液相色谱仪验证专项方案.doc

Agilent1260液相色谱仪

验

证

方

案

方案编号：STP-VP-013-00

方 案 制 定

方案起草
签 名
日 期
质检部

方 案 审 核

方案审核
签 名
日 期
生产部

质管部

工程部

物流部

研发部

方 案 批 准

方案批准
签 名
日 期

验证小组人员名单

组长
姓名
职务/职称
部门

成员
姓名
职务/职称
部门

目 录
1 液相色谱仪概述
2 验证目
3 验证范畴
4 验证参照文献
5 筹划及进度
6 设计确认
7 安装确认
8 运营确认
9 性能确认
10 验证周期

1 液相色谱仪概述
液相色谱仪是常茂生物化学工程股份有限公司用于检测成品，原料，中间品检测设备。设备由输液泵，自动进样器，柱温箱，紫外检测器，色谱工作站构成。由高压输液泵将规定流动相泵入色谱柱，自动进样器注入供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由色谱工作站软件记录和解决色谱信号。

2 验证目
确认Agilent1260液相色谱仪能符合GMP原则及设计规定，所制定原则及文献符合GMP规定，保证液相色谱检查法精确性。

3 验证范畴
本验证方案合用于常茂生物化学工程股份有限公司Agilent1260液相色谱仪，该设备安装于质量部质量控制室仪器室内。
验证内容涉及对Agilent1260液相色谱仪进行设计确认、安装确认、运营确认、性能确认。

4 验证参照文献
本方案以国家药物监督管理局颁布《药物生产质量管理规范》、由国家食品药物监督管理局组织编写《药物生产验证指南》、中华人民共和国药典为根据，制定了高效液相色谱仪验证方案。

5 筹划及进度
整个验证活动分四个阶段完毕：
设计确认：从_____年_ _月_ _日 至_____年___月___日；
安装确认：从_____年___月__ 日 至_____年__ 月__ 日；
运营确认：从_____年___月__ 日 至_____年__ 月__ 日；
性能确认：从_____年___月_ _日 至_____年__ 月__ 日。

6 设计确认
6.1 供应商资格和服务
6.1.1 设备供应商应有良好生产运营状况，没有与国家法规或地办法规相违背生产状况。
6.1.2 安装时能提供现场指引或培训技术人员数量、资格，并且将来在寻常使用中能提供维修。
6.2 设备
6.2.1 设备状况
6.2.1.1 设备部件完好，无破损；
6.2.1.2 内外表面光滑、平整、容易清洁；
6.2.1.3 易拆卸、易维护。
6.2.2 设备特性：液相色谱仪由输液泵，自动进样器，柱温箱，紫外检测器，色谱工作站构成。
6.3 可接受原则，如表1。
表1 可接受原则
测试项目
承认质量原则
紫外检测器
基线漂移：＜0.005AU/60min
基线噪音：＜0.0001AU
波长精确度：≤±2nm
输液泵
流量设定值（ml/min）
0.5
1.0
2.0
泵流量设定值误差（%）
±2%
±2%
±2%
流速稳定性误差（%）
2%
2%
2%
梯度精确度（%）
≤±1％
自动进样器
先后进样带入量
≤0.1%
柱温箱
柱温箱设定值误差（℃）
≤±2℃
柱温箱稳定性（℃）
≤1℃
重现性测试
定性测量重现性（RSD）
≤1.0%
定量测量重现性（RSD）
≤1.0%
线性测试
R2＞0.999

7 安装确认
7.1 概述
Agilent1260液相色谱仪由安捷伦仪器有限公司提供，安装于质量部质量控制室仪器室，用于成品，原料，中间样品含量和关于物质检测。
安装确认目：证明所供应设备规格符合规定,设备所应备有技术资料齐全。开箱验收应合格，并确认安装条件（或场合）及整个安装过程符合设计规定。
7.2 安装确认内容
7.2.1 基本资料检查：检查与否有各种必须书面资料，如表2。
表2 资料检查
确认项目
有
无
存储地点
备注
采购定单

