战略性新兴产业发展专项项目建设可研报告.doc

战略性新兴产业发展专项项目可行性研究报告项 目 名 称：国家一类新药外用重组人碱性成纤维细胞生长因子及其系列制剂的研究开发及产业化项目承担单位：南海朗肽制药有限公司 南海朗肽制药有限公司2010年11月目录一、 项目承担单位基本情况1. 项目承担单位生产能力1.1. 设备、设施的建设1.2. 生产工艺的先进性2. 项目承担单位研发能力2.1. 研发人员情况2.2. 近三年平均研发经费情况2.3. 研发设施设备情况2.4. 自主研发成果3. 项目的建设条件落实情况4. 项目承担单位财务状况二、 项目建设内容1. 项目的意义2. 项目建设的重要性3. 项目具体内容及研究方案4. 项目的技术特色和水平5. 项目的技术经济指标6. 项目发展进度三、 项目技术路线1. 技术总路线2. 关键技术及创新点分析四、 现有研发及生产条件1. 项目承担单位基本条件2. 人才团队条件3. 项目骨干及分工4. 生产及产业化条件五、 管理团队水平1. 管理层水平2. 科研项目管理制度建设六、 项目产业化前景1. 产品的市场需求预测2. 产品市场供应预测3. 项目产品成本及价格分析4. 产品的市场竞争力分析七、 项目产品产业化方案1. 项目产品的总体开发思路2. 成果转化模式3. 产业化实施地点、内容和方案八、 项目的经济效益和社会效益评述1. 本项目的经济效益2. 本项目的社会效益九、 环境保护状况分析1. 水污染源及处理措施2. 废气污染源及处理措施3. 固体废物及处理措施4. 噪音及处理措施十、 风险分析1. 技术风险2. 项目人员风险3. 政策及审评风险4. 新品替代5. 市场风险一、 项目承担单位基本情况项目承担主体是南海朗肽制药有限公司，公司注册地广东省佛山市南海区，注册资本1000万元，实际投入资金7331万元。南海朗肽制药有限公司是由南海能兴（控股）集团有限公司和暨南大学（医药生物技术研究开发中心）合作兴建的有限责任公司。能兴集团以房地产、商业、陶瓷等产业为主营业务，是年纳税超亿元的中国500强企业，暨南大学是具有百年历史的岭南名校，在生物工程、企业管理等领域具有传统优势。现将南海朗肽制药有限公司基本情况总结如下：1. 项目承担单位生产能力1.1. 设备、设施的建设公司已经于2003年建立935 m2的生产车间和附属设施，可生产冻干制剂，喷雾剂和小容量注射剂等，并于2004年10取得国家食品药品监督管理局的药品GMP认证证书。有各种设备100余台，有冷冻离心机，PCR仪，高压电泳仪，层析设备，酶标仪，紫外分光光度计，二氧化碳培养箱，高效液相色谱仪，高温高压灭菌器，倒置显微镜，超低温冰箱（-85），细胞培养室，凝胶干燥器，凝胶扫描仪，水分检测仪，透射仪，低温层析柜，全自动发酵罐，高速离心机，洗瓶机，灌装机等一大批高档仪器，可以完成生物新药、生物化妆品的生产、研究和检测。 在小规模生产取得经验与成功的基础上，公司继续投资兴建符合GMP标准的生产基地，以实现此项目的产业化并打入国际市场。此生产基地包括生产车间 、质检研发中心、办公楼、库房与公用辅助用房。现已建设完成，并已经于2010年8月通过GMP认证。该生产基地的有部分设备为原有的旧设备，大部分设备未新购买的设备，如空调系统、冻干机、洗烘联动机、纯蒸汽系统等。新旧设备均进行了安装调试，并经过验证合格。可进行多种制剂的生产，如冻干制剂、喷雾剂和小容量注射剂等，生产能力由原来的每年20万支提高提高至每年800万支。1.2. 生产工艺的先进性本项目技术在引进以后，通过不断地消化吸收，已经形成了完善的生产工艺，通过完善发酵和纯化工艺，使得菌种的目的蛋白表达量有显著提高，表达量处于国内外先进水平；通过车间技术改造，增加了洗烘灌联动线、冻干机、全自动轧盖机等新设备设施，实现了生产过程的自动化，提高了生产工艺水平。2. 项目承担单位研发能力公司十分重视研究开发工作，建厂伊始就参与基因工程药物国家工程中心建设，投资兴建了朗肽生物制药工程研究院做为研发实体，研究院以暨南大学为技术依托，建立了基因工程、蛋白质工程、干细胞工程和制剂工程等四个研究平台。2.1. 研发人员情况公司现有人员62人，其中技术人员31人，占总人数的50%，其中博士、硕士5人，具中高级职称以上的8人，专科以上学历人员45人，占总人数72%，管理人员7人，占总人数的11%。技术人员有关基因工程、药化、药效、药动、制剂、制药设备等方面有良好的理论和实验基础。为提高研发工作的有效性，企业建立了相关机制从人力、资金等方面保障研发工作的正常开展。