电针对KOA大鼠关节软骨及软骨下骨降解相关蛋白表达的影响.pdf

中 医 康 复2024 年 第 1 卷 第 5 期基 础 实 验 研 究黄夏荣,胡莉芝,王金玲,等.电针对KOA大鼠关节软骨及软骨下骨降解相关蛋白表达的影响J.中医康复,2024,1(5):10-15.电针对电针对KOAKOA大鼠关节软骨及软骨下骨降解相关蛋白表达的影响大鼠关节软骨及软骨下骨降解相关蛋白表达的影响*黄夏荣1，胡莉芝1，王金玲1，封蔚彬1，孙光华1，黄福锦1，廖源2，刘静1，罗敷1，钟培瑞1，彭婷1，曾亚华1，周君3（1.南华大学附属第一医院，湖南 衡阳 421001；2.广州医科大学附属清远医院（清远市人民医院），广东 清远 511500；3.康复医学四川省重点实验室，四川 成都 610041）中图分类号：R245.97文献标识码：B文章编号：2097-3128(2024)05-0010-06DOI：10.19787/j.issn.2097-3128.2024.05.003Effects of Electroacupuncture on the Expression of Proteins Related to Degradation ofEffects of Electroacupuncture on the Expression of Proteins Related to Degradation ofArticular Cartilage and Subchondral Bone in KOA RatsArticular Cartilage and Subchondral Bone in KOA RatsHUANG Xia-rong1，HU Li-zhi1，WANG jing-ling1,FENG Wei-bin1,SUN Guang-hua1,HUANG Fu-jing1,LIAO Yuan2,LIU Jing1,LUO Fu1,ZHONG Pei-rui1,PENG Ting1,ZENG Ya-hua1,ZHOU Jun3(1.The First Affiliated Hospital of University of South China,Hengyang,Hunan 421001;2.Affiliated Qingyuan Hospital,Guangzhou Medical University,Qingyuan Peoples Hospital,Qingyuan,Guangdong 511500;3.Sichuan Provincial Key Laboratory of Rehabilitation Medicine,Chengdu,Sichuan 610041)AbstractAbstractObjectiveObjective:To explore the effects of electroacupuncture on the expression of proteins related to articular cartilage and subchondral bonedegradation in KOA rats.MethodsMethods:Sixteen 24-month-old SD male rats were randomly divided into old age group(n=8)and electroacupuncturegroup(n=8),and 6-month-old SD male rats(n=8)were used as young group.The electroacupuncture group received electroacupuncture treatment,acupoints:bilateral Taixi,Zusanli,Yanglingquan,Xuehai.Electroacupuncture parameters:use dense wave,dense wave 15Hz,sparse wave3Hz,current 1mA,once a day,30min each time,5 days a week,continuous intervention for 8 weeks,and the other two groups were not treated.After8 weeks of intervention,the content of serum type collagen C-terminal peptide(CTX-)was detected by ELISA method,the subchondral bonemicrostructure of the left tibia was detected by micro-CT,the cartilage morphology of the left tibial plateau was observed by fuchsin-fast green staining,and the