不同强度超声波联合加巴喷丁...和miR-34a表达的影响_李朦.pdf

2023 年 4 月Vol.50 No.2第 50 卷 第 2 期Apr.2023国际神经病学神经外科学杂志Journal of International Neurology and Neurosurgery不同强度超声波联合加巴喷丁治疗神经病理性疼痛的临床疗效及对miR132和miR34a表达的影响李朦1，吉伟丽1，李玲芝1，杨楠1，刘彤彤21.河北大学附属医院疼痛科，河北 保定 0710002.河北大学附属医院神经内科，河北 保定 071000摘要：目的探讨不同强度超声波联合加巴喷丁治疗神经病理性疼痛的临床疗效及对 miR132 和 miR34a 表达的影响。方法选取2018年12月至2019年12月间河北大学附属医院收治的180例神经病理性疼痛患者，根据使用超声波强度的不同将其分为低、中、高强度超声波组，每组各60例。3组患者均在使用超声波的基础上联合加巴喷丁进行治疗，疗程为3个月。比较治疗前后3组的睡眠干扰、疼痛数字分级评分法评分、疼痛介质（前列腺素E2、5羟色胺、内皮素1、P物质）水平、复发状况、临床疗效及miR132和miR34a的表达水平。结果治疗前3组睡眠干扰评分、疼痛数字分级评分法评分、疼痛介质水平及miR132和miR34a 表达水平比较，差异无统计学意义（P0.05）。治疗后，3 组上述检测数值与治疗前比较均有降低，差异有统计学意义（P0.05）；高强度超声波组的检测数值低于中、低强度超声波组，差异有统计学意义（P0.05）。高强度超声波组临床总有效率为98.3%，中强度超声波组为93.3%，低强度超声波组为86.7%，3组间比较差异具有统计学意义（P0.05）。随访调查表明，高强度超声波组、中强度超声波组、低强度超声波组复发率分别为 0、5.0%、13.3%，3 组间比较差异有统计学意义（P0.05）.After treatment，all three groups had significant reductions in the above indicators（P0.05），and the highintensity ultrasound group had significantly lower values than the low and mediumintensity ultrasound groups（P0.05）.The overall response rate was 98.3%in the highintensity ultrasound group，93.3%in the mediumintensity ultrasound group，and 86.7%in the lowintensity ultrasound group，and there was a significant difference in overall response rate among the three groups（P0.05）.Followup investigation showed a recurrence rate of 0%in the highintensity ultrasound group，5.0%in the mediumintensity ultrasound group，and 13.3%in the lowintensity ultrasound group（P0.05），具有可比性，见表1。表13组患者一般资料对比62023，50（2）李朦，等：不同强度超声波联合加巴喷丁治疗神经病理性疼痛的临床疗效及对miR-132和miR-34a表达的影响http:/Numerical Rating Scale（NRS）pain score，levels of pain mediators（prostaglandin E2，5hydroxytryptamine endothelin substance P），recurrence，clinical outcome，and the expression levels of miR132 and miR34a before and after treatment.ResultsBefore treatment，there were no significant differences among the three groups in sleep disturbance score，NRS pain