2012丙型肝炎病毒的生物危害评估报告.docx

丙型肝炎病毒的生物危害评估报告
丙型肝炎病毒的传播与致病
丙型肝炎的传染源主要为急性临床型和无症状的亚临床病人，慢性病人和病毒携带者。一般病人发病前12天，其血液即有感染性，并可带毒12年以上。HCV主要血源传播，国外30-90%输血后肝炎为丙型肝炎，我国输血后肝炎中丙型肝炎占1/3。此外还可通过其他方式如母婴垂直传播，家庭日常接触和性传播等。输入含HCV或HCV-RNA的血浆或血液制品，一般经6-7周潜伏期例急性发病，临床表现全身无力，胃纳差，肝区不适，1/3病人有黄疸，ALT升高，抗HCV抗体阳性。临床丙型肝炎病人50%可发展为慢性肝炎，甚至部分病人会导致肝硬及肝细胞癌。其余约半数病人为自限性，可自动康复。丙型肝炎发病机理仍未十分清楚，当HCV在肝细胞内复制引起肝细胞结构和功能改变或干扰肝细胞蛋白合成，可造成肝细胞变性坏死，表明HCV直接损害肝脏，导致发病起一定作用。但多数学者认为细胞免疫病理反应可能起重要作用，发现丙型肝炎与乙型肝炎一样，其组织浸润细胞以CD3+为主，细胞毒T细胞（TC）特异攻击HCV感染的靶细胞，可引起肝细胞损伤。临床观察资料表明，人感染HCV后所产生的保护性免疫力很差，能再感染不同 ，甚至部分病人会导致肝硬化及肝细胞癌。其余约半数病人为自限性，可自动康复。
结核杆菌通常指结核分枝杆菌和牛分枝杆菌，其中结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是引起人类结核病的主要病原体。
结核分枝杆菌的主要传染途径是经呼吸道传播，由排菌的肺结核病人在咳嗽、喷嚏或大声说话时随呼吸道分泌物排出到空气中，或排菌的肺结核病人随地吐痰通过再生气溶胶(尘埃)，携带结核杆菌，飞扬在空气中，被健康的人吸入后发生感染和发病，因此排菌的肺结核患者(尤其是痰涂片阳性未经治疗者)是结核病的主要传染源。一般结核病患者痰中结核杆菌越多，传播的危险性越大。患者排出的飞沫在1-10微米者，在空气中漂浮时间长，传染性越大。患者病变和症状越严重，传染性也越大。周围人群与患者接触越密切者，受感染的机会越多。与患者同处于空气不流通的室内的密切接触者，受感染的可能性增大。
未受结核感染的人是结核病易感人群，由于结核病是人畜共患病，哺乳类动物如牛、鹿、猴、猪、猫、狗等也都可以患结核病。
感染结核杆菌后，终身都有可能发病，发病时间因人而异，一般2个月～20年才发病。典型肺结核起病缓慢，病程较长，有低热、倦怠、食欲不振、咳嗽及少量咯血。但多数患者病灶轻微，无显著症状。（1）症状　①全身症状　表现为午后低热、乏力、食欲不振、消瘦、盗汗等。②呼吸系统症状　通常为干咳或带少量黏液痰；继发感染时，痰呈粘液脓性。约1/3患者有不同程度咯血，咯血后常有低热。大咯血时可发生失血性休克，偶因血块阻塞大气道引起窒息。病灶炎症累及壁层胸膜时，相应胸壁有刺痛，一般多不剧烈，随呼吸及咳嗽而加重。若并发气胸或大量胸腔积液，呼吸困难症状尤为严重。（2）体征　早期病灶小或位于肺组织深部，多无异常体征。若病变范围较大，患侧肺部呼吸运动减弱，叩诊呈浊音，听诊时呼吸音减低，或为支气管肺泡呼吸音。因肺结核好发于肺上叶尖后段及下叶背段，故锁骨上下、肩胛区叩诊略浊，咳嗽后偶可闻及湿啰音，对诊断有参考意义。肺部病变发生广泛纤维化或胸膜粘连增厚时，患侧胸廓常呈下陷、肋间隙变窄、气管移位与叩浊，对侧可有代偿性肺气肿征。
二、结核杆菌的生物学特性
从分类学上看结核杆菌属于裂殖菌纲、放线菌目、分枝杆菌科、分枝杆菌属。
