PCR质量基础手册前言.doc

文件编号

前 言

某某省某某医院临床基因扩增检验试验室建于12月。试验室设置、设备及人员配置均严格根据部、省临床基因诊疗试验室规范化标准结合
本身条件而建立。各项管理制度、质量确保体系和基础操作要求和标准操作程序均已制订。
某某省某某医院临床基因扩增检验试验室将面向全省卫生系统，开展临床基因诊疗试验和相关知识培训工作，使被培训人员掌握临床基因诊疗基础理论知识、试验室管理和质量确保方法、规范化操作方法和了解基因诊疗领域进展。同时还将开展基因（关键是遗传基因方面）临床检测及科学研究工作，为本省临床基因诊疗事业发展做出一份贡献。

质 量 方 针
临床基因扩增检验试验室是严格根据部、省临床基因扩增试验室规范化标准
进行管理和操作，一直遵照：

以病人为中心
以质量为关键
以科学为依据

编制： 日期： 审批： 日期：

文件编号 版 本 第二版

岗 位 职 责
1．试验室责任人岗位职责
（1） 确定质量方针，编制质量手册，并组织人员学习，统一思想。
（2） 负责试验室全方面质量，包含试剂盒质量检验；操作质量检验；质量控制（室内室间质评）结果检验；试验结果查对、质检和签发汇报；确定人员培训计划；安排日常工作，确保立即发出质量合格汇报。
（3） 定时审核和评审质量手册运行情况。
（4） 对试验室对内外发出汇报负责，并以署名签字形式表示。
2．技术人员岗位职责
（1） 按时消毒、清洁试验室，并统计签字。
（2） 检验仪器设备维护情况，统计使用情况并签字。
（3） 按质量手册要求标准操作程序（SOP）操作试验，并填写汇报签字。
（4） 按要求进行试验自主质控工作（每次试验必需有室内质控方法），并做好统计签字。