使用阐明书

设备合格证书

装箱单

保修卡

安装平面图及安装图

使用维护保养原则操作规程

7.2.2 设备所需外部环境确认
目：确认设备安装与否符合原设计条件，如表3。
表3 外部环境确认
确认项目
合格规定
验证成果
备注
温度
5-40℃

相对湿度
≤85%

地面
平滑、不易起尘

环境
无腐蚀性气体

7.2.3 设备型号确认
目：确认设备各部件型号，保证其与订单和装箱单所描述一致，如表4。
表4 设备型号确认
部件
设备型号
序列号
验证成果
输液泵

自动进样器

柱温箱

紫外检测器

7.2.4 公用设施确认
目：确认公用设施，使其满足设计规定，如表5。
表5 公用设施确认
项目
设计规定
验证成果
备注
电压
220V

电源适配
三孔插座

7.2.5 软件版本确认
目：确认安装软件与系统备份和维护软件版本是相似，安装软件符合系统和应用规定。
操作系统
当前操作系统与系统备份和维护操作系统版本相似。
源版本：__________________________________________
备份版本：________________________________________

软件版本
当前应用软件与系统备份和维护软件版本相似 。
源版本：__________________________________________
备份版本：________________________________________

7.2.6 硬件环境与安装确认
目：依照生产商硬件和系统设计规格原则，确认仪器和控制器工作区域符合规定， 如表6。
表6 硬件环境与安装确认
序号
描 述
验证成果
1
仪器放在水平工作台上，计算机在仪器旁边。

2
检测器，输液泵，自动进样器，柱温箱，计算机、打印机和电源之间对的连接。

3
温度在5-35℃，湿度在45-85%之间。

4
室内无强电磁干扰源及有害有毒气体。

5
排风口和进风口对仪器和计算机无污染。

6
打开检测器，有信号浮现。

7.2.7 软件配备确认
目：确认安装应用软件符共计算机系统和外围设备规定，如表7。
表7 软件配备确认
序号
描 述
验证成果
1
打开电源开关，启动WINDOWS XP。

2
打开液相色谱仪各部件电源开关，在桌面上双击Instrument 1 Online图标。

3
确认Agilent ChemStation软件,仪器跟软件连接。

4
进入Agilent ChemStation主画面。

7.2.8 部件清单
目：确认仪器寻常维护和操作所需要消耗品和备用品，如表8。
表8 部件清单
部件名称
数量
存储地点
备注

7.2.9 维修服务确认
目：确认仪器浮现故障后能及时解决，不影响操作。
每本操作手册上均有简朴维护办法，通过仪器培训操作人员可以依照阐明书进行简朴维修和零部件更换。
如果有其他比较大问题，顾客不能解决，可以电话告知厂家维修工程师。
维修电话：
7.3 安装确认成果阐明
阐明此确认过程中与否依草案筹划进行。如有偏差或变更应依照“偏差管理规程”对此予以阐明并对与否通过或需补充内容加以阐明。
8 运营确认
8.1 目：证明液相色谱仪软硬件功能运营正常，并且达到设计规定及检测规定。
8.2 运营确认内容
8.2.1 噪音和漂移确认
8.2.1.1 办法：检查条件：选用C18柱，以100%甲醇为流动相，流速为1.0ml/min，紫外检测器波长选在254nm。开机预热，待仪器稳定后记录基线60min,测得1min内基线波动幅度作为基线噪音，用检测器自身物理量（Au）作单位表达，基线漂移用60min内基线偏离原点值（Au/60min）作单位表达。检查办法：监视界面，依照PC计算机、记录仪60分钟图谱计算成果。
8.2.1.2 可接受原则
基线漂移：＜0.005AU/60min
基线噪音：＜0.0001AU
8.2.1.3 测试记录
项 目
承认质量原则
附件号
实测成果
基线漂移
<0.005AU/60min