结核分枝杆菌正常典型的形态是直或稍弯曲、两端钝圆的杆菌，菌体长1-4纳米，宽0.3-0.6纳米，无芽胞、无荚膜、无鞭毛，生长发育期间有分枝生长倾向。镜下常呈单个散在或呈“人、V、T、Y”形排列，菌体多时细菌扭集一起呈绳索状、束状或丛状。此外结核杆菌菌体还具有多形态特征，受不良生长条件的影响可分别表现为杆菌型 (基本形态)、滤过型、颗粒型和球菌型(L型)4种不同的类型。
分枝杆菌生长缓慢，在人工培养基内繁殖一代约需15-20小时，一般需2-4周或更长时间始见菌落生长，甚至有极少数生长极为缓慢者需8周以上才开始有菌落生长。它为专性需氧菌，生长的温度范围是35-40℃，pH 5.5-7.2。培养营养要求较高且特殊，培养基需含鸡蛋、血清、氨基酸、甘油等营养丰富的复杂有机物及少量无机盐类。而且结核杆菌随着环境的改变易发生菌落形态、毒力、L型及药物耐药性变异，如在人工培养基上反复连续传代，可产生变异而致毒力降低。
三、丙型肝炎病毒的检测与诊断
一、实验室检查
　　（一）血常规 急性肝炎初期白细胞总数正常或略高，一般不超过10×109/L，黄疸期白细胞总数正常或稍低，淋巴细胞相对增多，偶可见异型淋巴细胞。重型肝炎时白细胞可升高，红细胞下降，血红蛋白下降。肝炎肝硬化伴脾功能亢进可有血小板、红细胞、白细胞减少的“三少”现象。
　　（二）尿常规 尿胆红素和尿胆原的检测是早期发现肝炎的简易有效方法，同时有助于黄疸的鉴别诊断。肝细胞性黄疸时两者均阳性，溶血性黄疸时以原为主，梗阻性黄疸以尿胆红素为主。深度黄疸或发热患者，尿中除胆红素阳性外，还可出现蛋白质、红、白细胞或管型。
（三）肝功能检查
1、血清酶测定 （1）丙氨酸氨酶（ALT，曾称为谷丙氨酶GPT）：是目前林装上反映肝细胞功能的最常用指标。ALT在肝细胞损伤时释放入血流。血清ALT升高，对肝病诊断的特异性比天冬氨酸氨酶（AST）高，因为其他脏器中ALT含量比AST低得多。急性肝炎时ALT明显升高，AST/ALT常小于1，黄疸出现后ALT开始下降。慢性肝炎和肝硬化时ALT轻度或中度升高或反复异常，AST/ALT常大于1。比值越高，则预后愈差，病程中AST/ALT比值降低，提示未损及肝细胞线粒体，预后较佳。重型肝炎患者可出现ALT快速下降，胆红素不断酶升高、胆分离现象，提示肝细胞大量坏死。（2）天冬氨酸转氨酶（AST，曾称为谷草转氨酶GOT）：此酶在心肌含量最高，依次为肝、骨骼肌、肾、胰。在肝脏，AST80％存在于肝细细胞线粒体中，仅20％在胞浆。在肝病时血清AST升高，与肝病严重程度呈正相关。当病变持久且较严重时，线粒体中AST释放入血流，其值可明显升高。急性肝炎时如果AST持续在高水平，有转为慢性肝炎的可能。心肌其其他脏器细胞受损时，AST亦升高，应予以鉴别，以免此类疾病被肝炎症状所掩盖。（3）乳酸脱氢酶（LDH）：肝病时可显著升高，但肌病时亦可升高，须配合临床加以鉴别。（4）Y谷氨酰胎酶（Y—GT）：肝炎和肝癌患者可显著升高，在胆管阻塞的情况下更明显，YGT活性变化与肝病病理改变有良好的一致性。（5）胆碱酯酶：由肝细胞合成，其活性降低提示肝细胞已有较明显损伤，其值愈低，提示病情愈重。（6）碱性磷酸酶（ALP或AKP）：正常人血清中ALT主要来源于肝和骨组织，ALP测定主要用于肝病和骨病的临床诊断。当肝内或肝外胆汁排泄受阻时，组织表达的ALP不能排出体而回流入血，导致血清ALP活性升高。 2、血清蛋白 主要由比蛋白（A），α1、α2、β及Y球蛋白组成。前4种主要由肝细胞合成，Y球蛋白主要由浆细胞合成。在急性肝炎时，由于白蛋白半衰期较长，约21天，以及肝脏的代偿功能，血清蛋白质和量可在正常范围内。慢性肝炎中度以上、肝硬化、重型肝炎时出现白蛋白下降，Y球蛋白升高，白/球（A/G）比例下降甚至倒置。血清蛋白电泳分析则从另一角度来检测白、球蛋白各成份的相对比值，起到相同的诊断作用。
