实验室生物安全统一标准操作作业规程.doc

实验室生物安全原则操作规程HYEY-PGC-（第三版） 1月11日发布 1月20日实行怀远县第二人民医院实验室生物安全原则操作规程（SOP）HYEY-PGC-修 订 表第 1 页 共 1 页第3版 第 0 次 修订 1月 11日发布/1月20日实行修 订 表版 号规程号修订顺序修 订 内 容批 准日 期实验室生物安全原则操作规程（SOP）HYEY-PGC-目 录第 1 页 共 1 页第3 版 第 0 次 修订 1月 11日发布/1月20日实行目 录HYEY-PGC01-实验室人员进出实验室HYEY-PGC02-实验室检测样品采集HYEY-PGC03-实验室检测样品包装和运送HYEY-PGC04-实验室检测样品接受HYEY-PGC05-样品检测操作规程HYEY-PGC06-电气设备操作规程HYEY-PGC07-实验室消毒剂配制原则操作规程HYEY-PGC08-无菌间使用原则操作规程HYEY-PGC09-实验室废弃物解决原则操作规程HYEY-PGC10-实验室消毒原则操作程序HYEY-PGC11-实验室意外事故解决实验室生物安全原则操作规程（SOP）HYEY-PGC01-检查科实验室人员进出实验室第 1 页 共 1 页第3版 第 0 次 修订2 1月 11日发布/1月20日实行1 目制定检查科实验室人员进出原则操作程序，保障实验室生物安全。2 合用范畴合用于检查科实验室人员进出程序。3 职责实验室工作人员执行本程序规定。实验室负责人负责监督执行。4 规程规定4.1进入程序实验室人员需将外衣挂入（避免将外衣与工作服混放），穿上工作服，按规定戴手套、口罩等防护用品方可进入实验室。4.2 退出程序工作结束后，实验室人员在实验室将一次性口罩、手套、鞋套等放入指定容器。先用0.5%新洁尔灭对手进行消毒，再用消毒肥皂洗手。在指定区域脱下工作服，必要时进行紫外消毒。实验室人员退出实验室后，必要将实验室入口门关好，方可离开实验室。实验室生物安全原则操作规程（SOP）HYEY-PGC02-实验室检测样品采集第 1 页 共 4 页第3版 第 0 次 修订 1月 11日发布/1月20日实行1 目为保障检测实验顺利进行，规范采样程序，防止病原微生物在实验室采样过程中产生污染。2 合用范畴合用于实验室内采集、解决动物样品。3 职责3.1 采集检测样品工作人员在采集过程中应当防止病原扩散，并对样本来源、采集过程和解决办法等作详细记录。3.2 检查人员必要严格按照本操作规程操作，不可擅自做出超过本规程操作，所有实验人员对所从事工作负相应责任。4 过程规定4.1 工作条件4.1.1 具备采集、解决样品所需要生物安全防护设备；4.1.2 具备掌握有关专业知识和操作技能工作人员；4.1.3 具备有效防止病原扩散办法；4.1.4 具备保证检测样品质量技术办法和手段。4.2实验材料准备灭菌解剖器械（剪刀、镊子、手术刀、大刀、斧头等）、灭菌试管、平皿或自封袋、载玻片、棉签、营养肉汤、30%、50%甘油盐水缓冲液、加抗生素PBS（病毒保存液）、50甘油磷酸盐缓冲液、酒精灯、灭菌注射器、15mL离心管、1.5mLEP管、记号笔、签字笔、防护服、无粉乳胶手套、防护口罩、铅笔、空白标签纸、胶布、75%酒精棉球、碘酒棉球、冰袋、冷藏容器、消毒药物、采样单等。