degree of articular cartilage degeneration was evaluated by modified Mankins score.The expression levels of aggrecanase-2,SIRT1mRNA and protein were detected by RT-qPCR and Westernblot.ResultsResults:(1)Compared with the young group of rats,the CTX-content in theold group increased(P0.05);Safranin-Fast Green staining showed that the cartilage in the old group showed serious structural damage,cracks appeared,and the cartilage and subchondral bone were not decomposed.Clear,abnormal morphological structure,uneven staining;modified Mankinsscore increased(P0.05);bone density,bone volume fraction,and number of trabeculae decreased(P0.05),and the distance between trabeculae increased(P0.05);the expression of aggrecanase-2 mRNA and protein increased(P0.05),and the expression of SIRT1 mRNA and protein decreased(P0.05);(2)Compared with the rats in the elderly group,the CTX-II content of the rats in the electroacupuncture group was reduced(P0.05);safranin-fast green staining showed that the cartilage was slightly flat,with no obvious cracks,and the staining was more uniform;ModifiedMankins score decreased(P0.05);bone density increased(P0.05),trabecular distance decreased(P0.05),aggrecanase-2 mRNA and protein expression decreased(P0.05),SIRT1mRNA and protein expression increased(P0.05).ConclusionConclusion:Electroacupuncture can protect articular cartilage by promoting the expression of SIRT1,inhibiting the degradation ofarticular cartilage and improving the microstructure of subchondral bone.KeywordsKeywordsknee osteoarthritis(KOA);electroacupuncture;cartilage;subchondral bone;SIRT1 摘摘要要 目的目的：探讨电针对KOA大鼠关节软骨及软骨下骨降解相关蛋白表达的影响。方法方法：16只24月龄SD雄性大鼠随机分为老年组和电针组各8只，另8只6月龄SD雄性大鼠为青年组。电针组接受电针治疗（穴位：双侧“太溪”“足三里”“阳陵泉”“血海”；电针参数：疏密波，密波15Hz，疏波3Hz，电流1mA，每天1次，每次30min，每周5天，连续干预8周），其余两组不做处理。干预8周后取材，ELISA法检测血清型胶原C端肽（CTX-）含量；显微CT检测左侧胫骨软骨下骨微结构；番红-固绿染色在光镜下观察左胫骨平台软骨组织形态结构，改良Mankins评分评估关节软骨退变程度；RT-qPCR、Western blot检测aggrecanase-2、SIRT1 mRNA及蛋白表达水平。结果结果：与青年组大鼠相比，老年组CTX-含量增高（P0.05）；番红-固绿染色显示老年组软骨表面结构破坏严重，出现裂层，软骨与软骨下骨分界不清，形态结构异常，染色不均；改良Mankins评分增加（P0.05）；骨密度、骨体积分数、骨小梁数量减少（P0.05），骨小梁间距增大（P0.05）；aggrecanase-2 mRNA及蛋白表达升高（P0.05），SIRT1 mRNA及蛋白表达降低（P0.05）。