开发工作主要实行项目负责制，每个项目从立项到人员、资金配备、研发计划等均通过科技开发管理制度等制度进行规范，由相应的项目负责人全权负责推进研发工作，并全程引入成本效益核算体系，项目出成果后，对项目负责人和相关研发人员根据立项书的约定给予相应奖励。由于有以上机制的保障，近年来公司的研发工作进展顺利。2.2. 近三年平均研发经费情况年份2007年2008年2009年投入资金2.3. 研发设施设备情况公司建立有中试生产车间，有各种设备100余台，有离心机、PCR仪、电泳仪、酶标仪、紫外分光光度计、二氧化碳培养箱、高效液相色谱仪、高压灭菌器、倒置显微镜、超低温冰箱（-85）、凝胶扫描仪、水分检测仪、全自动发酵罐等一大批高档仪器设备，能满足项目产品的研究开发。2.4. 企业自主研发成果现有在研项目十余项，包括成纤维细胞生长因子结构与功能的关系研究；蛋白质药物新剂型的开发（外用溶液、凝胶剂、脂质体，滴眼剂）；成纤维细胞生长因子突变体表达菌株的构建、表达、活性研究。其中重组人碱性成纤维细胞生长因子外用溶液与凝胶剂于2004年底开始进行临床前研究工作，已经完成临床前研究工作，现已获得临床试验批件（重组人碱性成纤维细胞生长因子外用溶液，批件号：2006L047922006L04791；重组人碱性成纤维细胞生长因子外凝胶剂，批件号：2006L027882006L02787），目前正在进行期临床试验。重组人碱性成纤维细胞生长因子滴眼液正在进行临床前研究，已经完成了药学研究部分，正在进行药理毒理等动物试验。上述三个新药均申请了专利，其中重组人碱性成纤维细胞生长因子滴眼液已进入实质审查阶段。序号专利名称专利类别申请号申请日期1一种重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂及其制备方法发明200510036465.32005年2重组人碱性成纤维细胞生长因子外用溶液及其制备方法发明200510036641.32005年3人碱性成纤维细胞生长因子滴眼液及其制备方法发明201010149385X2010年3. 项目的建设条件落实情况本项目的建设条件落实情况分为国家一类新药外用重组人碱性成纤维细胞生长因子（冻干粉）的产业化已经全部建设完成，土地证已在本公司名下，总投资为8711万元，该项目被列为国家高技术产业化示范工程，目前已经通过消防、环保、建筑验收和GMP认证。其次是围绕该产品开发新的剂型，扩大使用范围和适应症，包括重组人碱性成纤维细胞生长因子外用凝胶、外用溶液和滴眼液，其中重组人碱性成纤维细胞生长因子外用凝胶、外用溶液已经完成专利申请、专利公开、临床批件、临床伦理委员会批件；重组人碱性成纤维细胞生长因子滴眼液已经完成处方、工艺研究，稳定性考察也已完成，并取得专利授权。原料生产条件已经具备，减少重复建设原料生产车间的浪费，后期需要继续开展临床观察和产业化投资，预计需要新增投资6930.30万元。三个新制剂的技术完全由企业自主研发，拥有自主知识产权。4. 项目承担单位财务状况我公司于2003年4月份成立，2004年10月通过GMP认证，于2005年10月正式开始生产经营，属于高速成长的医药制造企业。截止2009年12月，公司总资产为3439.17万元，其中公司注册资本投入1000万元，流动负债为464.9万。近三年我公司主要财务指标情况见下表：项 目2007年12月31日2008年12月31日2009年12月31日总资产总负债净资产固定资产总额主营业务收入主营业务利润净利润上缴税费资产负债率流动比率速动比率主营业务利润率净资产收益率经营现金净流量财务风险评价：我公司作为一家成立三年的医药类企业，企业投资全部为股东投入，无银行借款，无大额超期的未付款，目前企业已正式开始销售，2006年的经营性现金流未出现为负的情况，亏损主要是前期投资摊销导致的投入性亏损，因此，我公司不存在大的财务风险。经营风险评价：我公司主要采用全国总代理的形式进行销售，现款现货，以销定产，不存在应收账款和不良存货；我公司在2004年被列为国家示范工程，生物制药属于国家鼓励和支持发展项目，故不存在大的政策风险。二、 项目建设内容1. 项目的意义我国是一个发展中国家，目前人民健康水平还比较低，人口老龄化和各种自然灾害的发生，各种烧伤、创伤病人以及糖尿病等疾病引起的慢性溃疡的患者人数在不断增加。据统计，每年仅患组织损伤和体表溃疡性疾病的患者就达到2000万人以上。因此，促进创面愈合并尽快封闭创面，就成为目前临床治疗中的重要课题之一。