巴戟天分子鉴定方法研究进展.pdf

鉴定资源Identification&SourceGendingSwhyenz 60巴戟天分子鉴定方法研究进展张超裕，田慧*（广西中医药大学，南宁 530200）基金项目：壮瑶药协同创新中心（桂教科研201320号）、广西壮瑶药重点实验室（桂科基字201432号）、广西壮族自治区民族药资源与应用工程研究中心（桂发改高技函20202605号）、广西中医药重点学科壮药学（GZXK-Z-20-64）、广西一流学科中药学（民族药学）（桂教科研201812号）第一作者：张超裕，硕士生，从事中药、民族药成分及质量控制研究*通讯作者：田慧，教授，从事中药品种鉴定与质量评价鉴定资源【摘 要】本文对巴戟天及其伪品进行psbA-trnH、rDNA-ITS序列分析及鉴定。在巴戟天遗传多样性分析中运用SRAP与CDDP标记，ITS2条形码的南药巴戟天真伪鉴别研究和ITS2与psbA-trnH序列于巴戟天及其3种近缘植物的研究。综述巴戟天的鉴定技术方面的研究进展，为鉴定巴戟天的真伪、优劣和保证临床用药提供参考。【关键词】psbA-trnH序列鉴定；rDNA-ITS序列分析；SRAP和CDDP标记；ITS2条形码Research progress on molecular identification methods of Morinda officinalisZhang Chaoyu，Tian Hui*（Guangxi University of Chinese medicine，Nanning 530200）【Abstract】The psbA-trnH，rDNA-ITS sequences of Morinda officinalis and its forgeries were analyzed and identified.Using SRAP and CDDP markers to analyze the genetic diversity of Morinda officinalis，identification of authenticity of Morinda officinalis with ITS2 barcode，studies on ITS2 and psbA-trnH sequences in Morinda officinalis and its three related plants.The research progress in identification technology of Morinda officinalis was reviewed，so as to provide reference for identification of authenticity，pros and cons of Morinda officinalis and guarantee of clinical drug use.【Keywords】sequence identification of psbA-trnH；Sequence analysis of rDNA-ITS；SRAP and CDDP markers；ITS2 barcode巴戟天（Morinda officinalis How.）是我国著名的四大南药之一，巴戟天具有补肾阳，强筋骨，祛风湿的功效。其功效强，应用广，价格高，长期供不应求，曾出现了多种混伪品，而为了识别真假，确保药材质量，以保证临床用药的准确有效，提高巴戟天的鉴定技术已经迫在眉睫。1 巴戟天的鉴定方法1.1 叶绿体基因psbA-trnH区间序列于巴戟天及其常见伪品鉴定的应用姬生国1等利用叶绿体基因psbA-trnH区间序列对巴戟天及其常见伪品大果巴戟、樟叶巴戟、羊角藤、虎刺等的分子鉴定。各样品psbA-trnH序列长度为306 bp，巴戟天及其伪品之间存在多个特异性信息位点，此可作为巴戟天DNA分子鉴定的依据。1.2 对比rDNA-ITS序列差异于巴戟天及其混伪品鉴定的应用丁平2等对巴戟天及其常见混伪品的rDNA-ITS进行了PCR扩增、测序，并运用CLUSTALX、MEGA软件对该测试区进行序列分析。得出巴戟天及其混伪品的rDNA-ITS区序列。比较了巴戟天与常见混伪品之间的rDNA-ITS碱基序列的差异及其规律，为巴戟天及混伪品的指纹图谱鉴别提供分子标记。巴戟天分子鉴定方法研究进展611.3 SRAP和CDDP分子标记于巴戟天的应用罗铭欣3等应用SRAP和CDDP分子标记技术对肇庆多组巴戟天材料进行遗传多样性分析，运用NTSYS-pc 2.1软件计算样品间的遗传相似系数，按照UPGMA方法进行聚类分析，并对两种分子标记结果进行比较与分析。为巴戟天的培育、保护与鉴 别提供科学依据。1.4 ITS2条形码于巴戟天及其混伪品的真伪鉴别的应用黄琼林4等，通过建立基于ITS2条形码的巴戟天及其混伪品的真伪鉴别方法。获得的22条ITS2序列的长度范围为224 244 bp，GC含量范围为59.870.1。巴戟天与8种混伪品的ITS2序列存在155处变异，发现种间K2P遗传距离远大于种内K2P遗传距离。建立起巴戟天及其混伪品基于ITS2条形码的鉴别体系，为巴戟天的真伪鉴别和用药安全提供了保障。1.5 ITS2和psbA-trnH序列鉴别巴戟天及其3种近缘植物卫滢5等，通过ITS2和psbA-trnH序列进行PCR扩增和测序，运用遗传距离分析、DNA Barcoding Gap和系统发育（NJ）树3种方法对其进行鉴别。结果，ITS2序列上种间变异大于种内变异，存在较显著的DNA Barcoding Gap，其NJ树能准确鉴别出全部供试物种。