与老年组大鼠相比，电针组大鼠的CTX-含量降低（P0.05）；番红-固绿染色显示软骨表面平整，未见明显裂层，染色较均匀；改良Mankins评分降低（P0.05）；骨密度增加（P0.05），骨小梁间距减少（P0.05），aggrecanase-2 mRNA及蛋白表达降低（P0.05），SIRT1 mRNA及蛋白表达升高（P0.05）。结论结论：电针可通过促进SIRT1的表达，抑制关节软骨降解，改善软骨下骨骨微结构，从而保护关节软骨。关键词关键词 膝骨关节炎（KOA）；电针；软骨；软骨下骨；SIRT1*基金项目：国家自然科学基金项目（81973917、82105022）；湖南省自然科学基金（2021JJ40493、2021JJ30616、2023JJ40586）；湖南省卫生健康委项目（20200464）；南华大学校级重点项目（USCKF201902K02）作者简介：黄夏荣（1989-），男，硕士，主管技师，研究方向：骨关节炎和骨质疏松的临床与基础研究。通讯作者：周君（1980-），男，博士/博士后，主任医师，研究方向：退行性骨关节疾病的基础与临床研究。10中 医 康 复2024 年 第 1 卷 第 5 期基 础 实 验 研 究膝骨关节炎（Knee osteoarthritis,KOA）是临床常见疾病，以软骨退变、软骨下骨硬化、细胞外基质代谢失衡为主要病理表现1，临床表现为膝关节肿胀、疼痛、关节活动受限2。据报道，在我国40岁以上骨关节炎的患病率已达38.46%3，且随着人口老龄化，患病率有上升的趋势。KOA的治疗有多种方法，西医以药物和手术治疗为主。非甾体类药物虽能起到止痛作用，但长期服用会有一定的副作用，手术治疗费用较昂贵4。针灸作为我国的传统医学，治疗KOA疗效显著，中国骨关节炎诊疗指南也推荐用针灸来治疗骨关节炎5。沉默信息调节因子同源蛋白1（Silent information regulator 2 homolog protein 1,SIRT1）又称长寿基因，与衰老相关，在骨关节疾病中发挥重要的作用6-8。在软骨损伤中，SIRT1可以通过调节线粒体功能、细胞周期等促进软骨修复9，但具体机制还不明确。本研究通过电针干预KOA大鼠，探究电针对老龄大鼠膝骨关节炎及SIRT1的影响。1 1材料与方法材料与方法1.1 实验动物 16只24月龄SD雄性大鼠随机分为老年组和电针组，体质量为70993g，每组8只；另取8只6月龄SD雄性大鼠为青年组，体质量为50123g。大鼠由长沙天勤生物技术公司提供，合格证号CXK（湘）2019-0015，饲养于南华大学动物实验中心，室温、湿度、光照适宜，大鼠自由进食。实验方案经南华大学附属第一医院医学伦理委员会批准，批准号NO.202005110032。实验过程中，遵循实验动物管理条例等相关规定。1.2 主要试剂及仪器 型胶原C端肽试剂盒（中国北京康为世纪，批号：C0681257875），显微-CT（广州中科恺盛医疗科技有限公司，型号：eX-plore LocusSP），台 式 冷 冻 离 心 机（中 国 湖 南 湘 仪，型 号：H1650R），荧光定量 RCP 仪（美国 Therm，型号：PIKOREAL96）、电泳仪（中国北京六一，型号：DYY2C），mRNA 逆转录试剂盒（北京康为世纪，批号：CW2141），华佗牌电针仪（苏州医疗用品有限公司，型号：SDZV）、华佗牌一次性无菌针（0.25mm25mm，苏州医疗用品有限公司），光学显微镜（日本OLYMPUS公司，型号：OLYMPUS CH-20）。1.3 分组与造模 24月龄SD雄性大鼠16只，随机分为老年组和电针组各8只；另8只6月龄SD雄性大鼠为青年组。结合课题组前期研究10-12及国外类似研究13-15，本研究通过自然衰老方式复制骨关节炎动物模型。1.4 干预方法 电针组接受电针干预，大鼠在苏醒状态下固定于鼠板，参照 实验动物常用穴位名称与定位第2部分：大鼠16取穴双侧“太溪”“足三里”“阳陵泉”“血海”，针刺35mm，采用疏密波，密波15Hz，疏波3Hz，电流1mA，1次/天，每次30min，每周5天，连续干预8周，其余两组不做处理。1.5 观察指标 大鼠腹腔注射1%戊巴比妥钠（40mg/kg）进行麻醉。摘除眼球，眼眶取血，ELISA法检测外周血CTX-水平；切取左侧胫骨平台2cm左右标本，多聚甲醛固定，显微CT检测左膝软骨及软骨下骨骨微结构；番红-固绿染色观察左膝软骨及软骨下骨组织形态学结构；RT-qPCR、Western blot检测分别右膝软骨及软骨下骨mRNA、蛋白表达。1.5.1 ELISA检测外周血CTX-大鼠眼眶取血约4mL，4 1000G，离心外周血 15min，取上清，按ELISA试剂盒说明检测CTX-水平。1.5.2 Micro-CT 检测左胫骨微结构 左膝软骨及软骨下骨多聚甲醛浸润24h，冰箱保存。使用显微CT对左膝软骨下骨进行扫描，扫描参数设置：电流强度0.1mA，图像分辨率10241024，扫描时间4min，曝光时间8ms。将扫描后图片导入系统中，计算出各组大鼠骨密度（BMD）、骨体积分数（BV/TV）、骨小梁数量（Tb.N）、骨小梁间距（Tb.Sp）等参数。