大量的研究和实验表明，重组人碱性成纤维细胞生长因子在创面治疗上，具有显著的疗效。成纤维细胞生长因子（Fibroblast growth factor,FGF）主要包括酸性成纤维细胞生长因子（aFGF)和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)两种，是一类对来源于中胚层和神经外胚层的多种类型的细胞具有广泛的生物学火星的细胞生长因子。FGF在临床上具有广泛的应用前景，可用与创伤修复、心脑血管疾病的治疗（如心肌缺血、脑中风）、神经系统疾病的治疗（如帕金森氏症等）等。本项目的建设实施对我国医药产业的发展以及人民身体健康水平的提高有着重要的战略意义。1.1. 对我国医药产业的生存和发展具有重大的战略意义我国已经加入WTO，随之而来的知识产权保护将对我国医药产业产生巨大的影响。缺乏拥有自主知识产权的新药，就将受制于人，无力参与国际竞争。因此，加速开发具有自主知识产权的创新药物对中国的医药产业的生存和发展具有中的的战略意义。本项目已经申请国家专利，并已经获得第一批“十五”国家重大科技专项和国家高新技术研究发展计划（863计划）课题专题。本项目的主要目标正是将我国自主研发的具有自主知识产权的创新性基因工程一类新药实施产业化及研究开发以此为核心的系列制剂，从而推动我国医药产业的发展。1.2. 技术水平先进，临床及社会意义重大。在日常生活中，有诸多的原因可导致创面的产生。创面的存在轻则增加病人的痛苦，影响正常的学习生活，重则危及生命。大面积创面的存在，可以影响机体的代谢、营养和免疫功能，甚至招来致命性的全身感染，对患者本人、家庭、社会构成很多社会、经济以及心理问题。一次，促进创面愈合尽快封闭创面，是临床治疗中的重要课题。基础研究、动物试验和临床试验表明，重组人碱性成纤维细胞生长因子作为调控机体创面愈合的细胞因子，可促进各种组织损伤的修复，改善伤口愈合。在创面治疗上，包括大面积烧伤创面和一些慢性难愈合创面（如糖尿病人的慢性创面、褥疮及各种慢性溃疡等），疗效显著。因此，将重组人碱性成纤维细胞生长因子应用于各种急慢性体表溃疡、外科烧烫伤患者，使他们获得更好的一致病康复，以健康的身心投入社会劳动，为社会创造新的财富，将产生巨大的社会和经济效益。2. 项目建设的重要性2.1. 加速具有自主知识产权的生物制品的研究和生产，促进我国生物制药产业的发展，提高国际竞争力。生物技术是四大高新技术之一，二十一世纪将是生命科学的世纪，而生物技术则是生命科学的核心。以生物技术为手段的生物技术产业是二十一世纪的朝阳产业，具有广阔的发展前景。许多国家把发展生物技术作为重大的国家需求，从战略的高度积极促进其发展。如美国对生物技术的研发投入已达到国内总产值的0.2%，生物技术产业的产值在国内总产值中的比重也迅速上升。随着中国加入WTO，国外制药企业将大量涌入中国药品市场，中国民族制药工业面临新的挑战。经济领域的竞争最终归结于科学技术的竞争，因此，创新产品的研制及产业化开发已经成为中国生物技术产业及其他高新技术产业发展的当务之急和必然趋势。开发并生产创新药物是一个国家医药创新能力和水平的体现，也是知识产权保护、医药产品市场国际化和发展民族医药产业的需要。生物医药是当今高新技术产业领域中最具发展前景的产业之一，产品涉及预防、医疗、诊断等领域。一批具有重要生理功能和药理作用的生物技术产品症逐步成为药品进入市场，形成一个新兴的生物医药产业。本项目技术已达到国际先进水平，在临床方面更是处于国际领先水平。因此，实施本项目抢占生物制药行业的制高点，将有助于提升我国的生物制药行业的国际竞争力。2.2. 为患者提供疗效显著、安全可靠的药物，促进人类健康重组人碱性成纤维细胞生长因子是一种很强的丝裂原，具有促进各种软组织损伤修复的作用，可用于创伤、烧伤、溃疡等的治疗，能明显缩短疗程和改善与和质量；他可以促进毛细血管的生长分化和侧枝循环的建立，有利于改善局部血液循环，参与胃溃疡的愈合过程以及参与心肌缺血与心肌梗塞的修复过程；他可以促进神经组织再生，加速神经损伤修复。因此，本项目的建设实施将为扩大烧伤、创伤及溃疡患者提供疗效显著、安全可靠的治疗药物，促进人类的健康水平。2.3. 加快高新技术产业化和产业结构调整及优化本项目所在的广东省佛山市地处珠江三角洲平原核心地带，具有明显的区位优势。改革开放以来，佛山市迅速完成了工业化所需的资本原始积累，并形成了多个极具特色的产业族群，由此带动了地方经济的快速增长。但毋庸置疑的是，这个产业结构以轻型、劳动密集型为主，同时面临附加值不高、市场竞争激烈和发展后劲不足等问题。