CMTM6、RASAL2在前列腺癌组织中的表达及其与临床病理特征及预后的关系.pdf

248前列腺癌专题CMTM6、R A SA L 2 在前列腺癌组织中的表达及其与临床病理特征及预后的关系刘太阳，李杰，沈雁冰，桂琦，黄雪强，文秀华（驻马店市中心医院泌尿外科，河南驻马店46 30 0 0）Expressions of CMTM6 and RASAL2 in prostate cancerrelationship with clinicopathological features and prognosisLIU Taiyang,LI Jie,SHEN Yanbing,GUI Qi,HUANG Xueqiang,WEN Xiuhua(Department of Urology,Zhumadian City Center Hospital,Zhumadian 463000,China)ABSTRACT:Objective To investigate the expressions of containing CKLF like MARVEL transmembrane domain gene 6(CMTM6)and ras protein activator like 2(RASAL2)in prostate cancer tissues,and to analyze the relationships between theabove factors and the clinicopathological characteristics and prognosis of prostate cancer patients.Methods The prostatecancer tissues and adjacent tissues of 80 prostate cancer patients admitted to Zhumadian City Center Hospital during Feb.2018and Feb.2020 were collected.Expressions of CMTM6 and RASAL2 were detected with immunohistochemical method.Therelationship between the expressions of CMTM6 and RASAL2 and the clinical pathological characteristics of prostate cancerwere analyzed.The survival curve was plotted with Kaplan-Meier method.The prognostic factors were analyzed withmultivariate Cox regression.Results The positive expression rate of CMTM6 in prostate cancer tissues was 67.50%,whichwas obviously higher than 38.75%in adjacent tissues(x?=13.277,P0.05),but toTNM staging,Gleason score,lymph node metastasis and preoperative PSA level(P0.05).Survival curve showed that the 3-year survival rate of positive CMTM6 expression patients was 61.11%(33/54),which was obviously lower than that of negativepatients,which was 88.46%(23/26)(x=5.940,P=0.015).The 3-year survival rate of positive RASAL2 expression patientswas 81.85%(31/38),which was obviously higher than that of negative patients,which was 59.52%(25/42)(x=4.887,P=0.027).Cox multivariate regression showed that Gleason score,lymph node metastasis,preoperative PSA level,CMTM6,andRASAL2 were independent influencing factors of prognosis(P0.05).Conclusion