4.3 活畜样品采集4.3.1 血清样品采集实验室生物安全原则操作规程（SOP）HYEY-PGC03-实验室检测样品采集第 2 页 共 4 页第3版 第 0 次 修订 1月 11日发布/1月20日实行4.3.1.1 采血办法对采血部位皮肤先剃（拔）毛，碘酊消毒， 75%酒精消毒，待干燥后采血。采血办法履行生猪站立式前腔静脉、牛羊站立式颈静脉、禽类翅静脉采血，采血过程严格无菌。4.3.1.2 采血数量单一病种抗体监测每头（只）采集23mL全血，多病种抗体检测每头（只）采集510mL全血。4.3.1.3 全血保存采集好全血转入盛血试管，斜面存储，室温凝固后直接放在盛有冰块保温箱，送实验室。从全血采出到血清分出时间不超过10h。4.3.1.4 血清分离 凝固全血在室温24h后，有血清析出时，用无菌针剥离血凝块，然后放入4冰箱48h后，待大量血清析出时，吸出血清。必要时经离心机3000rpm 、30min离心，吸出血清。分离血清，普通不加防腐剂。血清若在12周内即可检查，可放在4冰箱内保存；如果保存时间较长，应放在-20-80冰箱内保存。运送血清时可将血清放在盛有冰块保温箱中运送。4.3.2 全血样品采集 全血采集后应直接注入盛有抗凝剂试管中，及时摇动，充分混合。也可将全血液注入盛有玻璃珠灭菌瓶中，及时持续振荡脱纤维蛋白。4.4 活禽样品采集咽喉拭子采集：将棉签插入喉头口及上颚裂处来回刮35次取咽喉分泌液，泄殖腔拭子采集：将棉签插入取泄殖腔转23圈并沾取少量粪便，再将咽喉拭子、泄殖腔拭子一并放入盛有0.81.0mL加有抗生素PBSEP管中，加盖，编号。4.5 病死（屠宰）畜禽样品采集4.5.1 解剖前检查实验室生物安全原则操作规程（SOP）HYEY-PGC03-实验室检测样品采集第 3 页 共 4 页第3版 第 0 次 修订 1月 11日发布/1月20日实行急性死亡牛、羊、猪、马等动物，解剖之前应作临床检查，疑似炭疽病应采血、镜检，排除炭疽病时，方可解剖。动物死亡后应在6h内进行剖检。解剖人员要做好自我防护工作。4.5.2 肝、脾、肾、淋巴结、肺和牛、马心脏样品采集 在肝、脾、肾、淋巴结、肺和牛、马心脏有病变部位各采用23cm3小方块，分别置于灭菌试管或平皿中。其她畜禽采集整个心脏，置于自封袋中。细菌分离样品采集可用烧红刀片烫烙脏器表面，在烧烙部位刺一孔，用灭菌后铂金耳伸入孔内，取少量组织或液体，作涂片镜检或划线接种于适当培养基上。4.5.3 脑、脊髓样品采集取脑、脊髓23cm3浸入50%甘油盐水中或将整个头部（猪、牛、马除外）割下，用消毒纱布包裹，置于不漏水容器中。4.5.4 肠、肠内容物及粪便样品采集肠样品采集：选取病变最严重某些，将其中内容物弃去，用灭菌生理盐水轻轻冲洗后，置于试管中。肠内容物样品采集：烧烙肠壁表面，用吸管扎穿肠壁，从肠腔内吸取肠内容物，放入盛有30%甘油盐水中或者直接将带有粪便肠管两端结扎，从两端剪断。粪便样品采集：用棉签插到直肠黏膜表面采集粪便，然后将拭子放入盛有30%甘油盐水中。4.5.5液体病料样品采集采集胆汁、脓、粘液、关节液、水泡液等样品时，用药物或烫烙法消毒采样部位，用灭菌吸管（毛细吸管、注射器）经消毒部位插入，吸取内部液体，然后将病料注入灭菌试管中，加盖。也可用接种环经消毒部位插入，提取病料直接接种在培养基上。4.5.6 胎儿样品采集取流产后整个胎儿，装入自封袋或不透水塑料薄膜中。4.5.7 皮肤样品采集 用清水清洗病变皮肤后，取病变皮肤35g放入灭菌小瓶中，加适量50甘油磷实验室生物安全原则操作规程（SOP）HYEY-PGC03-实验室检测样品采集第 4 页 共 4 页第3版 第 0 次 修订 1月 11日发布/1月20日实行酸盐缓冲液(pH7.4)，加盖密封。