产业结果状况是一个地区经济实力和总体竞争力的重要载体。要促进经济更加快速有效的发展，必须这里抓好产业结构调整。这是佛山打造广东第三大城市，实现经济腾飞的关键。从产业基础和市场情景看，重点发展电子信息、新材料、光机电一体化、生物医药和机械装备等高增长、高带动的产业，将可以在较短的时间内建立起产业规模和竞争能力。本产业化项目集科研、开发、生产于一体，将填补该地区生物制药产业的空白，并为广东省或省外高校、研究机构和企业进行基因药物的研究和实施产业化提供技术平台。同时促进国内生物技术创新性药物的研究开发，加快生物工程药物产业化，实现产业结构优化调整。综上所述，将这一成熟、先进的高新技术成果应用到规模生产中，时非常重要的。3. 项目具体内容及研究方案3.1. 重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）产业化主要研究内容、拟解决的技术难点bFGF是一种多功能细胞生长因子，能刺激中胚层和神经外胚层来源细胞的增殖，并具有促进修复和再生的作用。十多年来bFGF在临床上应用于治疗创伤、烧伤、慢性溃疡等方面起到非常好的治疗作用。本项目来源于国家863计划，已经完成临床和中试，并获得国家一类新药证书及药品生产文号，生产技术与工艺比较成熟，产业化研究的内容主要是大规模生产的工艺稳定性、成本控制、质量控制，重点需解决的问题如下：3.1.1. 重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）与其他细胞生长因子相比，发酵条件比较难以控制，常因pH值等变化导致细菌不生长或无表达，本项目的重点工作之一是摸索大规模发酵的条件，如细菌接种量、溶氧、搅拌转速等工艺参数，建立细菌OD值、诱导时间与目的蛋白表达量的关系曲线，确定最优发酵的条件。3.1.2. 重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）是相对不稳定蛋白，分离纯化及稀释过滤过程中容易出现聚合或者降解，导致纯度或活性等不符合质量标准，所以在制备过程中重点提高目的蛋白稳定性。3.1.3. 重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）的活性受温度和水分含量的影响较大，因此，在冻干过程中重点需要考察不同温度与冻干时间对水分含量与活性的影响，以选择最适当的温度和冻干时间，使冻干粉的水分含量低于3%，且活性受到的影响降到最低。由于重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）属于不稳定活性多肽，容易聚合和降解而导致生物活性降低，解决上述问题之后将为这一类蛋白的制备提供参考，建立解决蛋白类药物普遍存在的“瓶颈”技术平台。3.2. 重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）系列制剂的研究内容、拟解决的技术难点由于重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）是多功能刺激因子，对与创伤修复有关治病有广泛治疗作用，但由于其生物活性受多种因素的影响而不稳定。冻干粉剂能够使其活性长期保存，在28保存时有效期为24个月；但是冻干粉剂在临床应用上存在使用不方便等问题，迫切需要其他剂型来取代；因此，开发经过改构或化学修饰的生物活性稳定的重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）并用之于新剂型的开发极为必要。3.2.1. 重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）凝胶剂的研究内容、拟解决的技术难点凝胶剂是近几年局部外用制剂研发的热点，凝胶剂作为新的药物剂型在临床上应用已经得到肯定，但由于技术原因蛋白质类凝胶剂并不多见，重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）凝胶剂尚未上市。3.2.1.1. 主要研究开发内容3.2.1.1.1. 凝胶剂处方、稳定性、生产工艺、质量标准。3.2.1.1.2. 凝胶剂300例期临床试验，重点与冻干粉比较观察对新鲜创面的疗效。3.2.1.1.3. 脂质体配方；凝胶剂生物活性保护剂与bFGF的稳定性和生物活性的研究；多种药效成分的协同性研究。3.2.1.1.4. 