　　3、胆红素 急性或慢性黄疸型肝炎时血清胆红素升高，活动性肝硬化亦可升高且消退缓慢，重型肝炎常超过171vmol/L。一般情况下，肝损程度与胆红素含量呈正相关。直接胆红素在总胆红素中的比例尚可反映淤胆程度。
　　4、凝血酶原活动度（PTA） PTA高低与肝损程度成反比。＜40％是诊断重型肝炎的重要依据，亦是判断重型肝炎预后的敏感指标。
　　5、血氨 肝衰竭时氨的能力减退或丧失导致血氨升高，常见于重型肝炎。肝性脑病患者。
（四）其他生化指标检测
　　1、电解质 重型肝炎常见低K＋、低Na＋、低CI－，亦可有低Ca2＋、低Mg2＋ 、低P2－等。肝肾综合征时可出现高K＋。
　　2、血糖 超过40％的重型肝炎患者有血糖降低。临床上应注意低血糖昏迷与肝性脑病的鉴别。
　　3、血浆胆固醇 60％—80％的血浆胆固醇来自肝脏。肝细胞严重损伤时，胆固醇在肝内合成减少，故血浆胆固醇明显下降，胆固醇愈低，预后愈险恶。梗阻性黄疸时胆固醇升高。
　　4、补体 当肝细胞严重损害时，补体合成减少。临床简则CH50和C3补体对预后有评估作用。
　　5、甲胎蛋白（AFP） HBV和HCV感染与HCC的发生有明显相关性，AFP含量的检测是率选和早期诊断HCC的常规方法。肝炎活动、肝细胞癌变和肝细胞修复时，AFP均有不同程度的升高，应进行动态观察。急性重型肝炎AFP升高时，提示有肝细胞再生，为预后良好的标志。 6、胆汁酸 血清中胆汁含量很低，当肝炎活动时胆汁酸升高。由于肝脏对胆红素和胆汁酸的运转活动不同，检测胆汁酸有助于鉴别胆汁淤积和高胆红素血症。
　　（五）肝纤维化指标一些检测项目已在临床上应用，如3型较胶原体，4型胶原、层连蛋白、透明质酸、脯氨酰羟化酶等，对肝纤维化的诊断有一定参考价值，但缺乏特异性。
（六）病原学检查 （1）抗HCV IgM和抗HCV IgG：HCV抗体不是保护性抗体，HCV感染的标志。HCV Igm阳性提示现症HCV感染，抗HCV IgG阳性提示现正感染或既往感染。抗HCV IgM的检测受较多因素的影响，如球蛋白、RF等，稳定性不如抗HCV IgG。目前国内多用酶免疫试验（EIA）检测抗HCV IgG，试剂质量与国外第三代诊断试剂持平。抗HCV IgG低滴度提示病毒处于静止，高滴度提示病毒复制活跃 （2）HCV RNA：HCV在血液中含量很少，分子杂交甚至一次性PCR均难以检出HCV RNA，常采用套式PCR以提高检出率。由于影响因素较多及技术要求较高易产生假阳性和假阴性，分析结果时应结合临床做出正确判断。HC RNA阳性是病毒感染和复制的直接标志。HCV RNA亦可定量，方法包括b五DNA探针技术、竞争PCR法、荧光定量法等，定量测定有助于了解病毒复制程度、抗病毒治疗的选择及疗效评估等。对HCV RNA尚可进行基因分型，方法包括序列测定、PCR、酶切、探针杂交等，基因分型在流行病学和抗病毒治疗等方法有一定意义，但不作为常规。
　　组织中HCV标志物的检测基本同HBV，可检测HCV抗原及HCV RNA，一般单位难开展此项目。
　　（七）影像学检查 B型超声有助于鉴别阻塞性黄疸、脂肪肝及肝内占位性病变。对肝硬化有较高的诊断价值，能够反映肝脏表面变化，门静脉、脾静脉直径，脾脏大小，胆囊异常变化，腹水等。彩色超声尚未可观察到血流变化。在重型肝炎中可动态观察肝脏大小变化等。CT、MRI的应用价值基本同B超，但价格较昂贵，且有不同程度的损伤性，如应用增强剂，可加重病情。（八）肝组织病理检查 是明确诊断、衡量炎症活动度、纤维化程度及评估疗效的金标准。还可在肝组织中原位检测病毒抗原或核酸，以助确定病毒复制状态。