ITS2序列的物种鉴定能力优于psbA-trnH序列。因此，基于ITS2和psbA-trnH序列能成功鉴别巴戟天及其3种近缘植物。2 总结由于巴戟天大多通过扦插繁殖，基因交流少，种族基因稳定为分子鉴定提供了良好的条件。巴戟天二级内部转录空间（ITS2）序列设计LAMP特异引物组特异性高。SRAP和CDDP标记能准确地揭示巴戟天种质之间的亲缘关系。3 讨论由于产地不同、野生与栽培以及生长年限不同都表现出质量和疗效上的差异，这些问题给巴戟天DNA鉴别提出了新的挑战，依赖经典形态分类以及传统的来源鉴定，形状鉴定，显微鉴定和理化鉴别方法已无法满足鉴别的需要。DNA条形码（DNA barcoding）技术已有多种核片段和质体基因及其组合被提议为植物DNA条形码。ITS2条形码被认为是药用植物通用DNA条形码，试验中核酸序列信息、遗传距离分析、DNA Barcoding Gap检验及系统发育树的评价与分析中显示ITS2序列的保守率高、变异率低、简约信息率适中、种内与种间的差异明显、NJ树的物种鉴别率为100，能够鉴别出所有巴戟天伪品。仅仅利用其一小段的标准DNA序列就可以达到巴戟天的快速、准确鉴别。为巴戟天鉴别和质量控制提供新的方法和技术。参考文献1姬生国，王东，张春荣，等.巴戟天及其伪品的psbA-trnH序列鉴定J.广东药学院学报，2011，27（3）：253-255.2丁平，方琴.巴戟天与常见混伪品的rDNA-ITS序列分析及其分子鉴定J.中草药，2005（6）：908-911.3罗铭欣，刘凤民，张伟丽，等.SRAP和CDDP标记在巴戟天遗传多样性分析中的应用J.分子植物育种，2021，19（11）：3 661-3 669.4黄琼林，郑夏生，蔡春.基于ITS2条形码的南药巴戟天真伪鉴别J.热带作物学报，2014，35（8）：1 571-1 576.5卫滢，詹若挺，梁红玲，等.基于ITS2和psbA-trnH序列鉴别巴戟天及其3种近缘植物J.作物杂志，2017（5）：55-60.311-gvangjhozyanghhih、-danzyanghcunz、cinzyangh lozsenzcunz.Gij yenzgiu gezgoj neix vih vaiqvwt niemhdingh gij veihfazsing cwngzfwn gocinzyangh caeuq sijsaeq faenbied binjcaet de daezhawj le saedniemh baengzgawq.【Aenswz Gvanhgen】Gocinzyangh；veihfazsing cwngzfwn；HS-GC-MS；gocwx caeuq vunzgoeng ndaemRaudingh Caeuq Faensik Gij Hamzliengh 7 Cungj Swnghvuzgenjlei Cwngzfwn Ndaw Sanghgouhconh Ywyauzcuz（瑶药双钩钻中7种生物碱类成分的含量测定及分析）Se Fungh1，2，Lanz Siengh1，Linz Cinghvaz1，2，Cangj Linz1，2（1.Gvangjsih Cunghyihyoz Dayoz Yauzyihyoz Yozyen，Gvangjsih Nanzningz 530200；2.Gvangjsih Cang-Yauzyoz Gunghcwngz Gisuz Yenzgiu Cunghsinh，Gvangjsih Nanzningz 530200）【Cwzyau】Sanghgouhconh dwg gijyw Yauzcuz ciengzyungh，danhseih mboengqneix doiq de damqgouz loq noix，vih haifat leihyungh gij swhyenz de，yungh fuengfap HPLC doengzseiz raudingh ndaw de hamzmiz giginghgouhdwngzgenj、yigouhdwngzgenj、yigiginghgouhdwngzgenj、gouhdwngzgenj、fungzswjcinzgyazmiz、giginghmauzgouhdwngzgenj caeuq mauzgouhdwngzgenj daengj 7 cungj swnghvuzgenjlei cwngzfwn hamzliengh，nyinhdingh de guhyw miz gohyozsing.Gezgoj biujmingz，7 cungj cwngzfwn youq ndaw gvaengxlaengx swhgeij sensing gvanhaeh ndei（r 0.9991），bingzyaenx gyayiengh soudauqlwd dwg 97.37103.29，RSD dwg 1.403.02.Ndaw sanghgouhconh mbouj doengz diegok cungj hamz miz 7 cungj swnghvuzgenjlei cwngzfwn，dwg fungzswjcinzgyazmiz caeuq giginghmauzgouhdwngzgenj hamzliengh haemq sang.Cungj banhfap neix gienjbienh heihguh，dauqyienhsingq ndei，vih sanghgouhconh caetliengh gaemhanh caeuq swhyenz haifat wngqyungh daezhawj le gohyoz baengzgawq.