score，the levels of pain mediators，and the expression levels of miR132 and miR34a（P0.05）.After treatment，all three groups had significant reductions in the above indicators（P0.05），and the highintensity ultrasound group had significantly lower values than the low and mediumintensity ultrasound groups（P0.05）.The overall response rate was 98.3%in the highintensity ultrasound group，93.3%in the mediumintensity ultrasound group，and 86.7%in the lowintensity ultrasound group，and there was a significant difference in overall response rate among the three groups（P0.05）.Followup investigation showed a recurrence rate of 0%in the highintensity ultrasound group，5.0%in the mediumintensity ultrasound group，and 13.3%in the lowintensity ultrasound group（P0.05），具有可比性，见表1。表13组患者一般资料对比组别 低强度超声波组 中强度超声波组 高强度超声波组 F/2值 P值例数606060性别n(%)男34（56.7）31（51.7）33（55.0）0.3140.855女26（43.3）29（48.3）27（45.0）年龄/岁；(x-s)55.135.58 54.726.09 55.075.77 0.087 0.917病程/年；(x-s)4.351.06 4.381.12 4.361.08 0.012 0.989诊断类型n(%)糖尿病性周围神经痛20（33.3）21（35.0）19（31.7）0.150 0.928 带状疱疹后遗神经痛23（38.3）18（30.0）19（32.0）1.050 0.600 三叉神经痛17（28.3）21（35.0）22（36.7）1.050 0.600 7http:/2023，50（2）李朦，等：不同强度超声波联合加巴喷丁治疗神经病理性疼痛的临床疗效及对miR-132和miR-34a表达的影响1.2治疗方法3组患者均采用超声波联合加巴喷丁治疗。3组的治疗时间均为3个月。加巴喷丁（江苏恒瑞医药股份有限公司，国药准字H20080268，规 格 100 mg/粒）口 服，每 日 3 次，每 次100 mg，如果患者有不良反应出现，则暂时停止用药。使用ES2 型超声波治疗仪（北京天行健医疗科技有限公司生产）进行治疗。采用直接接触移动法设置超声波强度：低强度超声波组超声波范围为0.51.0 W/cm2；中强度超声波组超声波范围为1.01.75 W/cm2；高强度超声波组超声波范围为1.752.50 W/cm2。将超声头直接置于疼痛部位皮肤，以碘甘油为耦合剂，进行均匀螺旋式移动，每次治疗15 min，每天治疗1次，每治疗5次休息2 d，治疗10次为1个疗程，1个疗程14 d。3组的治疗时间均为3个月。1.3观察指标1.3.1疼痛及睡眠干扰评分疼痛评分：采用数字分级评分法（Numerical Rating Scale，NRS）评估患者疼痛程度，无痛为0分，剧烈疼痛为10分，让患者自己选择010间的数字7。睡眠干扰评分：是疼痛对睡眠影响的评定，采用11点数字等级评分（010分），记录 24 h内疼痛对睡眠的影响，无影响为0分，因疼痛无法入睡为10分。1.3.2miR132和miR34a表达水平3组患者入组后，应用实时荧光定量PCR法检测单个核细胞中miR132和miR34a的表达量。使用miRNeasy Serum/plasma试剂盒（北京依托华茂生物科技有限公司）提取RNA，严格按照说明书操作。将 miRNA 溶 于 30 L dd H2O 中，使 用 Thermo NanoDrop2 000超微量紫外分光光度检测RNA纯度、含量（在260 nm和280 nm处的吸光度比值，取1.82.0之间的样品，置于80 冰箱保存）。