　　二、诊断
　　（一）流行病学资料 有输血及血制品、静脉吸毒、血液透析、多个性伴侣、怀孕或哺乳期母亲HCV感染等病史的肝炎患者应怀疑丙型肝炎。
　　（二）临床诊断
　　1、急性肝炎 起病较急，常有畏寒、发热、乏力、头痛、纳差、恶心、呕吐等急性感染或黄疸前期症状。肝大质偏软，ALT显著升高。黄疸型肝炎血清胆红素＞17.1umol/L，尿胆红素阳性。黄疸型肝炎的黄疸前期、黄疸期、恢复期三期经过明显，病程6个月以内。
　　2、慢性肝炎 病程超过半年或发病日期不明确而有慢性肝炎症状、体征、实验室检查改变者。常有乏力、厌油、肝区不适等症状，可有肝病面容、肝掌、痴、胸前毛系血管扩张、肝大质偏硬、脾大等体征。根据病情轻重，实验室指标改变（表3—1—2）综合评定轻、中、重三度。
3、重型肝炎 主要有：极度疲乏；严重消化道症状如频繁呕吐、呃逆；黄疸迅速加深出现胆酶分离现象；肝脏进行性缩小；出血倾向，PTA＜40％，皮肤、粘膜出血；出现肝性脑病，肝肾综合征，腹水等严重并发症。急性黄疸肝炎病情迅速恶化，2周内出现Ⅱ度以上肝性脑病或其他重型肝炎表现者，为急性重型肝炎；15天至20周出现上述表现者为性肝炎病史。乏力，腹胀，尿少，肝掌，痴，脾大，腹水，脚肿，胃底食管下段静脉曲张，白蛋白下降，A/G倒置等肝功能受损和门脉高压表现。
　　（三）病原学诊断 丙型肝炎具备急、慢性肝炎临床表现，抗HCV 阳性或HCV RNA 阳性，可诊断为丙型肝炎。无任何症状和体征，肝功能和肝组织学正常者为无症状HCV携带者。
　　三、预后
　　1、急性肝炎 多数患者在3个月内临床康复。急性丙型肝炎50％—80％转为慢性或病毒携带。
　　2、慢性肝炎 轻度慢性肝炎患者一般预后良好；重度慢性肝炎预后较差，约80％五年内发展成肝硬化，少部分可转为HCC，病死率高达45％。中度慢性肝炎预后居于轻度和重度之间。慢性丙型肝炎预后较乙型肝炎好。
　　3、重型肝炎 预后不良，病死率50％—70％。年龄较小、治疗及时、无并发症病死率较低。急性重要型肝炎存活者，远期预后较好多不发展为慢性肝炎和肝硬化；亚急性重型肝炎存活者多数转为慢性肝炎或肝炎后肝硬化；慢性重型肝炎病死率最高，可达80％以上，存活者病情可多次反复。
　　4、淤胆型肝炎 急性者预后较好，一般都能康复。慢性者预后较差，容易发展成胆汁性肝硬化。
　　5、肝炎后肝硬化 静止性肝硬化可较长时间维持生命。活动性肝硬化预后不良。
（1）细菌的实验室检查及其它检查
① 结核菌检查　是确诊肺结核最特异性的方法，痰中找到结核菌为确诊肺结核的主要依据。涂片抗酸染色镜检快速简便。在我国非典型分枝杆菌尚属少见，故抗酸杆菌阳性，肺结核诊断基本即可成立。痰菌阳性表明其病灶是开放性的，具有传染性。培养法更为精确，尚可作药物敏感试验与菌型鉴定。但结核菌生长缓慢，培养较为费时，但精确可靠，特异性高。若涂片阴性或诊断有疑问时，培养尤其重要；而且，培养后可做药物敏感性测定，指导临床用药。PCR技术检测结核菌 DNA快速、简便，并可鉴定菌型，不足之处是可能出现假阳性或假阴性。
② 影像学检查　胸部X线检查可以发现肺内病变的部位、范围、有无空洞或空洞大小、洞壁厚薄等。X线对各类结核病的透过度不同，通过X线检查能大致估计结核病灶的病理性质，并能早期发现肺结核，以及判断病情发展及治疗效果，有助于决定治疗方案。肺结核的常见X线表现包括：纤维钙化的硬结病灶、浸润性病灶以及干酪样病灶等。胸部CT检查对于发现微小或隐蔽性病变，了解病变范围及病变鉴别等方面均有帮助。