The positive expression rate of CMTM6 inprostate cancer tissues is significantly higher than that in paracancer tissues,while the positive expression rate of RASAL2 in prostatecancer tissues is significantly lower than that in paracancer tissues.Both CMTM6 and RASAL2 are closely related to the clinicalpathological characteristics and prognosis of prostate cancer patients,and may provide reference for the prognosis.KEY WORDS:prostate cancer;CMTM6;RASAL2;pathological features;3-year survival rate摘要：目的分析含家族成员6 的趋化因子样奇迹跨膜结构域（CMTM6)、大鼠肉瘤蛋白活化因子2(RASAL2)在前列腺癌组织中的表达，分析其与前列腺癌患者临床病理特征及预后的关系。方法收集驻马店市中心医院泌尿外科2 0 18 年2 月一2 0 2 0 年2月手术切除的前列腺癌组织及癌旁正常组织各8 0 例。免疫组化法测定前列腺癌组织和癌旁组织中CMTM6、R A SA L 2 阳性表达情况;分析其与前列腺癌患者临床病理特征的关系；使用Kaplan-Meier法绘制前列腺癌患者生存曲线；多因素 Cox回归分析前列腺癌患者预后的影响因素。结果CMTM6在前列腺癌组织中的阳性表达率为 6 7.50%，显著高于癌旁组织38.7 5%（x=13.2 7 7,P0.05），与TNM分期、Gleason评分、淋巴结转移、术前前列腺特异性抗原(PSA)水平相关（P0.05）。K a p l a n-M e i e r 生存曲线结果显示：CMTM6阳性表达患者3年存活率为6 1.11%（33/54），显著低于CMTM6阴性表达患者8 8.46%（2 3/2 6），（x=5.940,P=0.015)；R A SA L 2阳性表达患者3年存活率为8 1.8 5%（31/38），显著高于RASAL2阴性表达患者59.52%（2 5/42），（x=4.887，P=0.0 2 7)。Cox多因素回归分析结果显示：Gleason评分、淋巴结转移、术前PSA水平、CMTM6及RASAL2的表达情况均是影响前列腺癌收稿日期：2 0 2 3-0 7-0 4通信作者：文秀华，主任医师。E-作者简介：刘太阳，硕士研究生，副主任医师。研究方向：泌尿系肿瘤。E-mail：c v w 7 v 7 16 3.c o mJ Mod Urol,Vol.29 No.3 Mar.2024tissues and their修回日期：2 0 2 3-12-19http:/jmurology.xjtu.edu,cn;zgmnwk.cug.top现代泌尿外科杂志患者预后的独立因素（P2cm）,所得样本立即置于液氮速冻并保存于一8 0 冰箱待测，样本均经2 位以上病理专家确诊。前列腺癌患者年龄为438 1岁，平均（6 4.8 6 士7.6 1）岁。TNM分期：I、期为49 例，、I V 期为31例。肿瘤大小（最大径）：2 cm为46 例，2 cm为34例。Gleason评分6：7 分为43例，7 分为37 例。28例发生淋巴结转移。52 例未发生淋巴结转移。组2024年3月第2 9 卷第3期文献标志码：Ahttp:/jmurology.xjtu.edu,cn;zgmnwk.cug.top249D0l:10.3969/j.issn.1009-8291.2024.03.010织分化程度：中低分化46 例，高分化34例。术前前列腺特异性抗原（prostate specificantigen，PSA）水平 2 0 ng/mL为50 例,2 0 ng/mL为30 例。纳人标准：经病理检查确诊为前列腺癌；首次接受前列腺癌根治手术或放、化疗等相关治疗；临床资料完整。排除标准：合并其他恶性肿瘤；泌尿系统感染；重要脏器功能不全；免疫功能缺陷；存在传染性疾病。本研究获得我院伦理委员会批准（伦审批号2 0 2 0-0 2 18）。患者均签署知情同意书。1.2检测方法及随访使用免疫组化染色法对前列腺癌组织和癌旁组织中的CMTM6、RA SA L2 进行检测。将癌组织及癌旁组织用40 g/L多聚甲醛充分固定，随后进行常规石蜡包埋、切片、二甲苯脱蜡、高压热修复、双氧水封闭过氧化物酶。