编制： 日期： 审批： 日期：
文件编号 版 本 第二版

人 员 培 训 及 成 果

1． 人员组成及技术档案
本室有工作人员2人，其中1名中级，1名初级。
2． 培训统计及专业文章发表情况

编制： 日期： 审批： 日期：
文件编号 版 本 第二版

试验室设施环境及规章制度
1、试验室分区管理平面图：见图示1。
2、试验室基础设施：
分隔和面积：试验室严格根据标准，分隔为三个独立工作室：试剂准备室、样品处理室、基因扩增室。
工作步骤：从试剂准备→样品处理→基因扩增，工作人员只能单向流动。进入下一区域，必需更换工作服、手套。
通风：各室空气流通性良好。
照明：室内有良好照明度。
环境：洁净、无菌；各室均配有紫外消毒设备。
各室仪器、试验和文具用具和清洁物品均属于各室专用。
3、试验室消毒隔离及污物处理：
见试验室废弃物处理标准操作程序。
4、试验室规章制度：
4.1 总则
4.1.1 进入基因诊疗试验室任何工作人员全部必需遵守试验室规则；非工作人员未经许可不得入内，尤其不得为找人而逆向误入PCR试验室，以免造成不应有污染。
4.1.2 临床基因诊疗试验室分试剂准备、样品处理、基因扩增室三个室，各室拥有专用仪器设备及试验物品（含加样器、试管架、吸头、统计纸、笔、甚至清洁用具等），不得混用，须贴上不一样颜色标签给予区分；试剂准备室为白色标识、样品制备室为蓝色标识、扩增室为绿色标识。
4.1.3 临床基因诊疗试验室工作人员应含有医学检验、微生物学检验基础知识、大中专以上学历、并受过PCR试验基础知识和技能培训。
4.2.1 进入试验室工作人员必需遵守试验室唯一流向要求，严禁反向流动。
4.2.2 进入试验室，必需更换本室有颜色标识工作服（含帽和鞋）。勤换洗工作服。
4.2.3 接收样品时应检验样品是否符合要求、贴上标签并做好登记。
4.2.4 试验室技术人员必需严格根据PCR试验标准操作程序进行，包含试验室擦洗、台面消毒，离心管、吸头无菌灭活准备，仪器使用和废弃物处理等。
4.2.5 进入PCR试验室后区物品不许带进PCR试验室前区。
4.2.6 任何试验操作包含仪器使用等情况均须做好统计。
4.2.7 检测结果汇报应完整（包含：检验项目、靶核酸类型及结果等），并经专业责任人审核签字后方可发出。
4.2.8 天天试验开始前，结束后均应按要求清洁、消毒地面和试验台面。
4.2.9 保持临床基因诊疗试验室内空气唯一流向和空气流通。
4.2.10定时校准和维修PCR仪、离心机、水浴箱、冰箱等仪器、设备。
4.2.11试验室内不得从事和试验无关事宜如聊天、饮食、吸烟等；室内禁用电风扇。
4.2.12天天下班前处理好废弃物品，关好水、电和门窗。
4.3试剂准备室
4.3.1试验人员进入该室须穿本室专用白色工作服。试验中须戴手套。
4.3.2天天试验开始前，清洁试验台并应打开紫外线灯消毒30分钟。
4.3.3取出当日试验需配制和使用试剂，其它试剂要立即收好，放回冰箱内。
4.3.4试验中使用离心管、吸头等应经过灭活无菌处理，（应在消毒使用期内）。
4.3.5其它室用具不得带入本室。
4.3.6每次试验全部有统计；且使用本室专用、带有本室标识统计本、纸笔。
4.3.7试验完成后要整理、清洁工作台面。
4.4样品准备室
4.4.1试验人员进入该室须穿本室专用兰色工作服。试验中须戴手套，手套需常更换。
4.4.2天天试验开始前，清洁试验室和试验台，并应打开紫外灯消毒30分钟。
4.4.3样品接收，登记，保留和提取按标准操作程序及试剂盒要求进行。
4.4.4使用本室专用，经灭菌处理加样器和带滤心吸头。
4.4.5做好试验统计，并使用本室专用统计本和笔。
4.4.6 PCR扩增后区物品不得带入本室。
4.4.7试验完成清洁试验室和试验台，并打开紫外灯消毒。
4.5基因扩增室
4.5.1试验人员进入该室须穿本室专用绿色工作服．试验中须戴手套，手套需常更换。

4.5.2 天天试验开始前，清洁试验室和试验台，并应打开紫外灯消毒30分钟。
4.5.3 使用本室专用，经灭菌处理加样器和带滤心吸头。
4.5.4需在此进行操作，如巢式扩增，第一次扩增模板必需在本室内从反应管中取出，并加入另一只反应管中，此操作不可返回扩增前区进行。
4.5.5 非全封闭操作（即须开启反应管），应打开排风扇二十四小时排气，保持室内负压状态。
4.5.6 做好试验统计，且使用本室专用统计本和笔。
4.5.7 PCR扩增室物品不得带入扩增前区。
4.5.8 试验完成清洁试验室和试验台，并打开紫外灯消毒。

编制： 日期： 审批： 日期：
文件编号 版 本 第二版

仪 器 设 备 和 标 准 物 质
1． 仪器设备配置
1.1试剂准备室内配置设备：
紫外灯、一般高速台式离心机、旋涡振荡器、一套连续可调式移液枪和无菌过滤咀型移液器枪头、冰箱、多种规格无菌备用离心管、PCR反应管和玻璃器皿、试验台及本室专用文具、纸张；
本室专用白色隔离服、一次性手套、污物桶及清洁用具。
1.2样品制备室内配置设备：
紫外灯、台式高速冷冻离心机、旋涡振荡器、恒温水浴锅、二套连续可调式移液枪、无菌过滤咀型移液器枪头、冰箱、多种规格无菌备用离心管和玻璃器皿、试验台及本室专用样品登记本、文具、纸张；
本室专用蓝色隔离服、一次性手套、污物桶及清洁用具。
1.3 基因扩增室内配置设备：
紫外灯、PCR扩增仪、试验台及本室专用文具、纸张；
本室专用绿色隔离服、一次性手套、污物桶及清洁用具。
2． 仪器设备使用、维护及校准
见仪器使用、维护及校准标准操作程序。
3． 仪器设备统计和标识
全部相关基因诊疗试验室仪器使用、维护及校准操作均统计立案。校准后仪器贴上标识，说明校准日期和状态。
4． 标准物质
阳性、阴性对照：起源于对应检测试剂盒。
室内质控物、室间质评物：起源于卫生部和省临检中心。

