如何分析琼脂糖凝胶电泳图.doc

(完整版)如何分析琼脂糖凝胶电泳图凝胶电泳结果分析常见问题原因对策DNA条带模糊DNA降解实验过程中应避免核酸酶污染。电泳缓冲液陈旧电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低，PH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果.TBE建议使用10就更换。所用电泳条件不合适电泳时电压不应超过20V/cm，温度30，巨大DNA链电泳,温度15,检查所用电泳缓冲液的缓冲能力，注意经常更换。DNA上样量过多减少凝胶中DNA上样量DNA含盐过高电泳前通过乙醇沉淀去除多余盐分。有蛋白污染电泳前酚抽提去除蛋白。DNA变性电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA.出现片状拖带或涂抹带PCR扩增时出现涂抹带、片状带或地毯样带，往往由于酶量多或者酶的质量差，dNTP浓度高，Mg2+浓度高，退火温度过低，循环次数多.减少酶量或更换酶，减少dNTP浓度，适当降低Mg2+浓度，增加模板量,减少循环次数。不规则DNA带迁移电泳条件不合适电泳时电压不应超过20V/cm，温度30,巨大DNA链电泳，温度15，检查所用电泳缓冲液的缓冲能力，注意经常更换。DNA变性电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。带弱或无DNA带DNA上样量不够增加DNA上样量，聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度高,上样量可适当降低。DNA降解实验过程中应避免核酸酶污染。DNA跑出凝胶缩短电泳时间，降低电压，增加凝胶浓度。EB染色的DNA所用光源不合适应用短波长（254nm）的紫外光源.DNA带缺尖DNA跑出凝胶缩短电泳时间，降低电压,增加凝胶浓度。分子大小相近的DNA带不易分辨增加电泳时间，核准正确凝胶浓度DNA变性电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA.DNA链巨大，常规凝胶电泳不合适。在脉冲凝胶电泳上个分析.电泳时ladder扭曲配胶的缓冲液与电泳的缓冲液不是同时配制。同时配制,电泳缓冲液高出胶的1-2mm即可。电泳时电压过高电泳时电压不应超过20V/cm。