4.5.8 死（屠宰）禽样品采集死（屠宰）禽样品采集除按上述办法采集，也可将整个死禽装入不透水塑料薄膜袋或自封袋中或其她容器内。4.6 组织样品采集完后无害化解决活畜禽、病死畜禽组织样品采集完后，应做好样品外包装和环境消毒以及病死畜禽及其产品无害化解决。4.7 样品编号、抽样单填写4.7.1 样品编号每头动物不同部位组织样品应单独包装。包装好后，在样品袋或平皿外贴上标签，标签注明样品名、样品编号、采样日期等。采集好不同部位样品后，同一动物样品集中包装。4.7.2 采样单填写可依照详细规定填写。实验室生物安全原则操作规程（SOP）HYEY-PGC03-实验室检测样品包装和运送第 1 页 共 2 页第3版 第 0 次 修订 1月 11日发布/1月20日实行1 目维护检测样品质量，防止病原泄漏和扩散，保障样品检测顺利开展。2 合用范畴合用于检测样品包装和运送。3 职责3.1 操作者必要严格按照本程序操作，不可擅自做出超过本程序操作，所有实验人员对所从事工作负相应责任。3.2实验室负责人负有对样品包装、运送监督和管理职责，并监督检查有关工作人员安全工作程序和行为。4 过程规定拟运送样品，规定严密包装，外表加以消毒，编号、登记后，贴上“生物危险”标记，并严防标记脱落。样品必要经三层包装。4.1 样品包装4.1.1 内包装4.1.1.1 必要是不透水、防泄漏主容器，保证完全密封。4.1.1.2 必要是结实、不透水和防泄漏辅助包装。4.1.1.3 必要在主容器和辅助包装之间填充吸附材料。吸附材料必要充分，可以吸取所有内装物。各种主容器装入一种辅助包装时，必要将它们分别包装。4.1.1.4 主容器表面贴上标签，注明样品类别、编号、名称、数量等信息。4.1.1.5 有关文献，例如毒种或样本数量表格、危险性声明、信件、毒种或样本鉴定资料、发送者和接受者信息等应当放入一种防水袋中，并贴在辅助包装外面。4.1.2 外包装4.1.2.1 外包装强度应当充分满足对于其容器、重量及预期使用方式规定。4.1.2.2 外包装应当印上生物危险标记。实验室生物安全原则操作规程（SOP）HYEY-PGC03-实验室检测样品包装和运送第 2 页 共 2 页第3版 第 0 次 修订 1月 11日发布/1月20日实行4.1.3 包装规定4.1.3.1 液体或者固体样品在辅助包装周边必要放置冰、干冰或者其她冷冻剂，或者按照规定将冷冻剂放在由一种或者各种完整包装件构成合成包装件中，内部要有支撑物，干冰或者干冰消耗掉后来，仍可以把辅助包装固定在原位置上。如果使用冰，包装必要不透水；如果使用干冰，外包装必要能排出二氧化碳气体；如果使用冷冻剂，主容器和辅助包装必要保持良好性能，在冷冻剂消耗完后来，仍能承受运送中温度和压力。4.1.3.2 冻干样品主容器必要是火焰封口玻璃安瓿或者是用金属封口胶塞玻璃瓶。在辅助包装周边还必要放置冰、干冰或者其她冷冻剂。实验室生物安全原则操作规程（SOP）HYEY-PGC04-实验室检测样品接受第 1 页 共 1 页第3版 第 0 次 修订 1月 11日发布/1月20日实行1 目规范接受检测样品，保证生物安全。2 合用范畴合用于送检样品交接管理。3 职责 专人负责接受样品和接样生物安全。4 过程规定4.1检测样品由专人接受，在接受送检样品时应作好样品登记，填写样品接受登记表,并对样品进行符合性检查，检查涉及： (1) 样品包装、标志及外观与否完好；(2) 对照抽样单核查样品名称、采样地点、样品数量、性状等信息； (3) 样品与否损坏、污染或已过有效期。 