r:-.一.r0仔0ll B!ki 对照组2 mol/L LK-A 4,_mol/L LK-A HT心胞细的h 4 2 胞细9 2 T H 预干A“r-5 llk 5,L l-二.？周，讥品、IBI，胞WIB况t一情仁癌肠、f团结凋6亡对胞LW凋细的E胞A细.二LK扛一21即nne2胞A图细“1”巧6 l 宁V1 lT c H 预干A k。L L5/0 l OO m p*4.。况或情2,人亡注凋0.90 1cr_,;:，呼扩勹，,392 lr110101010 Annex i nV检测细胞凋亡.工1炉工、戌姓荽,.10 7.81 Id 1011.12 10 10 10 32(苏)诽七冥*对照组2,mnl/L 4,mol/L 46 消化肿瘤杂志电子版2024年3月第16卷第1期J Dig Oncol(Electronic Version).March 2024.Vol 16.No.I A HT-29 B HCT116 HT-29 p.P13K p.P13K-p-AKT p-AKT Pl3K 1-Pl3K AKT AKT p-AKT,g,-、一.江呵.-,.,-、，r-二-、一矿，了动一-于可，-、士、二飞，p-AKT 七飞，冒畴._._-p-mTOR-p-mTOR AKT t-：一AKT-mTOR _ _.mTOR p-mTOR 一，一一p-mTOR GAPDH ii一一一GAPDH+SC79+SC79 mTOR 1 _ _ mTOR+LK-A+LK-A GAPDH GAPOH l了-令念$,.袋 令$J。s 令念令“$V 士，穸$图3LK-A和SC79对PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白表达的影响注：A，蛋白质印迹法检测LK-A千预HCT116和HT-29细胞后PBK/AKT/mTOR通路相关蛋白的表达；B，蛋白质印迹法检测SC79联合LK-A千预HCT116和HT-29细胞后PBK/AKT/mTOR通路相关蛋白的表达。A 200勹B 50*对照组I I 一对照组。-.-40,*芭150*圈SC79l l-SC79 i.,1050 0*I I-LK-A 白-LK-A I l i初了：-SC79+LK-A-SC79+LK-A 20 10。HCT116 HT畴29HCT116 HT-29 图4S79联合LK-A对HCT116和HT-29细胞增殖、凋亡能力的影响A,SC79逆转LK-A诱导的HCT116和HT-29细胞增殖抑制；B,SC79逆转LK-A诱导的HCT116和HT-29细胞凋亡。P0.05。mTOR信号通路参与LK-A诱导的细胞凋亡。2.4 LK-A抑制结肠癌移植瘤生长最后，我们检测了LK-A在异种移植模型中是否表现出抗肿瘤活性。如图5A和5B所示，与对照组相比，LK-A干预抑制了HCT116和HT-29细胞产生的异种移植肿瘤的生长(P0.05)，并降低了肿瘤的重屈(P0.05)，表明LK-A对裸鼠的副作用较小。最后，对各组移植瘤样本中Ki-67、p-PI3K和p-AKT进行免疫组织化学分析，结果提示LK-A显著抑制了HCT116和HT-29细胞移植瘤组织中Ki-67、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达（图5E)。3 讨论近年来，越来越多的研究表明，具有抗癌作用的天然药物必将在新型抗肿瘤药物的开发中发挥重要作用气LK-A由千其独特的碳骨架和多种药理特性，最近作为新的癌症治疗方法的潜在候选物受到了广泛关注。但目前关于LK-A的抗肿瘤效应的研究主要集中在鼻咽癌方面。如Zou等5证实LK-A在体内外均可有效抑制鼻咽癌细胞生长。Yuan等6研究报道LK-A能有效抑制鼻咽癌细胞干性特征，逆转鼻咽癌细胞对放化疗的抵制。但是，LK-A对人结肠癌细胞的作用及其机制研究至今未见任何报道。而结肠癌是男性和女性中最常见的癌症类型之一，其发病率及死亡率在癌症患者中均排名第三气在过去几十年中，研究消化肿瘤杂志（电子版）2024年3月第16卷第1期J Dig Oncol(Electronie Version),March 2024,Vol 16,No.l 47 A HCT116 HT-29 2000 00 00 50 11(umI)庙迁鞭尽c。