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血细胞计数板显微镜直接计算法第1页血球计数板结构和使用血球计数板结构和使用第2页 方格网上刻有方格网上刻有9个个大方格，其中只有大方格，其中只有中间一个大方格为中间一个大方格为计数室计数室，供微生物，供微生物计数用计数用。大方格长和宽各为大方格长和宽各为1mm，深度为，深度为0.1mm，即即1mm1mm0.1mm，其容积为，其容积为0.1mm3；第3页 血球计数板是一个专门用于计算血球计数板是一个专门用于计算较大单细胞微生物数较大单细胞微生物数量量仪器，由一块比普通载玻片厚特制玻片制成玻片中有仪器，由一块比普通载玻片厚特制玻片制成玻片中有四条下凹槽，组成三个平台。中间平台较宽，其中间又四条下凹槽，组成三个平台。中间平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网方格网。血球计数板结构第4页大方格中方格小方格第5页计数1625型：普通取四角四普通取四角四个中方格（个中方格（100个个小方格）计数小方格）计数2516型：普通计数四个角普通计数四个角和中央五个中方格和中央五个中方格（80个小方格）细个小方格）细胞数。胞数。第6页计数室两种规格 11625型计数板 将计数室放大，可见它含16中格，普通取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格）计数。细胞个数1mL100个小方格细胞总数/100 40010000稀释倍数 第7页22516型计数板 中央大方格以双线等分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格，供细胞计数用（见图三）。普通计数四个角和中央五个中方格（80个小方格）细胞数。细胞个数1mL80个小方格细胞总数/80 40010000稀释倍数 第8页血球计数板使用方法步骤血球计数板使用方法步骤1 1镜检计数室。在加样前，先对计数板计数室进行镜镜检计数室。在加样前，先对计数板计数室进行镜检。若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数；检。若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数；2 2加样品。将清洁干燥血球计数板加样品。将清洁干燥血球计数板计数室上加盖专用计数室上加盖专用盖玻片，用吸管吸收稀释后酵母菌悬液，盖玻片，用吸管吸收稀释后酵母菌悬液，滴于盖玻片边滴于盖玻片边缘，让培养液自行缓缓渗透，一次性缘，让培养液自行缓缓渗透，一次性充满计数室充满计数室，预防，预防产生气泡，多出培养液可用滤纸吸去；产生气泡，多出培养液可用滤纸吸去；3 3计数。稍待片刻（约计数。稍待片刻（约5min5min），待酵母菌细胞全部沉），待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部后，将计数板放在载物台中央，先在降到计数室底部后，将计数板放在载物台中央，先在低低倍镜下找到计数室所在位置后，再转换高倍镜观察、计倍镜下找到计数室所在位置后，再转换高倍镜观察、计数并统计数并统计。第9页注意事项注意事项l1.从试管中吸出培养液进行计数之前，建议将试管震荡几次，目是什么？目：使培养液中酵母菌分布均匀，以保证 估算准确，减少误差2 2 假如一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应该对假如一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应该对培养液进行稀释。详细方法是：培养液进行稀释。详细方法是：摇匀试管，取摇匀试管，取1mL1mL酵母菌培养液，加入成酵母菌培养液，加入成倍无菌水稀释，稀释倍无菌水稀释，稀释n n倍后，再用血球计数板倍后，再用血球计数板计数，所得数值乘以稀释倍数。以每小方格计数，所得数值乘以稀释倍数。以每小方格内含有内含有4545个酵母细胞为宜。个酵母细胞为宜。第10页3 3活酵母有芽殖现象，若芽体到达母细胞大小活酵母有芽殖现象，若芽体到达母细胞大小二分之一时，即可作为两个菌体计数，若芽体二分之一时，即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞二分之一时为小于母细胞二分之一时为1 1个酵母细胞。个酵母细胞。4 4对于压在方格界限上酵母菌应该计数同侧相对于压在方格界限上酵母菌应该计数同侧相邻两边上菌体数，普通可采取邻两边上菌体数，普通可采取“数上线不数下数上线不数下线，数左线不数右线线，数左线不数右线”标准处理，另两边不计标准处理，另两边不计数。数。第11页5 5计数一个样品要从计数一个样品要从两个计数室中计得平均两个计数室中计得平均数值数值来计算，对每个样品可计数三次，再取其来计算，对每个样品可计数三次，再取其平均值。平均值。6 6血球计数板清洁血球计数板清洁血球计数板使用后，用血球计数板使用后，用自来水冲洗自来水冲洗，切勿用硬，切勿用硬物洗刷，洗后物洗刷，洗后自行晾干自行晾干或用吹风机或用吹风机吹干吹干，或用，或用95%95%乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。经过镜检观察每小格内是否残留菌体其干燥。经过镜检观察每小格内是否残留菌体或其它沉淀物。若不洁净，则必须重复清洗直或其它沉淀物。若不洁净，则必须重复清洗直到洁净为止。到洁净为止。第12页例例1、通惯用血球计数板对培养液中酵母菌进行计、通惯用血球计数板对培养液中酵母菌进行计数，若计数室为数，若计数室为1mm1mm0.1mm方格，由方格，由400个小方格组成，假如一个小方格内酵母菌过多，个小方格组成，假如一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应先难以计数，应先 后再计数。若屡次重复计后再计数。若屡次重复计数后，算得每个小方格中平都有数后，算得每个小方格中平都有5个酵母菌，则个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有该培养液中酵母菌总数有 个。个。（参考答案：稀释；（参考答案：稀释；2108）540010000102108。第13页例例2.2.检测员将检测员将1 mL1 mL水样稀释水样稀释1010倍后，用抽样检测方倍后，用抽样检测方法检测每毫升蓝藻数量；将盖玻片放在计数室上，用法检测每毫升蓝藻数量；将盖玻片放在计数室上，用吸管吸收少许培养液使其自行渗透计数室，并用滤纸吸管吸收少许培养液使其自行渗透计数室，并用滤纸吸去多出液体。已知每个计数室由吸去多出液体。已知每个计数室由25162516400400个小个小格组成，容纳液体总体积为格组成，容纳液体总体积为0 01 mm1 mm3 3。现观察到图中该计数室所表示现观察到图中该计数室所表示a a、b b、c c、d d、e 5e 5个中格个中格8080个小格内共有蓝藻个小格内共有蓝藻n n个，则上述水样中约个，则上述水样中约有蓝藻有蓝藻 个个mLmL。5n105n105 5第14页解析：从例题来看，是按照血球计数板原理进解析：从例题来看，是按照血球计数板原理进行设计试题，还添加了对应图示，题意一目了行设计试题，还添加了对应图示，题意一目了然。按照前面所述公式，不难得出正确答案：然。按照前面所述公式，不难得出正确答案：酵母细胞个数酵母细胞个数1mL80个小方格细胞总数个小方格细胞总数/80 40010000稀释倍稀释倍数数n/8040010000105n105。第15页例例3、（江苏高考、（江苏高考31）（4）在整个试验过程中，直接从静置培养瓶中）在整个试验过程中，直接从静置培养瓶中取培养原液计数做法是错误，正确方法是取培养原液计数做法是错误，正确方法是 和和 。（5）试验结束后，用试管刷蘸洗涤剂擦洗血球）试验结束后，用试管刷蘸洗涤剂擦洗血球计数板做法是错误，正确方法是计数板做法是错误，正确方法是 。（参考答案（参考答案（4）摇匀培养液后再取样）摇匀培养液后再取样 样液稀样液稀释后再计数（释后再计数（5）浸泡和冲洗）浸泡和冲洗）第16页
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