一抗低温孵育过夜，次日复温后添加二抗，DAB显色、复染、自来水冲洗、蓝化、乙醇脱水、中性树胶封片，用磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)作为阴性对照。采用半定量法对测定结果进行判定：依据细胞染色强度无色、浅染色、棕黄色及棕褐色分别记为0、1、2、3分；阳性细胞占比：50%7 5%为2 分，7 5%为3分；结果根据染色强度及阳性细胞占比积分乘积对测定结果进行判定：两项乘积 3为阳性表达。出院后通过电话或门诊复查等形式对患者连续随访3年,统计并记录所有前列腺癌患者3年内的生存情况，随访截止时间为患者死亡时间或2 0 2 3年2月。总生存时间（overall survival,OS)即患者手术日期至患者死亡日期或末次随访日期。1.3统计学方法采用SPSS25.0统计学软件进行数据分析，计数资料以例数（%）表示，行x检验；Kaplan-Meier法绘制CMTM6、RA SA L2 表达情况与前列腺癌患者的生存曲线，log-rank检验比较CMTM6、RA SA L2 阳性表达与阴性表达患者间的生存率差异；采用多元Cox回归分析影响前列腺癌患者预后状况的相关因素，P0.05表示差异有统计学意义。2结 果2.1CMTM6、RA SA L2 在前列腺癌和癌旁组织中的表达情况比较免疫组化结果显示：CMTM6表达于细胞膜中,前列腺癌组织中 CMTM6多呈棕黄色。250RASAL2表达于细胞核中，前列腺癌组织中RASAL2多呈棕褐色。CMTM6 在前列腺癌组织中的阳性表达率显著高于癌旁组织（6 7.50%Us.38.75%），差异有统计学意义（P0.05）。RA SA L2在前列腺癌组织中的阳性表达率显著低于癌旁组织（47.50%s.7 3.7 5%），差异有统计学意义（P0.05),与TNM分期、Gleason评分、淋巴结转移、术前PSA水平有关(P0.05,表2)。?A:CMTM6阳性表达；B:CMTM6阴性表达；C:RASAL2阳性表达；D:RASAL2阴性表达。CMTM6:含家族成员6 的趋化因子样奇迹跨膜结构域；RASAL2：大鼠肉瘤蛋白活化因子2。表1CMTM6、RA SA L2 在前列腺癌和癌旁组织中的表达情况比较CMTM6表达*组别例数前列腺癌组80癌旁组80CMTM6:含家族成员6 的趋化因子样奇迹跨膜结构域；RASAL2：大鼠肉瘤蛋白活化因子2。x=13.277,P0.001；x=11.546,P=0.001。表2 CMTM6、RA SA L2 表达与前列腺癌患者临床病理特征的关系病理特征值P值阳性(n=54)阴性(n=26)年龄1.21860岁3660岁44TNM分期I、I 期I、I V 期肿瘤大小2 cmGleason 评分7分7分淋巴结转移是否组织分化程度中低分化高分化术前PSA水平20 ng/mL20 ng/mLCMTM6：含家族成员6 的趋化因子样奇迹跨膜结构域；RASAL2：大鼠肉瘤蛋白活化因子2;PSA：前列腺特异性抗原。C图1CMTM6、RA SA L2 在前列腺癌和癌旁组织中的表达（X200)阳性阳性54(67.50)26(32.50)31(38.75)49(61.25)CMTM6 表达例数22(40.74)32(59.26)4928(51.85)3126(48.15)4628(51.85)3426(48.15)4324(44.44)3730(55.56)2823(42.59)5231(57.41)4629(53.70)34.25(46.30)5029(53.70)3025(46.30)http:/;zgmnwk.cug.top例(%)RASAL2表达阴性阴性38(47.50)42(52.50)59(73.75)21(26.25)例(%)RASAL2表达值P值阳性(n=38)阴性(n=42)0.2701.70314(53.85)20(52.63)12(46.15)18(47.37)6.1830.01321(80.77)5(19.23)18(69.23)8(30.77)19(73.08)7(26.92)5(19.23)21(80.77)17(65.38)9(34.62)21(80.77)5(19.23)0.19216(38.10)26(61.90)19(50.00)30(71.43)19(50.00)12(28.57)2.1690.1415.7880.0164.2100.0400.9800.3225.4850.0190.3860.70220(52.63)26(61.90)18(47.37)16(38.10)15(39.47)28(66.67)23(60.53)14(33.33)9(23.68)19(45.24)29(76.31)23(54.76)19(50.00)27(64.29)19(50.00)15(35.71)19(50.00)31(73.81)19(50.00)11(26.19)0.0490.4025.9340.0154.0740.0441.6660.1974.8250.028现代泌尿外科杂志2.3CMTM6、RA SA L2 表达与前列腺癌患者生存状况分析8 0 例前列腺癌患者在随访结束后,2 4例死亡，56 例存活，生存率为7 0.0 0%（56/8 0），CMTM6阳性表达患者3年存活率为6 1.11%（33/54），显著低于CMTM6 阴性表达患者8 8.46%（2 3/2 6)x=1.0r0.80.60.20A：含家族成员6 的趋化因子样奇迹跨膜结构域表达与前列腺癌患者生存状况分析；B:大鼠肉瘤蛋白活化因子2表达与前列腺癌患者生存状况分析。