脂质体凝胶剂的制备及质量标准控制，凝胶剂的生产工艺，样品的制备和质量标准的控制，稳定性实验。3.2.1.1.5. 脂质体凝胶剂的临床前药理毒理实验。3.2.1.2. 技术创新点3.2.1.2.1. 凝胶剂加入可与bFGF特异结合的肝素，以增强bFGF与受体的结合能力，并增强对酸、碱、热等因素的抗性，加入肝素后，生物学活性提高至少2倍，提高了产品的质量标准。3.2.1.2.2. 凝胶剂处方中的卡波姆和透明质酸的合理配比使其兼具缓释和保湿功能。3.2.1.2.3. 脂质体主要由天然磷脂和胆固醇组成，进入体内后可被生物降解，不会积累在体内，且免疫原性小。重组人bFGF包埋在脂质体内，从脂质体中缓慢释放，使药效持续较长时间。通过细胞内吞和融合作用，脂质体可直接将药物送入细胞内，避免使用高浓度游离药物。3.2.1.2.4. 凝胶剂作为脂质体局部给药的载体，可在脂质体周围形成一道屏障控制脂质体中药物释放的速率，避免药物的突释效应，同时凝胶剂手感细腻，易清洗。3.2.1.3. 拟解决的技术难点3.2.1.3.1. 重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）与肝素的结合比例将影响到其生物活性，因此，通过实验摸索其与肝素结合的最佳比例将成为该剂型开发的重点工作之一。3.2.1.3.2. 重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）通过包埋于脂质体中，将极大的提高其稳定性，同时延长其给药时间，提高疗效。因此，脂质体包埋技术将是该剂型开发的另一重点难点技术。3.2.1.4. 该剂型目前研究进展3.2.1.4.1. 已经完成了临床前的研究，初步确定了该剂型的处方和生产工艺，确定了与肝素的结合比例，解决了其脂质体包埋技术。3.2.1.4.2. 已经获得了临床批件，已经完成了、期临床试验，目前正在进行期临床试验。3.2.2. 重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）滴眼剂的研究内容、拟解决的技术难点眼表疾病是我国最主要和最常见的致盲眼病之一，该病病因复杂，治疗棘手，常因诊治延误导致愈合延迟或者不愈合，甚至致盲。重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）作用于眼表病变部位，可激活调控与修复有关细胞的增殖、移行，促进细胞代谢、改善营养，主动促进修复，加速愈合。3.2.2.1. 主要研究开发内容3.2.2.1.1. 滴眼剂的处方：采用MTT法分别考察所用辅料对bFGF稳定性和生物活性的影响；采用正交试验考察药效成分与辅料之间的协同性研究。3.2.2.1.2. 滴眼液的制备及质量标准控制：通过试验确定常规制备方法是否能满足滴眼剂外观形状的要求；采用澄明度检测仪检测澄明度，并进行无菌检测；参照冻干粉剂的检定规程，摸索滴眼剂的活性测定方法。3.2.2.1.3. 滴眼剂的临床前研究：药理学实验；毒理学实验；药效学实验。3.2.2.2. 拟解决的技术难点3.2.2.2.1. 重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）是不稳定的活性多肽，需要通过大量的结构和功能研究确定突变点，构建一株高效表达的工程菌。3.2.2.2.2. 寻找新型的赋形剂、保护剂、以解决滴眼剂的活性稳定性及刺激性问题。3.2.3. 重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）外用溶液的研究内容、拟解决的技术难点3.2.3.1. 主要研究内容3.2.3.1.1. 外用溶液的处方：采用MTT法分别考察所用辅料、试剂对rhbFGF的稳定性和生物活性的影响；采用正交及均匀设计考察药效成分与辅料之间的协同性研究。3.2.3.1.2. 外用溶液的制备及质量标准控制：通过验证确定常规制备方法是否能够满足外用溶液外观形状的要求；采用澄明度检测仪检测澄明度，并进行无菌检测；参照rhbFGF冻干制剂的检定规程，摸索外用溶液的活性测定方法。3.2.3.1.3. 外用溶液临床前研究：根据现行的药品注册管理办法，可免做药理毒理实验，需按要求整理相关资料。3.2.3.1.4. 临床试验：根据现行的药品注册管理办法，按治疗用生物制品13类新药进行总例数480例的期临床试验。3.2.3.2. 重点解决的技术关键问题3.2.3.2.1. 