1.5.3 番红-固绿染色 显微CT检测后，将左膝软骨及软骨下骨放入 10%的甲醛 EDTA 螯合剂脱钙 5周，石蜡浸润，切片，厚度约4m，烘干切片脱蜡。将切片依次放入二甲苯、中10min，100%乙醇（I）中5 min洗去二甲苯；95%乙醇中水化5min，85%乙醇中水化5min，蒸馏水中水化待用。将切片番红染色12h，固绿染色5min左右，无水乙醇脱水5min，二甲苯透明 5min，最后中性树胶封片，光学显微镜观察，收集图片并分析。1.5.4 Mankins评分 采用Mankins评分量表12评估左膝软骨及软骨下骨组织形态结构，包括软骨结构、软骨细胞、基质染色、潮线完整性等四个方面，评分细则见表1。表1 Mankins评分细则评分内容软骨结构软骨细胞番红O-固绿染色潮线0分软骨表面正常正常正常正常1分表面不规则，有裂隙弥散增多轻度减少多重潮线2分表面有裂隙，达移行层出现大量细胞聚集中度减少血管入侵潮线3分裂隙到辐射层数量明显减少重度减少-4分裂隙达钙化层-染色消失-5分软骨脱落，无法分清结构-11中 医 康 复2024 年 第 1 卷 第 5 期基 础 实 验 研 究表2 引物信息基因名称aggrecanase-2SIRT1-actin引物序列（5-3）上游GAGTACAGTTTGCCTACCGCCAT下游CCTTTTGCATCGGACTGATAGCC上游AGTTCTATACCCCATGAAGTGC下游GCATACTCGCCACCTAACCT上游ACATCC GTAAAGACC TCTATG CC下游TAC TCC TGC TTG CTGATC CAC产物长度178bp137 bp223bp1.5.5 RT-qPCR法检测 aggrecanase-2、SIRT1 mRNA表达水平 随机选取5只大鼠样本进行检测，取存于Trizol中右膝关节软骨组织约0.02g，充分研磨，常温下裂解 5min，加入 200L 三氯甲烷后，静置 3min，4，12000r/min离心15min后加200L的异丙醇，静置，4，12000r/min离心10min后，去上清。以组织总mRNA为模板，逆转录cDNA，检测右膝软骨及软骨下骨mRNA表达水平。运用primer5软件设计引物，由北京擎科合成引物，引物序列见表2。1.5.6 Western blot检测aggrecanase-2、SIRT1蛋白表达水平 随机选取5只大鼠样本进行检测，取0.025g右膝关节软骨组织，加入RIPA裂解液300L反复研磨，12000rpm离心15min提取蛋白。配制10%的分离胶加入TEMED后灌胶。电泳，转膜，封闭，将一抗按比例稀释（aggrecanase-2 0.22/mL，-actin 1:5000），孵育，稀释 HRP标记的二抗（HRP goat anti-mouse IgG 1:5000），共同孵育，ECL 发光液孵育1min，显影冲洗，用Image J 1.8.0软件进行分析，检测右膝软骨及软骨下骨 aggrecanase-2、SIRT1 蛋白表达水平。1.6 统计方法 采用SPSS 26.0软件进行数据分析。计量资料以均值加减标准差（x s）表示，多组间及治 疗 前 后 比 较 采 用 单 因 素 方 差 分 析（One-wayANOVA），组间两两比较方差齐时采用LSD检验，方差不齐时采用 Dunnetts T3检验。以 P0.05为差异有统计学意义。2 2结果结果2.1 CTX-含量比较 与青年组相比，老年组外周血中 CTX-含量增高，差异有统计学意义（P0.05）；与老年组大鼠相比，电针组大鼠外周血中CTX-水平降低，差异有统计学意义（P0.05），见表3。表3 各组大鼠CTX-水平比较（x s）组别青年组老年组电针组例数888CTX-含量（ng/mL）1.640.354.140.492.640.50注：与青年组比较，P0.05；与老年组比较，P0.052.2 软骨下骨显微 CT 比较 青年组骨小梁结构正常，排列紧密；与青年组相比，老年组骨小梁结构异常，数量明显减少，排列稀疏，出现空腔；与老年组相比，电针组骨小梁数量有所增加，骨小梁间距减小空腔减小，见图1。2.3 软骨下骨微结构比较 与青年组相比，老年组大鼠骨密度、骨体积分数、骨小梁数量减少，差异有统计学意义（P0.05），骨小梁间距增大，差异有统计学意义（P0.05）；与老年组相比，电针组骨密度增加，差异有统计学意义（P0.05），骨小梁间距减少，差异有统计学意义（P0.05），见表4。2.4 软骨组织番红-固绿染色比较 青年组软骨表面光滑平整，形态结构正常，基质染色均匀，潮线正常；老年组表面结构破坏严重，出现裂隙，染色不均，出现多重潮线；电针组软骨表面平整，未见明显裂层，染色较均匀，细胞结构介于其余两组之间，见图2。