2.4Cox回归分析前列腺癌患者预后的影响因素单因素分析结果显示：TNM分期、肿瘤大小、Gleason评分、淋巴结转移、组织分化程度、术前PSA水平、CMTM6 及RASAL2 的表达与前列腺癌患者表3Cox回归分析前列腺癌患者预后的影响因素项目年龄TNM分期肿瘤大小Gleason 评分淋巴结转移组织分化程度0=中低分化，1=高分化术前PSA水平0=20 ng/mL,1=20 ng/mLCMTM60=阴性,1=阳性RASAL20=阴性,1=阳性CMTM6：含家族成员6 的趋化因子样奇迹跨膜结构域；RASAL2：大鼠肉瘤蛋白活化因子2;PSA：前列腺特异性抗原。3 讨 论前列腺癌是由前列腺上皮细胞恶性增生引起的恶性肿瘤，随着老龄化进程的日渐加剧及人们生活方式的改变,其发病率呈逐年上升趋势7。前列腺癌在全球范围内的发病率在男性恶性肿瘤中仅次于肺癌，居第2 位，在我国的发病率位居泌尿系统肿瘤第1位，对男性身心健康产生严重威胁8-9。因此，探寻早期诊断前列腺癌的可靠生物学标志物对提高患者的治疗效果、改善患者预后至关重要。CMTM6为CMTM超家族成员之一，广泛表达于免疫器官，可通过激活和趋化免疫细胞进而对肿瘤细胞的增殖和侵袭产生影响，同时在跨膜蛋白和分泌2024年3月第2 9 卷第3期一阴性表达一阳性表达十阴性表达-检剔后十阳性表达-检剔后10.0020.00生存时间/月图2 CMTM6、RA SA L2 表达与前列腺癌患者生存状况分析赋值0=2 cm0=7分,1=7 分0=否,1=是http:/;zgmnwk.cug.top2515.940,P=0.015，图2 AI；RA SA L2 阳性表达患者3年存活率为8 1.58%（31/38），显著高于RASAL2阴性表达患者59.52%（2 5/42），=4.887，P=0.027,图 2 B。1.0r0.8F0.2FP=0.015A30.0040.00HR1.4220.9222.1931.3271.1051.6822.1431.1424.0201.7581.2212.5311.6731.1692.3951.8781.0213.4551.7331.1441.6261.4391.0981.8860.2690.1200.602蛋白转运中发挥重要作用10-11。丁雨等12 的研究显示，CMTM6在肺腺癌组织和癌旁组织中广泛表达，且肺癌组织中CMTM6表达水平显著高于癌旁组织，其表达水平与肺癌患者临床分期和远处转移密切相关。许丹等13的研究显示，CMTM6在结直肠癌组织中呈高表达，且在结直肠癌的发生及恶性进展过程中发挥重要作用。本研究结果显示,CMTM6在前列腺癌组织中的阳性表达率显著高于癌旁组织，提示CMTM6 在前列腺癌组织中表达异常,且与前列腺癌的发生密切相关,这可能与肿瘤激活CMTM6启动免疫逃逸有关14。进一步分析显示，CMTM6阳性表达情况与TNM分期、Gleason评分、淋巴结转移、术前PSA水平密切相关，提示CMTM6可能参与前列腺癌一阴性表达一阳性表达十阴性表达-检剔后十阳性表达-检剔后010.00生存时间/月预后显著相关（P0.05）。C o x 多因素回归分析结果显示：Gleason评分、淋巴结转移、术前PSA水平、CMTM6 及RASAL2的表达是前列腺癌患者预后的独立影响因素（P0.05,表3）。单因素分析95%CI0.1110.0190.0180.0020.0050.0430.0090.0080.001P-0.02720.0030.00多因素分析P值HR1.5340.9722.4221.2600.8801.8041.5291.0682.1891.5251.1082.0992.0210.4329.4511.4141.0191.9621.7811.187 2.6720.2110.0690.64640.0095%CI一P值一0.0660.2070.0200.0100.3710.0380.0050.006252的发展。此外,本研究通过随访发现,CMTM6 阳性表达患者术后3年生存率显著低于阴性表达患者，提示CMTM6的表达情况与前列腺癌患者预后密切相关。