编制： 日期： 审批： 日期：
文件编号 版 本 第二版

校 准

1． 移液器、扩增仪、离心机等对检测结果有效性、正确性有影响检验设备，投入使用前必需进行校准，并每十二个月校准1次。
2． 参与卫生部组织室间质评。

编制： 日期： 审批： 日期：
文件编号 版 本 第二版

检 验 方 法
1． 检验项目及方法
项目：乙型肝炎病毒DNA定量检测、丙型肝炎病毒RNA定量检测
方法：TaqMan荧光定量PCR法乙型肝炎病毒DNA定量检测
TaqMan荧光定量PCR法丙型肝炎病毒RNA定量检测
2． 操作手册
仪器使用、维护及校准标准操作程序
样品采集、保留及运输标准操作程序
试验过程标准操作程序（包含：试剂准备、样品制备、基因扩增和产物检测SOP）
各检测项目标准操作程序
试验室消毒及污物处理标准操作程序
3． 质量确保方法
室内质控
3．1核酸提取质控 在核酸提取中，带一份弱阳性质控样本和一份阴性质控样本（基质和待测样本相同），分别判定核酸提取有效性和核酸提取过程中是否发生污染。
3．2核酸扩增质控 靶核酸为DNA：带一份弱阳性靶DNA质控和一份阴性质控，以判定DNA扩增有效性；
靶核酸为RNA：一份弱阳性cDNA质控、一份弱阳性RNA质控和一份阴性对照以判定转录和DNA扩增有效性
3．3产物检测质控 一份靶DNA或已稀释扩增靶DNA阳性质控、一份阴性质控和一份试剂空白质控和待测扩增样本同时检测，以判定产物检测中核酸杂交及显色测定有效性。
室间质控
参与由卫生部临床检验中心组织全国临床基因扩增项目标室间质量评价。

编制： 日期： 审批： 日期：
文件编号 版 本 第二版

样 品 处 置
1．样本标识：标识由三部分组成--标本采集日期、该检测批次标本序号和标本类型，三部分间无间隔符号，比如：02 08 01 01 B分别表示年、 月、 日、 序号和血液标本，序号（01-99），整个标识为8-11位；
2．样本采集、保留和运输：见样品采集、保留及运输标准操作程序。
3．样本接收、统计：样品接收后，立即贴上本室设计样品标识，并在接收标本统计表上按要求进行登记。
无签、迟送样品、样品量不足、溶血样品及其它未按要求采集样品，拒绝接收并统计于拒收标本记录表。
4．样本处理：见样品制备标准操作程序

编制： 日期： 审批： 日期：
文件编号 版 本 第二版

报 告 包含以下信息：

试验室名称
检测项目（如丙型肝炎病毒RNA定量检测）
样本接收和检验日期
病人信息（姓名、性别、年纪、门诊或住院病区及床号）
检验方法（如TaqMan荧光定量PCR检测法）
结果 定性 ××检测项目检测阴性或阳性
定量 ××检测项目检测阳性、检测量为
检测人署名
专业责任人署名及签发日期

编制： 日期： 审批： 日期：
文件编号 版 本 第二版

分包

供给及服务
采取部和省临检中心经过室间质评公布推荐使用仪器、试剂和检验方法。

申诉
1．埋怨统计：见埋怨统计和处理反馈意见登记本。
2．立案：将最终处理结果存档立案。

编制： 日期： 审批： 日期：