重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）新剂型开发中若保护剂选择不当，经常会出现主药活性丧失或无法检测或刺激性大等问题，所以蛋白活性保护、检测方法灵敏度与特异性问题尚需优化。上述问题已经解决。3.2.3.2.2. 重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）是不稳定蛋白，生产制备过程中若操作不当或保护剂选择不当，易出现聚合、N端降解、活性丧失等问题，从而导致产品质量不合格，所以制备过程中重点提高蛋白稳定性，并进行长期稳定性的考察。3.2.3.2.3. 临床试验研究中摸索最合理的使用剂量、时间、疗程，观察不良反应。4. 项目的技术特色和水平4.1. 成果来源及知识产权情况重组人碱性成纤维细胞生长因子是国家一类新药，由北京双鹭药业股份有限公司和暨南大学医药生物技术研发中心共同研制，并取得多项国家专利和国际专利。南海朗肽制药有限公司于2003年4月通过技术转让方式取得新药重组人碱性成纤维细胞生长因子技术。南海朗肽制药有限公司在取得重组人碱性成纤维细胞生长因子技术之后，于2003年建立中试车间，进行外用重组人碱性成纤维细胞生长因子冻干制剂的生产和销售。连续5年的生产和销售，证明产品的生产工艺稳定、质量可控，生产技术日日成熟；在小规模取得成功的基础上，于2009年建立新的生产基地，引进全自动的灌装设备，实现了自动化生产，大大提高了产能。同时，在实现外用重组人碱性成纤维细胞生长因子产业化的过程中，以外用重组人碱性成纤维细胞生长因子为核心，研究开发出一系列的新剂型，为本项目的后续发展奠定了坚实的基础。以外用重组人碱性成纤维细胞生长因子为核心研制的一系列新剂型，包括如重组人碱性成纤维细胞生长因子外用凝胶剂、外用溶液剂、滴眼液等均为南海朗肽制药有限公司拥有自主知识产权，并且全部申请发明专利。4.2. 国外技术现状和发展趋势1940年，Hoffman等在牛脑垂体提取物中发现一种能够促进成纤维细胞生长的物质，70年代部分纯化这些提取物，发现它是成纤维细胞的一种有丝分裂原(mitogen)，1975年定名为成纤维细胞生长因子（Fibroblast growth factor ，FGF），并初步确定了它的理化性质。1984年Bohlen等人高度纯化这种细胞因子。1985年Esch，1986年Gimenez-Gallego分别确定碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）的氨基酸顺序。两者不是同一基因产物，aFGF基因位于人的第5对染色体，bFGF基因位于第4对染色体，bFGF活性比aFGF大10-100倍。Abraham等人在1986年获得bFGF的cDNA克隆，从此bFGF的研究进入分子生物学阶段。bFGF是中胚层和神经外胚层的致裂原，它对多种软组织和神经系统的损伤具有快速修复作用，同时它又是一种神经营养因子。bFGF对血管的形成、分化具有重要的诱导作用，因此它又可开发为保健品添加剂。美国SCIOS公司已投入1.2亿美元开发bFGF药物，已批准bFGF注射剂进入II期临床研究；日本武田制药已经投入100亿日元，主要开发bFGF治疗糖尿病和心血管病及胃溃疡，目前日本武田公司bFGF外用制剂已经上市；德国、意大利等国也在投入巨资进行bFGF药物研究，目前处于临床前和临床研究阶段。4.3. 国内技术现状和发展趋势碱性成纤维细胞生长因子作为一种创面修复的较理想的药物，在国内已经被批准上市销售。经临床前研究及前期临床试验证实，碱性成纤维细胞生长因子是一种多元性因子，可影响上皮细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞、神经元细胞等多种细胞趋化和增殖作用，起到组织修复的调理作用。局部外用未发现明显毒副作用，对人体各器官系统功能无损害。目前国内自主研发的第一代外用重组牛碱性成纤维细胞生长因子冻干制剂已先后在珠海亿胜药业和长春长生基因药业产业化，产生较明显的经济效益。第二代外用重组人碱性成纤维细胞生长因子冻干制剂在南海朗肽制药公司和北京双鹭制药公司进行生产。第二代外用重组人碱性成纤维细胞生长因子与第一代外用重组牛碱性成纤维细胞生长因子冻干制剂相比具有以下优点：（1）重组蛋白是人源化的基因表达产物，与人体100%同源，应用于人体具有免疫原性和致敏性低。（2）采用大肠杆菌温控表达系统生产，与第一代采用IPTG诱导型表达载体相比，大大降低了生产成本，具有极强的市场竞争力。