进一步多因素 Cox回归分析显示,CMTM6 阳性表达是前列腺癌患者预后的影响因素，提示术后应加强对CMTM6阳性表达患者的临床监测。RASAL2在多种肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用，既可促进肿瘤发生发展，又可抑制肿瘤发生发展15。在肿瘤细胞的增殖分化过程中,大鼠肉瘤(rat sarcoma,RAS)信号通路异常激活，进而参与肿瘤疾病的发展。而RASAL2可使机体的RAS信号通路关闭，进而抑制该途径引起的肿瘤增殖、分化过程15-16。王昭昕等17 的研究显示，在乳腺癌组织中，RASAL2阳性表达显著低于癌旁组织，且与乳腺癌的发生发展密切相关。张莉等18 的研究显示，与癌旁组相比,RASAL2在膀胱肉瘤样癌组织中阳性表达率较低，且参与膀胱肉瘤样癌的进展。本研究结果显示，RASAL2在前列腺癌组织中的阳性表达率显著低于癌旁组织，且其阳性表达情况与TNM分期、Gleason评分、淋巴结转移、术前PSA水平密切相关，提示RASAL2可能参与前列腺癌的发生，并在前列腺癌的进展过程中发挥重要作用。这可能是由于RASAL2在前列腺癌中发挥抑癌作用，当其表达缺失时，促进了前列腺癌的肿瘤形成。此外，前列腺癌RASAL2阳性表达患者3年生存率高于阴性表达患者,提示RASAL2的表达情况与前列腺癌患者预后密切相关。进一步多因素Cox回归分析显示，RASAL2阳性表达是影响前列腺癌患者预后的保护因素，表明通过对前列腺癌患者的RASAL2表达进行监测，可用于预测和评估前列腺癌患者预后。既往研究显示，RASAL2可通过前列腺癌中磷酸酰肌醇1激酶（phosphoinositol1kinase,PI1K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（serine-threonine protein kinase，AKT)信号传导调节细胞周期和细胞周期蛋白D3表达19。CMTM6可通过-烯醇化酶1（enolase-1,ENO1）/A K T/糖原合成酶激酶3（g ly c o g e nsynthase kinase 3,GSK-3)轴介导口腔鳞状细胞癌中顺铂耐药性2 0，但二者在前列腺癌中是否存在信号通路的交联目前尚不明确。综上所述,在前列腺癌组织中,CMTM6 阳性表达率显著高于癌旁组织，RASAL2阳性表达率显著低于癌旁组织，且二者与前列腺癌的发生发展及预后密切相关，为临床医生评估前列腺癌患者预后提供临床参考依据。本研究为回顾性分析，纳人样本数较少，且未深人探究二者在前列腺癌中的相互作用，后续可增加样本量进行深人研究。J Mod Urol,Vol.29 No.3 Mar.2024参考文献：1 SIEGEL RL,MILLER KD,WAGLE NS,et al.Cancer statistics,2023JJ.CA Cancer J Clin,2023,73(1):17-48.2J WANG G,ZHAO D,SPRING DJ,et al.Genetics and biology ofprostate cancerJ.Genes Dev,2018,32(17-18):1105-1140.3骆杨，班德文，何婷玉，等.p63、34E12和S-100在前列腺穿刺活检组织中的表达及其对前列腺癌的诊断价值.临床泌尿外科杂志，2 0 2 0,35（9）：7 2 1-7 2 4.4J HUANG X,LIU W,LIU C,et al.CMTM6 as a candidate riskgene for cervical cancer:comprehensive bioinformatics studyLJJ.FrontMolBiosci,2022,9:983410.5J YOKOTA K,TANAKA Y,HARADA H,et al.WiNTRLINC1/ASCL2/c-Myc axis characteristics of colon cancer with differen-tiated histology at young onset and essential for cell viabilityJJ.Ann Surg Oncol,2019,26(13):4826-4834.6 肖雅楠，邵园，舒震宇.磁共振纹理分析技术在评估前列腺癌侵袭性中的应用价值J.医学影像学杂志，2 0 19，2 9（7）：119 8-12 0 2.7 雷玉，杨代俊.前列腺癌组织中GCDFP15、Ca l p o n i n 表达与患者临床病理特征和预后的关系J.中外医学研究，2 0 2 3,2 1(4）：6 4-6 8.8J MORGAN 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