青年组老年组电针组图1 各组大鼠左膝关节软骨下骨显微CT比较表4 各组大鼠软骨下骨微结构比较（x s）组别青年组老年组电针组例数888BMD（g/cm2）0.310.050.200.040.250.03BV/TV（%）19.723.709.883.5212.653.18Tb.N（1/mm）2.150.380.940.391.110.29Tb.Sp（mm）0.330.050.840.150.660.11注：与青年组比较，P0.05；与老年组比较，P0.05 12中 医 康 复2024 年 第 1 卷 第 5 期基 础 实 验 研 究青年组老年组电针组图2 各组大鼠关节软骨组织番红-固绿染色比较（200）2.5 Mankins 评分比较 与青年组相比，老年组Mankins评分增加，差异有统计学意义（P0.05）；与老年组相比，电针组Mankins评分降低，差异有统计学意义（P0.05），见表5。2.6 aggrecanase-2、SIRT1 mRNA 表达比较 与青年组相比，老年组右膝关节软骨及软骨下骨aggrecanase-2 mRNA表达升高、SIRT1 mRNA表达降低，差异有统计学意义（P0.05）；与老年组相比，电针组右膝关节软骨及软骨下骨 aggrecanase-2 mRNA 表达降低、SIRT1 mRNA 表达升高，差异有统计学意义（P0.05），见表6。2.7 aggrecanase-2、SIRT1 蛋白表达水平比较 与青年组相比，老年组右膝关节软骨及软骨下骨aggrecanase-2蛋白表达升高、SIRT1蛋白表达降低，差异有统计学意义（P0.05）；与老年组相比，电针组右膝关节软骨及软骨下骨aggrecanase-2蛋白表达降低、SIRT1 蛋白表达升高，差异有统计学意义（P0.05），见表7、图3。表5 各组大鼠Mankins评分比较（x s）组别青年组老年组电针组例数888Mankins评分0.380.5210.882.536.131.13注：与青年组比较，P0.05；与老年组比较，P0.05表6 各组大鼠aggrecanase-2、SIRT1 mRNA表达水平比较（x s）组别青年组老年组电针组例数555aggrecanase-20.840.224.440.622.530.51SIRT10.980.100.180.050.800.15注：与青年组比较，P0.05；与老年组比较，P0.05表7 各组大鼠aggrecanase-2、SIRT1的蛋白表达水平比较（x s）组别青年组老年组电针组例数555aggrecanase-20.120.050.360.050.230.06SIRT10.500.080.220.110.400.09注：与青年组比较，P0.05；与老年组比较，P0.05图3 各组大鼠aggrecanase-2、SIRT1蛋白表达水平比较3 3讨论讨论膝骨关节炎属于“痹证”“骨痹”等范畴，按中医理论，肾主骨生髓，肝主筋。素问 痿论篇 指出“骨枯而髓减，发为骨痿”，灵枢 经脉 指出“足少阴气绝，则骨枯”。“太溪”为肾经原穴，主治肾虚证；“足三里”是足阳明胃经的主要穴位之一，有通经活络、扶正祛邪的作用；“阳陵泉”为筋之会穴，具有舒筋和壮筋的作用；“血海”是足太阴脾经上的重要穴位，有运化脾血之功，故选用以上穴位进行电针刺激。针灸治疗KOA疗效确切。一项多中心研究显示17，电针对KOA患者持续干预8周，每周3次，发现电针可以使患者的疼痛减轻，膝关节功能得到改善，且随访显示疗效持续到26周。基础研究显示，电针可以缓解 KOA 大鼠关节软骨降解12，促进KOA大鼠关节软骨及软骨下骨由M1向M211，抑制细胞凋亡10。Mankins评分是公认用来评估软骨退变的通用标准，总分14分，得分越高，软骨退变越严重。本研究中，老年组 Mankins评分为 10.882.53 分；番红-固绿染色显示，表面结构破坏严重，形态结构异常，出现裂隙，染色不均。结合Mankins评分及番红-固绿染色结果，参考课题组前期研究结果10-12，可视为造模成功。有研究报道，骨关节炎早期软骨下骨局部会形成骨质疏松，骨微结构会发生改变，表现为骨密度、骨体积分数减少18-19。孙光华等20研究表明，电针治疗可以提高去卵巢大鼠的骨密度、骨体积分数、骨 13中 医 康 复2024 年 第 1 卷 第 5 期基 础 实 验 研 究小梁数量，从而达到治疗骨质疏松的目的。还有研究发现21在OA动物模型中，软骨下骨骨小梁数量减少，骨体积和骨密度下降。在本研究中，电针干预后，大鼠骨密度增加，骨小梁间距减少，实验结果说明电针干预可以改善KOA大鼠的骨微结构，这与孙光华等研究结果一致。KOA的发生由多种因素导致，与软骨细胞、细胞外基质的代谢失衡有关，因此临床上治疗KOA更注重对关节软骨的保护。关节软骨主要由胞外基质和软骨细胞组成，细胞外基质的代谢处于动态平衡中，代谢失衡时就会发生骨关节炎。细胞外基质主要由蛋白聚糖和型胶原构成，型胶原是三螺旋结构，可为关节软骨提供骨架支持，蛋白聚糖附在型胶原表面，对其起保护作用并提供抗压及润滑作用。蛋白聚糖酶是引起蛋白聚糖水解的主要酶之一，蛋白聚糖酶属于ADAMTS家族，其中蛋白聚糖酶-1（aggrecanase-1）和蛋白聚糖酶-2（aggrecanase-2）是主要的蛋白聚糖水解酶，是软骨降解的始动因素22。