③ 结核菌素试验　是诊断结核感染的参考指标。使用的变应原有旧结核菌素（old tuberculin, OT）和结核菌素的纯化蛋白衍化物（purified protein derivative, PPD），现临床多用PPD。皮内注射0.1ml（5IU），硬结平均直径≥5mm为阳性反应。结核菌素试验有助于判断有无结核菌感染。若呈强阳性反应，常表示为活动性结核病。结核菌素试验阳性反应仅表示曾有结核感染，并不一定现在患病。结核菌素试验阴性反应除表示没有结核菌感染外，尚需考虑以下情况：结核菌在感染4～8周后才建立充分变态反应，在这之前，结核菌素试验可呈阴性；应用糖皮质激素等免疫抑制剂，或营养不良、麻疹、百日咳等患者，结核菌素反应亦可暂时消失。
④ 其它检查　结核病患者血像通常无改变，严重病例常有继发性贫血，急性粟粒型肺结核时白细胞总数减低或出现类白血病反应。血沉增快常见于活动性肺结核。用ELISA法检测患者血清中特异性抗体，可对无痰或痰菌阴性者和肺外结核的诊断提供参考。纤支镜检查对于发现气管内膜结核、了解有无肿瘤、吸取分泌物、解除阻塞或作病原菌及脱落细胞检查，以及取活组织作病理检查等，均有重要诊断价值。浅表淋巴结活检，有助于结核的鉴别诊断。
（2）诊断和鉴别诊断　
痰结核菌检查不仅是诊断肺结核的主要依据，亦是考核疗效、随访病情的重要指标。X线检查是诊断肺结核的必要手段，对早期诊断、确定病变部位、范围、性质、了解其演变及选择治疗等均具有重要价值。在临床诊断中，我国现用的分类法包括四部分，即肺结核类型、病变范围及空洞部位、痰菌检查、活动性及转归。肺结核分为五型：Ⅰ型为原发型肺结核；Ⅱ型为血行播散型肺结核；Ⅲ型为浸润型肺结核；Ⅳ型为慢性纤维空洞型肺结核；Ⅴ型为结核性胸膜炎。还应注意将结核病与肺癌、肺炎、支气管扩张、慢性支气管哮喘和其它发热性疾病如伤寒、败血症、白血病、纵隔淋巴瘤及结节病等进行鉴别。
四、结核杆菌的防治及生物安全防护
细菌的防治
根据《中华人民共和国传染病防治法》和《实验室生物安全通用要求》中的有关规定，结核病属于乙类传染病，按照乙类传染病进行预防控制。
在结核病的预防方面要针对传染源、传播途径、易感人群三个环节，采取以管理和控制传染源为主的综合性防治措施，努力做到“早发现、早报告、早治疗”，以利于控制和管理传染源。临床上肺结核化学治疗的原则是早期、规律、全程、适量、联合。整个治疗方案分强化和巩固两个阶段。我国结核病防治规划指南规定采用统一标准的化学治疗方案。
表1　国家防痨规划的结核病化疗方案
疗程 化疗方案
6个月 2RHZ/4RH
2ERHZ/4RH或4R2H2
2SRHZ/4RH或4R2H2
8个月 2SRHZ/6TH或6EH
2SRHZ/6S2H2Z2
R代表利福平，H代表异烟肼，Z代表吡嗪酰胺，E代表乙胺丁醇，S代表链霉素，T代表丙硫异烟胺。下标数字表示每日用药次数；其余数字表示用药月数，斜线前数字表示前2个月，斜线后字表示后几个月。
对复治病例，一般可用以下几种方案：① 2S(E)RHZ/4RH(E)，督促化疗，保证规律用药。② 初治规则治疗失败的患者，可用2S3H3Z3E3/6H3R3E3；③ 慢性排菌者可用敏感的一线药与二线药联用，应严密观察药物不良反应，疗程以6～12个月为宜。
对毒性症状严重者，可加用糖皮质激素，以减轻炎症及过敏反应，促进渗液吸收，减少纤维组织形成及胸膜粘连。对咯血患者，应对症治疗，包括休息、止咳、镇静以及应用止血药如安络血等。
五、细菌的实验室安全防护
根据《病原微生物生物实验室生物安全管理条例》中的有关规定，人间传播的微生物名录（待颁布）结核杆菌属于二类，BSL-3。WHO将结核杆菌生物危害等级定为Ⅲ级。所有参与结核杆菌防治和研究的实验室和实验室人员都必须遵守《结核病实验室生物安全管理条例》和《结核病诊断实验室检验规程》。
