如何分析琼脂糖凝胶电泳图.doc

(完整版)如何分析琼脂糖凝胶电泳图
凝胶电泳结果分析
常见问题
原因
对策
DNA条带模糊
DNA降解
实验过程中应避免核酸酶污染。

电泳缓冲液陈旧
电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低，PH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果.TBE建议使用10就更换。

所用电泳条件不合适
电泳时电压不应超过20V/cm，温度〈30℃，巨大DNA链电泳, 温度<15℃,检查所用电泳缓冲液的缓冲能力，注意经常更换。

DNA上样量过多
减少凝胶中DNA上样量

DNA含盐过高
电泳前通过乙醇沉淀去除多余盐分。

有蛋白污染
电泳前酚抽提去除蛋白。

DNA变性
电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀
释DNA.
出现片状拖带或涂抹带
PCR扩增时出现涂抹带、片状带或地毯样带，往往由于酶量多或者酶的质量差，dNTP浓度高，Mg2+浓度高，退火温度过低，循环次数多.
减少酶量或更换酶，减少dNTP浓度，适当降低Mg2+浓度，增加模板量,减少循环次数。
不规则DNA带迁移
电泳条件不合适
电泳时电压不应超过20V/cm，温度<30℃,巨大DNA链电泳， 温度<15℃，检查所用电泳缓冲液的缓冲能力，注意经常更换。

DNA变性
电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀
释DNA。
带弱或无DNA带
DNA上样量不够
增加DNA上样量，聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度高,上样量可适当降低。

DNA降解
实验过程中应避免核酸酶污染。

DNA跑出凝胶
缩短电泳时间，降低电压，增加凝胶浓度。

EB染色的DNA所用光源不合适
应用短波长（254nm）的紫外光源.
DNA带缺尖
DNA跑出凝胶
缩短电泳时间，降低电压,增加凝胶浓度。

分子大小相近的DNA带不易分辨
增加电泳时间，核准正确凝胶浓度

DNA变性
电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀
释DNA.

DNA链巨大，常规凝胶电泳不合适。
在脉冲凝胶电泳上个分析.
电泳时ladder扭曲
配胶的缓冲液与电泳的缓冲液不是同时配制。
同时配制,电泳缓冲液高出胶的1-2mm即可。

电泳时电压过高
电泳时电压不应超过20V/cm。