500 千对照组王LK-A(6mg/kg)士LK-A(12mg/kg)千对照组量LK-A(6mg/kg)士LK-A(12mg/kg)5 10 15 注射后天数(d)20 8006004002000(m)还迁鞭迥泌E 5 10 15 注射后天数(d)20 B 1.5 HCT116(6)圈照1.0 0.5 令6,$e 七r 4$9$6,七Y 令浚1.0 36 00(6)圈随0.4 0.2 HT-29 E。*f$6,七yY 令$6,t$令了 9、l怂$令(49-N)9L-KO_(XCld-d)9llH c 呱对照组LK-A(6 mg/kg)LK-A(12 mg/kg)对照组LK-A(6 mg/kg)对照组LK-A(6 mg/kg)LK-A(12 mg/kg)乒一参今.S开心，无、-门忑，气je.，“-千云罕：，认:气.；.蠡：,子;“久、炉心”,.i严r ;吮:“夕，少.;S,烘祒农；.2台乏心.，、尸.,.4汾叩，孕；，浇1?.？芯歹崎点丛，,.年士还-，心；，心-心”“对照组LK-A(6 mg/kg)LK-A(12 mg/的）窃1沪叮汉疫子尸、笭心，J土；，叫叭略忑岭？i，爹穿却；琛坟钰;,I七、干？恐叭h可-凸心-心，心玄沁对照组LK-A(6 mg/kg)LK-A(12 mg/kg)浮得，了了心枣r，初酱吏志沪、，心心点i:；卢zj.屯心：、.r.：玄，凡Al jt伽:沪ti:1 ;，又改；尔，“1,八心-：心丸、:心七,、:;t.仓j沁，归，.个，:.,1玉5.鼻:对照组LK-A(6 mg/kg)LK-A(12 mg/kg)芬怎：忒?i沪?1.，i.，江、，合、今_众1一L,i r.4、,.?t,.,心i:t-.高,.、荨飞，入分，执合止颈暴乒惫；如女4,r.，达尸，气、i萃遠嫔佥对照组LK-A(6 mg/kg)LK-A(12 mg/kg)心切尽站i:.).艾7汉岁，玄洪店r了它玄心沿!LKA(12 mg/kg)：敃忍，?丹让器，！，各立产簦雯贷立产气:d,.对照组LK-A(6 mg/kg)LK-A(12 mg/kg).(匕w,d)9.10H,(49-N)6Z，兰.(xc-dd)6l-1H HCT116 HT-29 HCT116 HT-29 D(6)阖迁玉账418529630 22111 千对照组千LK-A(6mg/kg)士LK-A(12mg/kg)(6)阖迁壶弊418529630 22111 千对照组量LK-A(6mg/kg)士LK-A(12mg/kg)5 10 15 注射后天数(d)20 5 10 15 注射后天数(d)20 图5LK-A对结肠癌细胞移植瘤的抑制作用注：A,LK-A抑制HCT116和HT-29细胞移植瘤体积；B,LK-A降低HCT116和HT-29细胞移植瘤重量；C,LK-A干预HCT116和HT-29细胞移植瘤大体观；D,LK-A对HCT116和HT-29细胞移植瘤裸鼠体重无影响；E,免疫组织化学分析提示LK-A抑制HCT116和HT-29细胞移植瘤组织中Ki-67、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达(EnVision二步染色法，xlOO)。*P0.05。48 消化肿瘤杂志电子版2024年3月第16卷第1期J Dig Oncol(Electronic Version).March 2024.Vol 16.No.I 人员一直围绕结肠癌的发病机制，探寻新的治疗途径和药物。因此，深入研究LK-A对人结肠癌细胞的抗癌作用及其机制，有利千为天然化合物抗结肠癌治疗奠定基础。在本研究中，我们评估了LK-A的抗结肠癌作用，结果发现LK-A在体外对HCT116和HT-29细胞的生长具有强烈的抑制作用，并能显著诱导其发生凋亡。我们进一步研究了LK-A治疗在异种移植裸鼠模型中的作用，发现该化合物在移植瘤体内也具有显著的抗癌作用，并且这种抗癌作用随着药物浓度的增加而明显增强。另外，药物浓度的增加并没有明显降低裸鼠体重，提示LK-A并没有引起明显的毒性作用。