（1）安全防护
大多数实验室获得性结核病是由于处理感染者标本引起——可从痰、尿、组织、大便和其它体液标本中分离到结核杆菌。处理标本或培养物时产生气溶胶是实验室获得性结核病的最重要危险因素，也可通过损伤的皮肤接触感染。因此首先应树立全程防护的观念，全面加强从事结核杆菌科研、检测、试剂和疫苗生产机构的生物安全管理。严格限定有资质开展研究的实验室和研究者。建立健全传染病病原管理组织；制订和完善传染病实验室生物安全的技术操作规范；加强可能暴露于结核杆菌或潜在感染性材料的相关业务人员生物安全知识培训和风险和意识教育；切实落实各项管理制度，预防和控制实验室等渠道造成结核杆菌感染和传播；加强部门间沟通与合作，加强对高暴露实验室工作人员的监测工作，并保证他们能及时被发现与治疗。当进行大量活菌实验时，所有操作应在BSL-3级实验室生物安全柜中进行。为防止实验过程产生的气溶胶导致的实验室感染，所有操作应使用三级生物安全防护。在具体的操作过程中包括标本留取、运送、处理以及废物处置等程序都应防止感染性气溶胶的产生。病人留取标本应在独立的房间，应定时作好房间消毒，保持通风。标本应留取在封闭的器皿内送检。检验人员应穿戴防护服、口罩、手套等防护装备，严格遵守实验操作规程，实验室空气、实验台面应定时消毒。痰、尿标本找抗酸杆菌，应先高压灭菌后，再涂片染色。尤其是痰标本进行涂片制作时，在打开标本容器、涂片、加热固定时容易产生气溶胶，为防止实验过程中产生的气溶胶导致实验室感染，所有操作应在二级生物安全柜中进行，并使用二级生物安全防护。痰标本培养时，在标本进行前处理高速振荡混合和离心、培养液或上清液的倾倒、转移和接种等操作过程有产生气溶胶和意外溅洒的可能，为防止实验过程中产生的气溶胶等导致实验室感染，所有操作应在二级生物安全柜中进行，并使用二级生物安全防护。药物敏感性测定时，在磨菌、滴加菌液、接种培养物、烧灼接种环等操作过程有产生气溶胶和意外溅洒的可能，实验者有可能直接大剂量暴露细菌。因此该项操作一定在BSL-3级实验室完成，且最好实验室内要有负压。并且操作者着二级生物防护用品。
（2）意外事故的处理
结核杆菌的灭活方式有化学的和物理的方法。实验过程中：
1)如标本或标本的前消化处理液被打翻污染操作台或地面，应以吸满75%已乙醇溶液的卫生纸覆盖污染区，15分钟以后卫生纸方可移去；
2)如污染物溅落到身体表面，或有割伤、刺伤、烧伤、烫伤等情况发生，应立即停止实验工作进行紧急处理：更换被污染的实验服装，皮肤表面用消毒液清洗，伤口以碘酒及酒精消毒，眼睛用无菌生理盐水冲洗；
3)如果发生菌液溢出、带菌的培养管破碎等，造成中、小面积污染。可用比污染面积大25%以上的纱布覆盖污染区域，边缘用脱脂棉围住，向纱布倾倒5%苯酚溶液或75%的乙醇溶液，浸泡2小时以上(其间适量添加溶液防止干燥)，再经紫外灯近距离(1米内)照射2小时以上；被污染的器械、容器等立即浸泡于75%乙醇溶液中2小时以上，实验完成后再进行高压消毒处理；
4)如果发生气溶胶污染或大面积污染，应立即停止实验并关闭实验室，对实验区域和实验室进行紫外灯照射消毒过夜；第二天对污染区域进行24小时封闭空气熏蒸消毒(乙醛消毒法：5ml乙醛+2g高锰酸钾/平方米空间)，直接被污染的区域可参照第3)条进行处理。
5）立即报告负责人。启动报告程序。
（3）实验室人员的防护
从事结核杆菌检测、研究的实验室工作人员必须在身体状况良好的情况下，才能进入实验室工作，出现下列情况，不能进入：身体出现开放性损伤；患发热性疾病；感冒、上呼吸道感染、或其他导致抵抗力下降的情况；妊娠、已经在实验室控制区域内连续工作4h以上，或其他原因造成的疲劳状态。