（3）在纯化工艺上肝素亲和层析和凝胶层析，每升发酵产物可得重组人碱性成纤维细胞生长因子约50mg，纯化收率70%左右，纯度98%，比活性可达1107，技术达到国际领先水平。4.4. 项目技术特点以及与现有技术或工艺比较具有的优势：4.4.1. 基因来源于东方人血红细胞，采用RT-PCR方法直接克隆人的bFGF基因。4.4.2. 鉴于遗传密码有兼并性和大肠杆菌对氨基酸密码子的偏爱与人体细胞的差异，本项目在不改变产物人bFGF的氨基酸组成与排列顺序的基础上，选用大肠杆菌偏爱密码子，提高了bFGF基因在大肠杆菌中的表达水平。4.4.3. 重组蛋白是人源化的基因表达产物，与人体100%同源，应用于人体具有免疫原性和致敏性低等优点。4.5. 本项目产品与传统的创面治疗药物相比较均由的优越性4.5.1. 作用原理不同常规用于治疗创伤、溃疡的药物多数是从消炎杀菌、抗伤口感染入手，利用人体自身的再生育和能力，来达到治疗效果；而重组人碱性成纤维细胞生长因子则是通过促进细胞的生长与增值，主动修复伤口，一般正常愈合需要710天，而是用重组人碱性成纤维细胞生长因子后则只需要57天，大大缩短了愈合时间，减少了激发感染机会，节省了治疗费用。4.5.2. 对瘢痕形成影响不同常规药物治疗创伤、溃疡由于是抗感染被动修复过程，因而容易留下瘢痕和色素沉着；而重组人碱性成纤维细胞生长因子质量创伤、溃疡由于是主动修复过程，愈合时间段，因而可有效减少瘢痕形成和色素沉着。4.5.3. 对功能恢复的影响不同常规治疗创伤、溃疡，多半仅限于伤口愈合，但对受损伤的皮肤附属功能器官，如神经末销、血管、汗腺等的功能恢复不是十分有效；二重组人碱性成纤维细胞生长因子是一种多功能细胞生长因子，对神经元、血管等有保护和修复效果，因而使用重组人碱性成纤维细胞生长因子治疗创伤、溃疡除了有伤口快速愈合之外，更重要的是对受损的皮肤附属供呢个器官，如神经末销、血管、汗腺等的功能恢复有显著疗效，这在目前治疗各种创伤、烧伤的药物中是唯一具有此功能的药物。5. 项目的技术经济指标5.1. 重组人碱性成纤维细胞生长因子产业化的主要技术经济指标和水平目的蛋白表达率将在2030%之间，产量可达每升培养物80100mg，目的蛋白收率可达50%，纯度98%，比活性1106IU/mg；冻干收率达95%以上，技术水平可达国内先进。新增项目达产后年平均销售收入2亿元，利润总额6000万元。5.2. 重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）系列制剂的研究开发的主要技术经济指标和水平5.2.1. 建立重组人碱性成纤维细胞生长因子外用凝胶和滴眼液的稳定生产工艺和质量标准。5.2.2. 完成重组人碱性成纤维细胞生长因子滴眼液临床前研究，获得临床试验批件。5.2.3. 获得重组人碱性成纤维细胞生长因子外用凝胶的生产批件。5.3. 重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）美容化妆品的主要技术经济指标5.3.1. 使重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）在美容化妆品中活性损失率小于20%，活性稳定性问24个月。5.3.2. 开发出1020个重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）美容化妆品。6. 项目发展进度6.1. 2009年10月至2010年10月，实现外用重组人碱性成纤维细胞生长因子产业化。6.2. 2009年7月至2011年7月，完成重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂的临床试验。6.3. 2011年8月至2012年12月，获得重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂的生产批件。6.4. 2009年10月至2011年12月，完成重组人碱性成纤维细胞生长因子滴眼液临床前研究。6.5. 2011年12月至2011年12月，获得重组人碱性成纤维细胞生长因子滴眼液临床批件。三、 项目技术路线1. 技术总路线从人血细胞提取mRNA 反转录PCRbFGF基因 分子克隆技术构建基因工程菌株 发酵生产 分离纯化rhbFGF原料 保护剂 rhbFGF外用凝胶、外用溶液、滴眼液 真空冻干rhbFGF冻干制剂成品2. 关键技术及创新点分析2.1. 