型胶原发生降解时，型胶原C端肽（CTX-）是其中的产物之一，因CTX-较稳定，且在肾中不能被降解，可以小肽形式进入血液，因此常检测血液中的CTX-含量来反映软骨代谢水平。在本研究中，老年组大鼠外周血中CTX-水平较青年组增加，骨组织中aggrecanase-2的mRNA及蛋白表达水平较青年组增加，说明老年组大鼠关节软骨发生了降解。电针干预后，电针组CTX-水平、aggrecanase-2的mRNA及蛋白表达水平均降低，说明电针干预能够抑制KOA大鼠关节软骨的降解。SIRT1是一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸依赖性的去乙酰化酶，位于染色10q22.1，全长为33660bp，编码 747 个氨基酸，包含 9 个外显子、8 个内含子。SIRTl有脱乙酰基酶活性，因此有保护膝骨关节炎的作用。SIRT1在基因稳定、肿瘤的发生中起重要作用，与退行性骨关节疾病及衰老疾病密切相关。SIRT1还与软骨细胞增殖分化有关23-24，参与软骨缺损修复25-26。SIRT1可通过调节细胞自噬、促进型胶原的合成等形式延缓OA进展27，激活SIRT1的表达，可以发挥其去乙酰化酶作用，保护软骨细胞28。研究报道29，OA患者成骨细胞SIRT1表达下降，敲出SIRT1的表达可抑制型胶原的产生。葡萄糖胺可提高 SIRT1 的 mRNA 及蛋白的表达，从而保护OA软骨30。在本研究中，老年组大鼠SIRT1 mRNA及蛋白表达降低，电针干预后SIRT1 mRNA及蛋白表达升高，说明电针干预能够促进SIRT1的表达。本研究也还有存在不足的地方，例如电针参数尚无统一标准，参照的是既往研究，未研究不同参数对实验的影响，需要课题组进一步研究。综上所述，电针可通过促进SIRT1的表达，抑制关节软骨降解，改善软骨下骨骨微结构，从而保护关节软骨。参考文献参考文献1 Yang R,Guo Y,Zong S,et al.Bardoxolone methyl ameliorates osteoarthritis by inhibiting osteoclastogenesis and protecting the extracellular matrix against degradationJ.Heliyon,2023,9(2):e13080.2Guo J,Chen Y,Li Z,et al.The cerebral mechanism of acupuncture for treating knee osteoarthritis:study protocol for a randomized controlled trialJ.Trials,2019,20(1):126.3 张莹莹,李旭东,杨佳娟,等.中国40岁及以上人群骨关节炎患病率的Meta分析J.中国循证医学杂志,2021,21(4):407-414.4 黄夏荣,彭婷,周君.针刺治疗膝骨关节炎的研究进展J.按摩与康复医学,2022,13(9):68-71,76.5 中华医学会骨科学分会关节外科学组,中国医师协会骨科医师分会骨关节炎学组,国家老年疾病临床医学研究中心,等.中国骨关节炎诊疗指南（2021年版）J.中华骨科杂志,2021,41(18):24.6叶海明,曾晖,杨琪,等.软骨细胞中SIRT1基因敲减后作用状态不明确信号通路及对相关疾病或功能的影响J.中国组织工程研究,2024,28(20):3123-3129.7Liang J,Huang G,Liu X,et al.The ZP8/SIRT1 axis regulatesaleolar progenitor cel renewal in aging and idopathic pulmonaryfibrosisJ.J Clin Invest,2022,132(11):e157338.8Sun K,Wu Y,Zeng Y,et al.The role of the sirtuin family in cartilage and osteoarthritis:molecular mechanisms and therapeutic targetsJ.Arthritis Res Ther,2022,24(1):286.9Papageorgiou AA,Litsaki M,Mourmoura E,et al.DNA methylation regulates Sirtuin 1 expression in osteoarthritic chondrocytesJ.Adv Med Sci,2023,68(1):101-110.10 黄夏荣,王金玲,孙光华,等.电针对老年大鼠关节软骨及软骨下骨凋亡相关蛋白表达的影响J.中医药导报,2023,29(7):46-51.11 黄夏荣,周君,孙光华,等.电针对老年大鼠关节软骨及软骨下骨极化相关蛋白表达的影响 J.实用医学杂志,2023,39(12):1473-1479.12 黄夏荣,胡莉芝,孙光华,等.电针干预老年膝骨关节炎大鼠关节软骨及软骨下骨P53、P21的表达J.