从事结核杆菌检测工作人员可间隔数年接种卡介苗一次。若操作者或其所在实验室的工作人员在此期间出现与被操作病原微生物导致疾病类似的症状或者体征时，例如发热、盗汗、咳嗽、咳痰、咯血或痰中带血等症状，则应被视为可能发生实验室感染。应立即报告实验室负责人，采取早发现、早报告、早治疗以控制管理传染源为主的综合性防治措施。
六、实验室实验活动危害评估
详细风险评估附表
七、评估结论
所有参与结核杆菌防治和研究的实验室和实验室人员都必须遵守《结核病实验室生物安全管理条例》和《结核病诊断实验室检验规程》。在进行实验活动时应严格按照实验室生物安全防护要求操作，实验室技术人员经初审具备进行相关的实验活动的资格。
结核分枝杆菌实验室活动风险评估表
                                        危害  发生  固有  措施  残留
潜在危险                           程度  可能  风险  合理  风险  备注
                                                         性     性

1．  实验样品的接收与开启
（1）运输中容器可能破碎                中度  可能  中度   很好  低
（2）冻干菌株开启时产生气溶胶          低度  较少  低度   很好  低
2．  实验样品涂片
（1） 固定、染色时产生气溶胶           中度  可能  中度   合理  中
3．  接种培养
（1）试管开封、样品转移、混合等产生气溶胶    中度  较大  中度   合理  中
（2）培养物制剂溅出、泼洒、容器破碎等污染    高度  可能  高度   合理  高
4．  菌株攻击
（1）样品稀释混匀可能产生气溶胶        中度  较大  中度   合理  中
（2）含活菌的玻璃器皿破损产生气溶胶    高度  可能  高度   合理  高
（3）注射器的误伤而造成血液传播        高度  可能  高度   合理  高
（4）针头突然脱落或拔出时的气溶胶      中度  较大  中度   合理  中
5．  实验仪器设备
（1）离心机等使用过程产生的气溶胶     高度  可能  高度   合理  高
（2）容器的破碎、倾洒造成污染         高度  可能  高度   合理  高
（3）检测未经灭活样品对仪器环境造成污染     中度 很可能 中度   合理  中
6．  培养物、实验废弃物的销毁
（1）转移过程培养物的溅出、泼洒污染    高度  可能  高度   合理  高
（2）转移过程培养物容器破碎造成污染    中度 很可能 中度   合理  中
（3）外表污染废弃物容器转移造成污染    中度 很可能 中度   合理  中
（4）高压灭菌装置灭菌不彻底造成污染    高度  可能  高度   合理  高
7．  室内空气、实验用品、操作台面污染
（1）对室内空气、用品及操作台面污染    中度 很可能 中度   合理  中
8．  个人防护装备
（1）手污染造成感染性物质的食入        中度  可能  中度   合理  中
（2）与皮肤和眼睛的接触感染            中度  可能  中度   合理  中
（3）原始记录未消毒造成污染            中度  可能  中度   合理  中
（4）个人防护装备未彻底消毒造成污染    中度  可能  中度   合理  中

评估人：                    批准人：       评估日期：2012年8月30日