已有研究表明，冬凌草甲素可以抑制HeLa细胞中PI3K/AKT及叉头转录因子0(forkhead box class O,FOXO)和糖原合酶激酶3(glycogen synthase kinase-3,GSK-3)组成的活化靶标，抑制它们的增殖和诱导胱夭蛋白酶依赖性细胞凋亡气而LK-A和冬凌草甲素同属千从异山蕨中分离出来的贝壳莲类二帖9，因此，我们推测LK-A可能与冬凌草甲素有相似的作用机制。在这项研究中，我们发现LK-A以剂量依赖的方式抑制结肠癌细胞中的PI3K/AKT通路。随着LK-A药物浓度的增加，结肠癌细胞中的PI3K和AKT蛋白磷酸化水平受到显著抑制，而总的PI3K和AKT蛋白水平无显著变化。PI3K/AKT/mTOR信号通路在癌症中被激活，并且已知在广泛的细胞过程中具有关键作用，包括细胞凋亡抑制、细胞增殖和血管生成10。同样，PI3K/AKT/mTOR通路被证明在结肠癌多个细胞系中高度表达及活化，并被证明是结肠癌治疗的有效靶点11-12。mTOR是PI3K/AKT通路下游的一种重要蛋自激酶，通过进一步激活下游的核糖体激酶，来调节肿瘤细胞的增殖、存活和侵袭转移卫1气本研究中我们进一步验证LK-A的千预对PI3K/AKT通路下游mTOR的影响，结果表明LK-A同时也显著抑制了mTOR的磷酸化表达。山此可见，LK-A抑制了结肠癌细胞PI3K/AKT/mTOR通路的活化。为进一步证明LK-A抗结肠癌细胞增殖及促进其凋亡的主要机制是通过抑制PI3K/AKT/mTOR 通路，我们选择一种AKT通路经典激活剂SC79来进行研究1气结果证实，SC79有效抑制了LK-A对AKT和mTOR磷酸化的诱导作用，提示LK-A对结肠癌细胞AKT/mTOR通路的抑制作用可以被AKT通路激活剂所逆转。增殖和凋亡实验分析也证实，联合SC79干预后，LK-A诱导的结肠癌细胞增殖抑制和凋亡增加的效应受到明显抑制。这些结果表明，LK-A通过诱导PI3K/AKT/mTOR信号转导的失活，表现出显著的抗结肠癌作用。综上所述，LK-A可抑制结肠癌细胞增殖，并诱导其凋亡，具有显著的抗结肠癌活性，其作用机制与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路活化有关。参考文献 1 FABREGAS JC,RAMNARAIGN B,GEORGE TJ.Clinical Updates for Colon Cancer Care in 2022 J.Clin Colorectal Cancer,2022,21(3):198-203.2 VOGEL JD,FELDER SI,BHAMA AR,et al.The American Society of Colon and Rectal Surgeons Clinical Practice Guidelines for the Management of Colon Cancer J.Dis Colon Rectum,2022,65(2):148-177.3 CHE Y,WANG J,YUAN Z,et al.The therapeutic effects of Longikaurin A,a natural ent-kauranoid,in esophageal squamous cell carcinoma depend on ROS accumulation and JNK/p38 MAPK activation J.Toxicol Lett,2017,280:106-115.4 WENG W,GOEL A.Curcumin and colorectal cancer:An update and current perspective on this natural medicine J.Semin Cancer Biol,2022,80:73-86.5 ZOU Q,DU J,ZHANG H,et al.Anti-tumour 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