基线噪声
<0.0001 AU

8.2.2 波长精确性确认
8.2.2.1 办法：波长精确度用波长示值误差表达。波长示值误差是设定检测器波长与实际波长之间差值。启动检测器，预热。配备一份100ug/mL咖啡因溶液，当咖啡因溶液从柱子洗脱并流入紫外可见检测器时，停止流速，用190nm到400nm波长对咖啡因溶液进行波长扫描，并输出各波长所相应吸光度，以波长为X轴，吸光度为Y轴建立一条二次曲线，二次曲线拐点相应X轴即为波长测得值。所测得波长与咖啡因特定吸取波长（205nm,245nm,273nm）差值即为波长示值误差。
8.2.2.2 可接受原则
波长精确度：≤±2nm
8.2.2.3 测试记录
波长(nm)

吸光度(mAU)

二次曲线方程 (Y=ax2+bx+c)

波长真实值 (nm)
205
波长测得值 (nm)

示值误差 (nm)

附件号

波长(nm)

吸光度(mAU)

二次曲线方程 (Y=ax2+bx+c)

波长真实值 (nm)
245
波长测得值 (nm)

示值误差 (nm)

附件号

波长(nm)

吸光度(mAU)

二次曲线方程 (Y=ax2+bx+c)

波长真实值 (nm)
273
波长测得值 (nm)

示值误差 (nm)

附件号

8.2.3 流速确认
8.2.3.1 办法：以水为流动相，将流速分别设定在0.5ml/min、1.0ml/min、2.0ml/min、待流速稳定后，用一校正过10ml容量瓶接受流动相并开始计时，当流动相接受至容量瓶刻度时停止计时并计算流速。每种流速做三次，按如下公式计算流速设定值误差，流速稳定性误差。

8.2.3.2 可接受原则
设定值误差：±2% 稳定性误差：2%
8.2.3.3 测试记录
设定流速ml/min
第1次收集时间
（min）
第2次收集时间
（min）
第3次收集时间
（min）
0.5

1.0

2.0

设定流速
ml/min
第1次ml/min
第2次ml/min
第3次ml/min
平均流速ml/min
设定值误差
%
稳定性误差％
0.5

1.0

2.0

8.2.4 梯度比例确认
8.2.4.1 办法:使用一根阻尼管(×0.12mm)代替柱子，检测器波长调至265nm，流速1.0ml/min，流动相A:水，流动相B:0.5%丙酮，运营如下梯度程序。
Time
(min)
%流动相A
(water)
%流动相B
(0.5%丙酮)
0.0
100
0
0.1
90
10
10.0
90
10
10.1
50
50
20.0
50
50
20.1
10
90
30.0
10
90
30.1
0
100
40.0
0
100
40.1
100
0
50.0
100
0
打开泵，待流速稳定后，让泵开始执行梯度程序。程序完毕后，按下式计算：
， ：单元B梯度；：每步梯度响应值
D=Vx-G， D：梯度精确性偏差；G：设立流动相B比例
8.2.4.2 可接受原则 不超过±1％
8.2.4.3 测试记录
Hx
H100
Vx
G
D

10%

50%

90%

附件号：
8.2.5 先后进样带入量确认
8.2.5.1 办法：选用4.6mm×250mmC18或C8柱，流动相：甲醇：水=75：25，检测器254nm，流速1.0ml/min,进样量5ul，使用下列商业原则品进样。
原则溶液(a):咖啡因溶液100ug/ml
原则溶液(b):咖啡因溶液1ug/ml
空白溶液:水
备注：原则溶液分析证书必要作为附件以证明原则溶液是合用。
进如下序列样：
——咖啡因溶液100ug/ml，1针
——水，1针
——咖啡因溶液1ug/ml，1针
记录色谱并对咖啡因峰进行积分。
8.2.5.2 可接受原则
空白溶液中相应峰面积比例不超过原则溶液(a)中咖啡因峰面积0.1%；原则溶液(b)中咖啡因峰面积是原则溶液(a)中咖啡因峰面积0.9%-1.1%。
8.2.5.3 测试记录