4.2接样人进行样品登记、保存后，报告实验室负责人安排检测工作。4.3 检查后剩余样品，由样品保管人负责留存。 实验室生物安全原则操作规程（SOP）HYEY-PGC05-样品检测操作规程第 1 页 共 1 页第3版 第 0 次 修订 1月 11日发布/1月20日实行1 目为规范样品检测，特制定本规程。2 合用范畴合用不同待检样品检测。3 职责3.1 实验室工作人员严格依照本规程进行样品检测。3.2 实验室负责人负责监督实验室工作人员样品检测工作。4 过程规定样品检测办法应采用作业指引书-检测原则（GTCADC-ZYBZ-）规定办法。5. 有关文献作业指引书-检测原则（GTCADC-ZYBZ-）实验室生物安全原则操作规程（SOP）HYEY-PGC06-电气设备操作规程第 1 页 共 1 页第3版 第 0 次 修订 1月 11日发布/1月20日实行1 目为规范实验室电气设备使用和维护，特制定本规程。2 合用范畴合用于电气设备操作和维护。3 职责实验室工作人员严格依照本规程进行使用电气设备。4 过程规定4.1实验室工作人员必要熟悉仪器性能、用途、用法，严格按照阐明书使用，遵守仪器操作规程。4.2仪器使用过程中发生故障必要及时停止使用，并报告实验室负责人，及时查找因素，尽快排除，并登记。4.3使用完毕必要对使用过仪器设备按有关规定去除污染，以减少污染风险。5 有关文献作业指引书-仪器设备操作规程(GTCADC-ZYGC-)实验室生物安全原则操作规程（SOP）HYEY-PGC07-实验室消毒剂配制原则操作规程第 1 页 共 2 页第3版 第 0 次 修订 1月 11日发布/1月20日实行1 目规范实验室消毒剂配制，保证消毒液有效性和实验室生物安全。2 合用范畴合用于检查科实验室惯用消毒剂配制。3 职责实验室工作人员负责惯用消毒剂配制。4 过程规定4.1 消毒剂配制4.1.1 配制前，实验室工作人员应洗净配制容器及量具，自然晾干。按试剂配制配方和配质量量取所需药物。按配制规定先后顺序加入药物，搅拌均匀配制试剂。4.3 配制过程产热试剂待自然冷却后分装，并将填写好品名、浓度、配制时间、有效期标签贴于盛装容器上。做好配制记录。惯用消毒剂配方及注意事项见下表1。实验室生物安全原则操作规程（SOP）HYEY-PGC07-实验室消毒剂配制原则操作规程第 2 页 共 2 页第3版 第 0 次 修订 1月 11日发布/1月20日实行表1 惯用消毒剂种类和配制办法表消毒剂名称用途配制办法备注0.2%新洁尔灭手消毒，仪器表面消毒等量取5%新洁尔灭溶液100mL置于配制容器中，加入2400mL纯化水搅拌混匀。2%NaOH溶液原位消毒称取20gNaOH固体，缓慢加入纯化水定容到1000mL。强碱pH值不不大于1375%乙醇手表面消毒取750mL无水乙醇加纯化水定容到1000mL。15%18%过氧乙酸实验室薰蒸消毒冰醋酸H2O2浓H2SO4按体积比140.060.02.1配制。依照需要量分别量取所需过氧化氢、冰醋酸和浓硫酸。置于配制容器中搅拌均匀。使用时可加入催化剂高锰酸钾或加热。配制好过氧乙酸需室温放置48h后使用。超过20%过氧乙酸会发生爆炸。一周内用完。实验室生物安全原则操作规程（SOP）HYEY-PGC08-无菌间使用原则操作规程第 1 页 共 2 页第3版 第 0 次 修订 1月 11日发布/1月20日实行1 目保证无菌室环境无菌状态。