【Aenswz Gvanhgen】Yw Yauzcuz；sanghgouhconh；swnghvuzgenj；raudingh hamzlienghGij Fazcanj Baenaj Damqgouz Gobahgizdenh Fwnhswj Gending Fuengfap（巴戟天分子鉴定方法研究进展）Cangh Cauhyi，Denz Vei（Gvangjsih Cunghyihyoz Dayoz，Gvangjsih Nanzningz 530200）【Cwzyau】Gobahgizdenh dwg doenghgo cencaujgoh，aeu gij rag guhyw，gij gisuz gending de gaenq haemq cingzsug dabdaengz fwnhswj suijbingz，lumjbaenz bahgizdenh caeuq gij yw gyaj de psbA-trnH silez gending，bahgizdenh caeuq gij yw gyaj ciengzraen rDNAITS silez faensik caeuq gij fwnhswj de gending、vanzgaidauj dwngjvwnh mbe gvangq demlai gisuz laebguh bahgizdenh niemhdingh fuengfap，SRAP caeuq CDDP biugeiq youq bahgizdenh yizconz laiyienghsingq faensik，gij bahgizdenh diegok mbouj doengz yezluzdij gihyinhcuj doxbeij yenzgiu，ITS2 diuzhingzmaj ywbaihnamz bahgizdenh caen gyaj sijsaeq faenbied yenzgiu caeuq ITS2 nem psbA-trnH silez youq bahgizdenh lienz daengz 3 cungj doenghgo gaenhyienz de dih yenzgiu.Doenggvaq cingjleix、faensik bahgizdenh doxgven yenzgiu vwnzyen，gyoebgangj gij fazcanj baenaj damqgouz bahgizdenh gending gisuz fuengmienh，vih gending bahgizdenh caen gyaj、ndei yaez caeuq baujcwngq linzcangz yunghyw daezhawj canhgauj.【Aenswz Gvanhgen】psbA-trnH silez gending；rDNAITS silez faensik；SRAP caeuq CDDP biugeiq；yezluzdij gihyinhcuj doxbeij；ITS2 diuzhingzmajGij Daihgaiq Cingzgvang Doenghgo Vangzdanzsuz Faenbouh、Vayoz Cwngzfwn Caeuq Guhyw Gyaciz（黄檀属植物的分布、化学成分及药用价值概况）Cinh Danhdanh1，Veiz Ginhlingz1，Giuh Ginz1，Lij Vwnzsiu1，2，Cinz Gohcwngz1，Cangh Myauj1，Cinh Hansinh1*（1.Gvangjsih Cunghyihyoz Dayoz，Gvangjsih Nanzningz 530001；2.Hwzlungzgyangh Cunghyihyoz Dayoz Gyahmuzswh Yozyen，Hwzlungzgyangh Gyahmuzswh 154007）【Cwzyau】Muzdiz：Vih caenh itbouh haifat leihyungh doenghgo vangzdanzsuz daezhawj canhgauj.Fuengfap：Yungh vwnzyen gyoebgangjfap.Gezgoj：Guek raeuz doenghgo vangzdanzsuz swhyienz fungfouq，baihnaj gaenq rox miz 28 cungj，1 yiengh bienqcungj，cujyau gyonj youq baihsaenamz、baihnamz daengz cungqgyang guek raeuz.Doenghgo vangzdanzsuz hamz miz vuengzdoengzlei、swhcunzlei caeuq sanhdezlei daengj hozsing cwngzfwn；miz gang yangjva、dingj fatyenz、dingj nengz、baenz ndok hozsing、henhoh aen uk、hawj oksiq dingz daengj ywleix cozyung.Gietlwnh：Wnggai cungfaen leihyungh doenghgo vangzdanzsuz gij guh yw gyaciz de，caenh itbouh damqgouz、haifat caeuq leihyungh.【Aenswz Gvanhgen】Doenghgo vangzdanzsuz；faenbouh；vayoz cwngzfwn；ywleix cozyungDoxbeij Yungh Hungzvai Gvanghbujfaz