重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）产业化重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）产业化需要解决的首要问题是原料来源，本项目通过优化发酵工艺和纯化工艺，使得目的蛋白重组人碱性成纤维细胞生长因子的表达量大大提高至100mg/L，已经达到国内外领先水平，保证了产业化及后续制剂开发的原料来源问题；其次，通过优化冻干工艺，使得重组人碱性成纤维细胞生长因子冻干制剂的水分在3%以下，既保证了重组人碱性成纤维细胞生长因子的活性稳定性，又保证了冻干粉的外观形状。解决上述两个问题之后，为重组人碱性成纤维细胞生长因子及其系列制剂的研究开发及产业化奠定了结实基础，建立解决蛋白类药物普遍存在的“瓶颈”技术平台。2.2. 重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）外用凝胶的关键技术和创新点分析目前国内外rhbFGF只有冻干制剂上市，rhbFGF凝胶剂完成后将为临床提供基于湿性愈合理论的新药，与冻干制剂比，临床使用频率由每日使用、每日两次该成隔日使用、每日一次，而且减少换药粘连、提高疗效。同时，在rhbFGF凝胶剂基础上，将rhbFGF包裹于脂质体中并制备成凝胶剂，充分利用了脂质体与细胞的亲合、缓释作用和水凝胶的屏障及易清洗性，显著地提高了药物稳定性、生物相容性和疗效。rhbFGF凝胶剂处方中的卡波姆和透明质酸的合理配比使其兼具缓释和保湿功能；凝胶剂加入可与bFGF特异结合的肝素，以增强bFGF与受体的结合能力，并增强对酸、碱、热等因素的抗性，加入肝素后，生物学活性提高至少2倍，提高了产品的质量标准；脂质体主要由天然磷脂和胆固醇组成，进入体内后可被生物降解，不会积累在体内，且免疫原性小。重组人bFGF包埋在脂质体内，从脂质体中缓慢释放，使药效持续较长时间。通过细胞内吞和融合作用，脂质体可直接将药物送入细胞内，避免使用高浓度游离药物；凝胶剂作为脂质体局部给药的载体，可在脂质体周围形成一道屏障控制脂质体中药物释放的速率，避免药物的突释效应，同时凝胶剂手感细腻，易清洗。2.3. 重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）外用溶液的关键技术和创新点分析由于冻干制剂的剂型特点，采用了冻干粉与溶媒分开的包装形式，使用时需将溶媒加至冻干粉中以溶解，并倒回溶媒瓶方能使用，操作过程麻烦，且由于操作过程中不能保证无菌环境，增加了被污染的可能，不适用于一些严格要求无菌的创面。外用溶液是在加入可与FGF特异结合的肝素，以增强FGF与受体的结合能力，并增强对酸、碱、热等因素的抗性，同时，加入生物活性保护剂海藻糖，从而实现FGF的液体保存状态，减少了复溶过程可能的污染，成本更低，使用更安全。 另外， 通过此项研究，筛选出一批既能保护蛋白质活性又便于使用的辅料组合，建立了若干混合成分中特异蛋白质活性的检测方法。2.4. 重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）滴眼液的关键技术和创新点分析眼表疾病是我国最主要和最常见的致盲眼病之一，该病病因复杂，治疗棘手，常因诊治延误导致愈合延迟或者不愈合，甚至致盲。重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）作用于眼表病变部位，可激活调控与修复有关细胞的增殖、移行，促进细胞代谢、改善营养，主动促进修复，加速愈合。蛋白质类滴眼液的研制，关键是解决这类药物的稳定性问题，在一定溶液条件下，rhbFGF分子中Met、Cys、His、Trp及Tyr的某些基团与各种活泼氧具有很高的反应性易受到氧化，从而导致蛋白质的活性下降，容易发生水不溶性聚集而沉淀。本项目研究人员经过大量试验，筛选出rhbFGF保护剂配方，该配方可以保证rhbFGF在水溶液状态下稳定保存18个月以上。另外，本项目在国内率先建立动物角膜上皮激光损伤模型并建立定量评价角膜上皮恢复指标：角膜上皮损伤修复，难于进行定量评价，因此很难科学评价一个药物对角膜上皮细胞的修复程度。通常的定量评价指标仅限于用荧光素钠染色，检测角膜损伤斑面积的大小。鉴于角膜损伤修复后透光率的大小间接反应角膜的修复情况，损伤修复后角膜上皮细胞数量反应角膜细胞的再生水平，本项目药效学评价中建立了三个科学可行的定量评价指标：角膜透光率OD值，MTT方法检测角膜上皮细胞数量，角膜损伤斑面积。四、 现有研发及生产条件