2 合用范畴合用于无菌间空气微生物监测。3 职责实验室工作人员负责实验室空气微生物监测和实行。4 过程规定4.1实验室工作人员在进无菌间之前，应先用2%石碳酸或来苏尔对手进行浸泡消毒。4.2 缓冲间在每次使用前，应先打开紫外灯，紫外照射30 min；工作人员在进入无菌室前，必要于缓冲间内更换消毒过工作服、工作帽及工作鞋。检查用关于器材（待检品除外），搬入无菌室前必要分别进行灭菌消毒。4.3 将无菌间和生物安全柜紫外灯打开照射30min后，才干进行工作。4.4 实验完毕后，用0.2%新洁尔灭消毒液擦拭生物安全柜台面，打开生物安全柜内紫外灯，照射30min。同步无菌间和缓冲间紫外灯一并打开，照射30min。4.5 工作人员在缓冲间脱下工作服、工作帽及工作鞋。4.6 适时应对无菌间进行熏蒸消毒。4.7 每月应对无菌间进行一次无菌检查记录4.7.1 营养琼脂平板制备按营养琼脂阐明书配制营养琼脂，12015min高压灭菌后，冷却到50左右倾倒于9cm平板。待琼脂凝固后，放37 48h 培养，无菌生长，方可以使用。4.7.2 沉降菌数测定先打开无菌室内紫外灯照射30min后，将备妥营养琼脂平板5个。以无菌方式移入操作间，置四个角落和中央各1个，开盖，暴露30分钟后将盖盖上。在37培养箱内倒置培养48h，取出检查。分别数出5个平板生长菌落数并得出5个平板平均菌落数。实验室生物安全原则操作规程（SOP）HYEY-PGC08-无菌间使用原则操作规程第 2 页 共 2 页第3版 第 0 次 修订 1月 11日发布/1月20日实行 4.7.3成果鉴定无菌室内干净级别应达到10000级，即在进行沉降菌数测定期，平均菌落数应不大于或等于 3个（90mm，0.5h）。如所测得平均菌落数不大于3个，则证明该无菌室无菌限度符合规定，否则该无菌室无菌限度不符合规定，需要对无菌间进行彻底消毒，直至重复检查符合规定为止。 实验室生物安全原则操作规程（SOP）HYEY-PGC09-实验室废弃物解决原则操作规程第 1 页 共 2 页第3版 第 0 次 修订 1月 11日发布/1月20日实行1 目制定实验室废弃物安全解决操作规程，保障实验室生物安全。2 合用范畴合用于实验室废弃物解决。3 职责3.1 实验室工作人员严格遵守本规程，并对所从事工作负有生物安全责任。3.2 实验室负责人负有监督和管理责任。4 过程规定4.1 实验室工作人员做好个人防护。穿好工作服、戴好手套、口罩和帽子等。4.2 实验室废弃物使用防渗专用包装容器（袋）或者防锐器穿透密闭容器收集，及时进行无害化解决，并做好实验室废弃物解决记录。4.3 废弃物分类解决4.3.1 感染性废弃物解决 培养基、标本和菌（毒）种保存液、血液、血清、临床标本等感染性废弃物须进行压力蒸汽灭菌。用过一次性实验用品（涉及手套、口罩、帽子等）及试管、吸管、移液器吸头等感染性废弃物可进行压力蒸汽灭菌或消毒液浸泡24h。4.3.2 损伤性废弃物解决针头、缝合针、解剖刀、手术刀、备皮刀、手术锯，实验玻片、玻璃试管、玻璃安瓿等可以刺伤或割伤人体废弃实验利（锐）器等损伤性废弃物需放入符合规定利器盒里，容器装满3/4后封盖，进行高压蒸汽灭菌解决。4.3.3 药物性废弃物解决过期、裁减、变质或者被污染诊断试剂可采用压力蒸汽灭菌解决。4.3.4 病理性废弃物解决动物组织及动物尸体使用两层防渗专用包装容器（袋）包装好（外包装进行彻底消毒解决），按规定进行焚烧、深埋或送往无害化解决场解决。