中国组织工程研究,2024,28(8):1174-1179.13 Serra CI,Soler C.Animal Models of Osteoarthritis in Small MammalsJ.Vet Clin North Am Exot Anim Pract,2019,22(2):211-221.14 Teeple E,Jay GD,Elsaid KA,et al.Animal models of osteoarthritis:challenges of model selection and analysisJ.AAPS J,2013,15(2):438-446.15 Takada T,Miyaki S,Ishitobi H,et al.Bach1 deficiency reduces severity of osteoarthritis through upregulation of heme oxygenase-1J.Arthritis Res Ther,2015,17:285.16 中国针灸学会.实验动物常用穴位名称与定位第2部分：大鼠 14中 医 康 复2024 年 第 1 卷 第 5 期基 础 实 验 研 究J.针刺研究,2021,46(4):351-352.17 Tu JF,Yang JW,Shi GX,et al.Efficacy of Intensive AcupunctureVersus Sham Acupuncture in Knee Osteoarthritis:A RandomizedControlled TrialJ.Arthritis Rheumatol,2021,73(3):448-458.18 Yan J,Feng G,Yang Y,et al.Autophagy attenuates osteoarthritisin mice by inhibiting chondrocyte pyroptosis and improving subchondral bone remodelingJ.Biomol Biomed,2023,23(1):77-88.19 Dai G,Xiao H,Liao J,et al.Osteocyte TGF1Smad2/3 is positively associated with bone turnover parameters in subchondralbone of advanced osteoarthritisJ.Int J Mol Med,2020,46(1):167-178.20 孙光华,廖瑛,廖源,等.电针对去卵巢大鼠关节软骨退变及软骨下骨骨质疏松的影响J.针刺研究,2018,43(12):781-787.21 Aizah N,Chong PP,Kamarul T.Early Alterations of SubchondralBone in the Rat Anterior Cruciate Ligament Transection Model ofOsteoarthritisJ.Cartilage,2021,13(2_suppl):1322S-1333S.22 王正辉,杨壮群,吴宝俊,等.Aggrecanase-2表达沉默对体外培养的软骨细胞基质代谢的影响J.组织工程与重建外科杂志,2012,8(5):245-248.23 Yan S,Dong W,Li Z,et al.Metformin regulates chondrocyte senescence and proliferation through microRNA-34a/SIRT1 pathway in osteoarthritisJ.J Orthop Surg Res,2023,18(1):198.24 Yu X,Xu X,Dong W,et al.DDIT3/CHOP mediates the inhibitoryeffect of ER stress on chondrocyte differentiation by AMPK-SIRT1 pathwayJ.Biochim Biophys Acta Mol Cell Res,2022,1869(8):119265.25 Elayyan J,Carmon I,Zecharyahu L,et al.Lef1 ablation alleviatescartilage mineralization following posttraumatic osteoarthritis inductionJ.Proc Natl Acad Sci U S A,2022,119(21):e2116855119.26 Wang Y,Chen G,Yan J,et al.Upregulation of SIRT1 by Kartogenin Enhances Antioxidant Functions and Promotes Osteogenesis in Human Mesenchymal Stem CellsJ.Oxid Med Cell Longev,2018,2018:1368142.27 Deng Z,Li Y