咖啡因峰面积(mAu*S)
附件号
原则溶液(a)

空白溶液

原则溶液(b)

8.2.6 柱温确认
8.2.6.1 办法：设定柱温箱温度分别为30℃，40℃，将已校正过温度巡检仪探头放在柱温箱内，待仪器稳定2小时后，每隔0.5h观测温度巡检仪读数，持续观测三次。温度探头在柱温箱内分布见图1。

图1 温度探头在柱温箱内分布
8.2.6.2 可接受原则
柱温箱设定值误差（℃）：不超过±2℃
柱温箱稳定性（℃）：不超过1℃
8.2.6.3 测试记录
仪器名称
检定部门
检定周期
检定期间

设定温度（℃）
30
40
测定次数
1

2

3

柱温箱温度平均值（℃）

柱温箱温度稳定性（℃）

柱温箱设定值误差（℃）

8.3 运营确认成果阐明
阐明此确认过程中与否依草案筹划进行。如有偏差或变更应依照“偏差管理规程”对此予以阐明并对与否通过或需补充内容加以阐明。

9 性能确认
9.1 目：仪器运营确认完毕后来，在其功能实验符合规定状况下，应用原则品或对照品、或检测样品进行性能确认，以确认仪器符合使用规定。
9.2 性能确认内容
9.2.1 重现性
9.2.1.1 办法：选用一根C8或C18柱，4.6mm×250mm,5µm。流动相:甲醇:水=75:25；流速:1.0ml/min；进样量:5ul；检测波长:254nm。启动检测器电源,将工作波长设立为254nm，预热，启动泵电源开关,流量设立为1.0ml/min(75%甲醇做流动相)，等待色谱柱充分平衡且检测器基线稳定,噪声和基线应符合规定规定,进咖啡因原则品溶液100ug/ml 10ul，进样六次。
9.2.1.2 可接受原则
定性测量重现性（RSD）：≤1.0%
定量测量重现性（RSD）：≤1.0%
9.2.1.3 测试记录
原则品名称(浓度)/批号：___________________________ 原则品COA附件号：_______
保存时间：
RT1
RT2
RT3
RT4
RT5
RT6

相对原则偏差

峰面积：
A1
A2
A3
A4
A5
A6

相对原则偏差

9.2.2 线性
9.2.2.1 办法：选用一根C8或C18柱，4.6mm×250mm,5µm。流动相:甲醇:水=75:25； 流速:1.0ml/min；进样量:5ul；检测波长:254nm。启动检测器电源,将工作波长设立为254nm，预热，启动泵电源开关，流量设立为1.0ml/min(75%甲醇做流动相),等待色谱柱充分平衡且检测器基线稳定,噪声和基线应符合规定规定,进咖啡因原则品溶液200ug/ml，100ug/ml，25ug/ml，5ug/ml，1ug/ml 10ul,每个样进样1次。
9.2.2.2 可接受原则
有关系数R2＞0.999
9.2.2.3 测试记录
原则品名称(浓度)/批号：___________________________ 原则品COA附件号：_______
浓度 (ug/ml)
峰面积(mAu*S)
附件号
1

5

25

100

200

原则曲线:

有关系数R2:

附件号:

9.3 阐明此确认过程中与否依草案筹划进行。如有偏差或变更应依照“偏差管理规程”对此予以阐明并对与否通过或需补充内容加以阐明。

10 验证周期
10.1 目：旨在证明该设备验证状态没有发生漂移。
10.2 依照药监部门或法规规定进行强制性再验证。
10.3 药物生产过程中，由于各种主、客观因素，需要对该设备作某种变更。在这种状况下，变更也许对产品质量导致重要影响，因而，需要进行再验证。
10.4 正常生产阶段，规定每年进行一次定期再验证。//