做好废弃物处实验室生物安全原则操作规程（SOP）HYEY-PGC09-实验室废弃物解决原则操作规程第 2 页 共 2 页第3版 第 0 次 修订 1月 11日发布/1月20日实行理记录。4.3.5 化学品废弃按组分收集后，倒入专用化学废弃物收集桶内，集中解决。实验室生物安全原则操作规程（SOP）HYEY-PGC10-实验室消毒原则操作规程第 1 页 共 1 页第3版 第 0 次 修订 1月 11日发布/1月20日实行1 目保护实验室生物安全，防止病原逃逸。2 合用范畴实验室寻常清洁，实验过程中产生污染废弃物、使用过防护装备及设施设备等消毒。3 职责实验室工作人员按照本原则进行寻常消毒。4 过程规定 4.1 仪器设备表面：用0.2%新洁尔或0.1%0.2%有效氯消毒液擦拭，30min后再用清洁湿抹布擦拭2次。4.2 废弃病毒材料和操作过程中使用一次性耗材先置于2%NaOH溶液浸泡2h，按照废弃物解决程序解决。4.3 生物安全柜台面：用0.5%新洁尔、0.1%0.2%有效氯等消毒液浸湿无纺抹布擦拭，30min后再用清洁湿抹布擦拭2次。使用生物安全柜先后，要用紫外线照射消毒30min。4.4 个人防护装备：工作鞋、橡胶手套可用0.1%0.2%有效氯消毒液浸泡2h，工作衣帽和口罩高温高压消毒后清洗。4.5 手消毒：用75%乙醇进行消毒。4.6 地面及墙壁：用0.1%0.2%有效氯消毒液浸湿抹布擦拭，30min后再用清洁湿抹布擦拭1次。4.7 实验室空间消毒：依照实验室空间大小按照1-2 g/m3过氧乙酸使用量，熏蒸或喷雾消毒2h即可。也可以采用甲醛熏蒸，先将高锰酸钾按甲醛半量加于金属容器(以废弃食品易拉罐最适当)中，然后将规定量甲醛(加适量水稀释，以增长环境中湿度)慢慢加入其中，从而使甲醛气化。每立方米空间按甲醛溶液20毫升、高锰酸钾10克、水10毫升计算用量。消毒人员操作完毕，及时离开现场，封房1224h。 实验室生物安全原则操作规程（SOP）HYEY-PGC11-实验室意外事故解决第 1 页 共 1 页第3版 第 0 次 修订 1月 11日发布/1月20日实行1 目减少意外事件发生后对生物安全不利影响，保障工作人员安全和实验室生物安全。2 合用范畴合用于实验室意外事件解决。3 职责实验人员必要严格遵守本程序，一旦意外事故发生，实验人员应及时停止工作，及时告知实验室负责人，并采用应急办法。4 解决办法4.1工作人员被实验动物咬伤时，及时停止工作，用3%双氧水或碘酒擦拭受伤部位，用创可贴或消毒纱布包住受伤部位，然后按照退出程序退出实验室，如需要再进行必要医学解决，同步告知实验室负责人。4.2当实验动物逃逸时，将实验动物抓获后，并及时对动物逃逸时途径路线及实验区域严格消毒并作备案。4.3当意外注射切伤或擦伤时，解决办法同4.1。4.4当具有感染性物质容器破碎或感染性物质溢出时，实验人员及时用蘸有消毒液抹布覆盖溢出感染物及具有感染物破碎物品容器，10min后将抹布及破碎物品清理掉（注意：用镊子清理玻璃碎片），然后再用消毒剂擦拭被污染区域。用于清理抹布等物品装入耐高温高压灭菌袋内，封口后用高温高压灭菌锅进行消毒解决。4.5当离心机内盛有潜在危害物质离心管破损时，如果机器正在运营时怀疑发生破损，及时关闭机器电源，让机器密闭静置30min；如果机器停止后发现破损，及时盖上盖子，让机器密闭30min。所有破碎离心管离心机内盖和转头在0.2新洁尔灭消毒剂内浸泡擦拭。未破损离心管作表面消毒解决。