使 用 EasyScript First Strand cDNA Synthesis SuperMix 试剂盒（北京全式金生物技术有限公司）制备cDNA作为模板，分别配置miR132和miR34a反应管，严格按照试剂盒说明书操作。设置反转录反应条件：25 10 min、40 60 min、85 5 min；设置扩增条件：94 20 s、72 30 s、60 30 s，35个循环，逆转录处理后获得cDNA。miR132引物序列：正向5UAACAGUCUACAGCCAUGGUCG 3，反 向5 CGACCAUGGCUGUAGACUGUUA3；miR34a引物序列：正 向 5 TGGCAGTGTCTTAGCTGGTTGT 3，反 向 5 AACCAGCTAAGACACTGCCATT3。用Primer5.0软件设计引物，根据2Ct进行计算，以GADPH内参。计算出需要检测的miR132和miR34a表达量。1.3.3 疼 痛 介 质 水 平 以 15 cm 的 离 心 半 径，经3 800 r/min离心10 min，分离血清，将其保存于70的冰箱中。采用酶联免疫吸附试验检测疼痛介质，包括前列腺 素 E2（prostaglandin E2，PGE2）、5 羟 色 胺（5 hydroxytryptamine，5HT）、P 物质（substance P，SP）、内皮素1（endothelin 1，ET1），严格遵守试剂盒（上海信裕生物技术有限公司，生产批号：910214、9245350、9830602、7593407）说明书进行操作。1.3.4临床疗效依照2009年神经病理性疼痛诊治专家共识6，服药 2周疼痛缓解程度依照以下标准进行记录：未缓解为0度，缓解约25%为度，缓解约50%记为2度，缓解约75%以上记为3度，疼痛消失记为4度。0度属于无效，12 度为有效，34 度为显效。总有效=显效+有效。1.3.5随访复发情况门诊及电话定期随访，分别在治疗后第12个月评估神经病理性疼痛的复发率。1.4统计学方法采用统计软件 SPSS 25.0 进行统计学分析。采用KolmogorovSmirnov检验数据是否符合正态分布，Levene法进行方差齐性检验，符合正态分布且方差齐的计量资料以均数标准差（x-s）表示，3组间比较采用单因素方差分析，治疗前后的比较采用配对t检验；计数资料以例数和百分比 n（%）表示，组间比较采用2检验。P0.05）。治疗后，3 组睡眠干扰评分与疼痛NRS 评分均有所降低，差异具有统计学意义（P0.05）。组间两两比较显示，高强度超声波组睡眠干扰评分与NRS评分降低最为显著，中强度超声波组次之，差异具有统计学意义（P0.05）；治疗后，3组miR132、miR34a均有所降低，差异具有统计学意义（P0.05）。组间两两比较显示，高强度超声波组miR132、miR34a降低最为显著，中强度超声波组次之，差异具有统计学意义（P0.05）。治疗后，3组PGE2、5HT、ET1 和 SP 水平均有所降低，差异具有统计学意义（P0.05）。组间两两比较显示，高强度超声波组PGE2、5HT、ET1和SP指标降低最为显著，中强度超声波组次之，差异具有统计学意义（P0.05），见表4。2.43组临床疗效比较高强度超声波组临床总有效率最高，中强度超声波组次之，差异具有统计学意义（P0.05），见表6。2.63组12个月随访复发率比较治疗后12个月随访显示，低、中、高强度超声波组的复发率分别为13.3%（8例）、5.0%（3例）、0（0例），3组间复发率的比较差异具有统计学意义（2=9.490，P=0.009）。表23组睡眠干扰及疼痛NRS评分比较 （x-s）组别 低强度超声波组 中强度超声波组 高强度超声波组 F值 P值例数606060睡眠干扰评分/分治疗前5.211.08 5.161.15 5.241.10 0.079 0.924治疗后4.340.42 3.670.45a 2.010.44ab 452.405 0.001t值11.32525.41910.927P值0.0010.0010.001NRS评分/分治疗前6.701.32 6.581.24 6.631.27 0.134 0.875治疗后3.190.82 2.750.57a 2.000.49ab 52.664 0.001t值13.58219.60228.591P值0.0010.0010.001注：a与低强度超声波组相比，P0.05；b与中强度超声波组相比，P0.05。表33组miR132和miR34a表达水平比较 （x-s）组别 低强度超声波组 中强度超声波组 高强度超声波组 F值 P值例数606060miR132治疗前1.920.87 2.010.91 1.950.90 0.158 0.854治疗后1.430.73 1.290.65a 1.040.59ab 5.390 0.005t值21.92318.42115.991P值0.0010.0010.001miR34a治疗前1.870.75 1.900.83 1.930.78 0.087 0.917治疗后1.740.64 1.490.57a 1.030.62ab 20.865 0.001t值18.93721.83514.091P值0.0010.0010.001注：a与低强度超声波组相比，P0.05；b与中强度超声波组相比，P0.05。表43组疼痛介质水平比较 （x-s）组别 低强度超声波组 中强度超声波组高强度超声波组 F值 P值例数606060PGE2（ng/L）治疗前118.8827.87123.4725.64120.2124.350.4950.610治疗后86.4420.45 72.3721.32a 66.8319.87ab 14.513 0.001t值25.2259.1728.726P值0.0010.0010.0015HT（ng/L）治疗前0.680.18 0.710.16 0.650.13 2.163 0.118治疗后0.510.11 0.360.09a 0.280.07ab 97.769 0.001t值14.22421.81134.109P值0.0010.0010.001注：a与低强度超声波组相比，P0.05；b与中强度超声波组相比，P0.05。续表4组别 低强度超声波组 中强度超声波组 高强度超声波组 F值 P值例数606060ET1（ng/L）治疗前210.3522.46 207.0322.72 208.5220.66 0.344 0.710治疗后132.5822.25 117.3322.36a 95.8421.20ab 42.456 0.001t值12.91214.95218.238P值0.0010.0010.001SP（ng/L）治疗前70.378.91 70.249.07 69.849.12 0.056 0.946治疗后65.649.27 60.9110.06a 54.8810.40ab 10.116 0.001t值21.94120.11822.903P值0.0010.0010.001注：a与低强度超声波组相比，P0.05；b与中强度超声波组相比，P0.05。9http:/2023，50（2）李朦，等：不同强度超声波联合加巴喷丁治疗神经病理性疼痛的临床疗效及对miR-132和miR-34a表达的影响3讨论神经病理性疼痛属于慢性疼痛，其发病机制较为复杂，通常是由于神经系统功能发生受损或者异常而产生疼痛，最常见的类型有三叉神经痛、带状疱疹后神经痛及糖尿病性周围神经痛等。以异常疼痛、自发性疼痛、感觉异常、痛觉过敏为临床特征89。流行病学调查显示，神经病理性疼痛的发病率为6.9%10%，而其临床治疗一直是亟待解决的难题，目前尚无特效治疗药物。加巴喷丁是由美国研发的抗癫痫药物，该药物可有效缓解不同原因引发的神经病理性疼痛10。相关文献显示，加巴喷丁可以有效改善神经病理性疼痛患者的睡眠，其作用机制主要是阻断交感神经与感觉神经之间的传出、传入冲动，以此减缓疼痛程度，不过长期服用容易引发药物不良反应1112。而超声波会促进局部细胞组织细胞质流动，以自身理化、机械、温热效应让局部处于运动、震荡及旋转中，进而改变组织pH值，增强新陈代谢，促进机体病变组织局部的血液循环，降低神经的兴奋程度，以此来实现止痛的作用1314。本研究结果显示，治疗后3组睡眠干扰评分、NRS 评分有所降低，有效缓解了患者疼痛。在神经病理性疼痛发病过程中，疼痛介质会有异常表达，PGE2会使组织对致痛因子的敏感程度增加，加重痛感15；5HT上调降钙素基因相关肽的免疫反应活性表达，加重痛感16；ET1在周围神经系统发生作用，强化机体痛敏17；SP发送伤害性刺激信息到脊髓角中，致使细胞痛感增强18。本研究结果显示，3组疼痛介质水平均有所降低，且高强度超声波组相关指标升高（或降低）程度最为显著，中强度超声波组次之，这表明在联合治疗中，超声波强度越大，患者睡眠情况、睡眠干扰及疼痛程度的改善越显著，患者机体越能得到有效调节、生存质量越佳。这可能是超声波作用于神经组织和细胞时，影响神经细胞膜对Ca2+和K+等机械敏感离子的通透性，并使跨膜电流或膜电位大小发生变化，改变了神经元的兴奋性，通过对中枢神经系统或周围神经系统的有害刺激进行调节来减轻疼痛。高强度超声波一般控制在3 w/cm2以内，超声作用时是热作用和机械作用同时发生，脉冲或连续超声波的波形、持续时间和频率也是关键参数，因此超声波对神经细胞影响程度与超声波强度相关，超声波强度越大，疼痛程度改善越显著1921。Chen等22证实，高强度超声波对大鼠因神经损伤引起疼痛有明显的降低作用。相关研究发现，miR132和miR34a不仅参与脊髓的形成、神经元的存活、神经系统的分化及轴突的生长，还在神经病理性疼痛产生过程中发挥重要作用 2324。其会因表达量的升高而使慢性疼痛持续增加25。有研究显示，miR132和miR34a通过调控多个靶基因翻译、转录而改变神经元的可塑性2627。在本研究中，治疗后3组的miR132和miR34a表达水平均有所降低，且高强度超声波组降低程度最为显著，中强度超声波组次之。这表明在联合治疗中，超声波强度越大，miR132和miR34a表达水平越低，神经病理性疼痛发生发展的活跃性会受到抑制，这或许与联合治疗可最大限度刺激 miR132 和miR34a 表达水平的降低有关。其可能的机制是下调miR132和miR34a表达水平，减少异常升高的5HT和SP的产生，降低痛觉传入神经的兴奋性，进而缓解疼痛。另外，本研究结果还显示，高强度超声波组临床疗效、复发情况最佳，其次是中强度超声波组，这表明超声波强度越大，患者临床及预后效果越佳，3组患者的不良反应发生率无明显差异。综上所述，不同强度超声波治疗联合加巴喷丁治疗神经病理性疼痛效果显著，随着超声波强度的增加，联合治疗发挥的作用越明显。高强度超声波可有效提高患者睡眠质量，降低miR132和miR34a表达水平，改善患者疼痛程度，具有良好临床疗效，值得推广运用。由于研究时间和经费有限，本研究所纳入的病例数较少，且全部来自我院，非大样本研究，可能存在一定的误差，后续还需增加样本量进一步研究。参 考 文 献1谢曌璐，张卿，邓冬梅，等1例合并神经病理性疼痛的癌痛患者的药学实践J医药导报,2021,40(6):818821.2巴茜远，郝悦，肖礼祖，等化疗所致神经病理性疼痛机制的研究进展J中国疼痛医学杂志,2021,27(5):367371.3李豹，李琪，李长华，等超声理疗对创伤性骨折患者术后患肢疼痛及肿胀的影响J中华物理医学与康复杂志,2020,42(5):456457.4徐清榜，郑小岚，陈永兵，等艾瑞昔布片联合加巴喷丁用于表63组不良反应情况比较 n(%)组别低强度超声波组中强度超声波组高强度超声波组 2值 P值例数606060头晕1（1.7）2（3.3）2（3.3）浮肿2（3.3）2（3.3）3（5.0）乏力1（1.7）1（1.7）1（1.7）嗜睡1（1.7）2（3.3）2（3.3）不良反应发生率5（8.3）7（11.7）8（13.3）0.788 0.675 表53组临床疗效比较 n(%)组别低强度超声波组中强度超声波组高强度超声波组 2值 P值例数606060显效19（31.7）22（36.7）24（40.0）有效33（55.0）34（56.7）35（58.3）无效8（13.3）4（6.7）1（1.7）总有效52（86.7）56（93.3）a 59（98.3）ab 6.135 0.047 注：a与低强度超声波组相比，P0.05；b与中强度超声波组相比，P0.05。102023，50（2）李朦，等：不同强度超声波联合加巴喷丁治疗神经病理性疼痛的临床疗效及对miR-132和miR-34a表达的影响http:/膝关节骨性关节炎病人镇痛研究J中国疼痛医学杂志,2020,26(5):389392.5LU S,MA SC,WANG YY,et al.Mus musculusmicroRNA449a ameliorates neuropathic pain by decreasing the level of KCNMA1 and TRPA1,and increasing the level of TPTEJ.Mol Med Rep,2017,16(1):353360.6倪兵，朱宏伟，张晓华，等脊髓电刺激治疗脊柱外伤后神经病理性疼痛临床研究J中国疼痛医学杂志,2021,27(1):6771.7U.S.Department of Health and Human Services 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