注射用水检验操作作业规程企业版药典.doc

注射用水检验操作规程
1.目标
建立注射用水检验作业指导书，规范各项操作，检验生产、检验用水质量，以确保产品质量和试验用水符合要求。
2.适用范围
本规程适适用于质量部检验人员。
3.引用标准
GB/T 6682- 分析试验室用水规格和试验方法
《中国药典》 纯化水和注射用水相关标准及检验方法
GBT 14233.1- 医用输液、输血、注射器具检验方法 第1部分：化学分析方法
GBT 14233.2- 医用输液、输血、注射器具检验方法 第2部分：生物试验方法
4.职责
质量部检验员需根据本规程进行注射用水检验操作。
5.操作要求
5.1 企业用水使用情况
5.1.1生活饮用水
1）通常生产车间和检验车间仪器和设备卫生清洁；
2）产品前期处理中作为通常溶剂；
3）产品前期清洗；
4）制备纯化水原料水。
5.1.2纯化水
1）洁净室仪器和设备卫生清洁；
2）产品洁净环境处理过程中作为通常溶剂；
3）检验室试验用水，作为通常溶剂；
4）洗衣房清洗专用；
5）制备注射用水原料水。
5.1.3注射用水
1）洁净室产品末道清洗和保湿用水；
2）冻干产品回潮和恒湿用水；
3）局部100级工作环境清洁、消毒中作为通常溶剂；
4）返工工序清洁使用。
5.2取样及贮存
5.2.1 容器
1）全部用水均可使用密闭、专用聚乙烯容器。生活用水和纯化水可使用密闭、专用玻璃容器。如：具硅胶塞三角烧瓶。
2) 新容器在使用前需用盐酸溶液（质量分数为20%）浸泡2d～3d，再用待测反复冲洗，并注满待测水浸泡6h以上。
5.2.2 取样
1）按本操作规程进行试验，最少应取3L有代表性水样。
2) 取样前用待测水反复清洗容器，取样时要避免沾污。水样应注满容器。
5.2.3 取样
1）企业各用水在贮存期间，其污染关键起源是容器可溶成份溶解、空气中二氧化碳和其它杂质。所以，根据国家标准，纯化水和注射用水可适量制备，分别贮存在预先经同级水清洗过对应容器中。灭菌注射用水应为灭菌后即时使用，生活用水可在线取样检验。
2)各用水在贮存和运输过程中应避免沾污。
5.3关键检验设备
1）精密pH计
2）数显电导率仪
3）紫外可见分光光度计
5.4环境要求
通常检测只需一般环境要求，细菌试验需要无菌环境。
5.5注射用水检验方法
5.5.1总则
本企业采取纯化水经蒸馏设备制备出注射用水，在洁净生产过程中充当末道清洗溶液。
依据《中国药典》对注射用水要求及检测方法和企业实际生产使用要求，特制订注射用水企业质量标准。关键检测项包含性状、pH值、硝酸盐、亚硝酸盐、氨、重金属、总有机碳（TOC）、易氧化物、不挥发物、电导率、细菌内毒素和微生物程度。
5.5.2 性状
注射用水应无臭、无味、无色澄明液体。在线快速检测时可直接目力观察、鼻子嗅和口尝等方法。
5.5.3 酸碱度
取注射用水样品100ml，加饱和氯化钾溶液0.3ml,用精密 pH计进行测定，pH值应为5.0～7.0。
5.5.4 硝酸盐
1）10％氯化钾溶液
称取氯化钾10g，加水溶解成100ml。
2）0.1％二苯胺硫酸溶液
称取二苯胺0.1g，加98%浓硫酸溶解成100ml。
3标准硝酸盐溶液
称取硝酸钾0.163g，加水溶解并稀释至100ml，摇匀，精密量取1ml，加水稀释成100ml，摇匀，再精密量取10ml，加水稀释成100ml，摇匀,每1ml相当于1µg NO3。
4）取注射用水样品5ml置试管中，于冰浴（0℃）中冷却，加10％氯化钾溶液0.4ml和0.1％二苯胺硫酸溶液0.1ml，摇匀，缓缓滴加98%浓硫酸5ml，摇匀，将试管于50℃水浴中放置15分钟，溶液产生蓝色和标准硝酸盐溶液0.3ml，加无硝酸盐水4.7ml，用同一方法处理后颜色比较，不得更深(0.000 006%)。
5.5.5 亚硝酸盐
1）稀盐酸溶液
量取浓盐酸234ml，加水使稀释至1000ml。该液含HCl应为9.5%-10.5%。
2）对氨基苯磺酰胺稀盐酸溶液（1→100）
称取氨基苯磺酰胺1g，加稀盐酸溶液使溶解成100ml。
3）盐酸萘乙二胺溶液（0.1→100）
称取盐酸萘乙二胺0.1g，加水使溶解成100ml。
4）标准亚硝酸盐溶液
称取亚硝酸钠0.750g（按干燥品计算），加水溶解，稀释至100ml，摇匀，精密量取1ml，加水稀释成100ml，摇匀，再精密量取1ml，加水稀释成50 ml，摇匀，每1ml相当于1µgNO2 。
5）取注射用水样品10ml，置纳氏管中，加对氨基苯磺酰胺稀盐酸溶液（1→100）1ml及盐酸萘乙二胺溶液（0.1→100）1ml，产生粉红色，和标准亚硝酸盐溶液0.2ml，加无亚硝酸盐水9.8ml，用同一方法处理后颜色比较，不得更深(0.000 002%)。
5.5.6 氨
1）碱性碘化汞钾试液
称取碘化钾10g，加水10ml溶解后，缓缓加入二氯化汞饱和水溶液，随加随搅拌，至生成红色沉淀不再溶解，加氢氧化钾30g，溶解后，再加二氯化汞饱和水溶液1ml或1ml以上，并用适量水稀释使成200ml，静置，使沉淀，即得。使用时倾取上层澄明液应用。
2）氯化铵溶液
称取氯化铵31.5mg，加无氨水适量使溶解并稀释成1000ml。
3）取本品50ml，加碱性碘化汞钾试液2ml，放置15分钟；如显色，和氯化铵溶液1.0ml，加无氨水48ml和碱性碘化汞钾试液2ml制成对照液比较，不得更深（0.000 02%）。
5.5.7 重金属
1) 醋酸盐缓冲液（pH3.5）
称取醋酸氨25g，加水25ml溶解后，加7mol/L盐酸溶液38ml，用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液正确调整pH值至3.5（电位法指示），用水稀释至100ml，即得。
2）7mol/L盐酸溶液
量取浓盐酸63ml，加水稀释至100ml。
3）2mol/L盐酸溶液
量取浓盐酸18ml，加水稀释至100ml。
4)硫代乙酰胺试液
称取硫代乙酰胺4g，加水使溶解成100ml，置冰箱中保留。临用前取混合液（由1mol/L氢氧化钠溶液15ml、水5.0ml及甘油20ml组成）5.0ml，加上述硫代乙酰胺溶液1.0ml，置水浴上加热20秒钟，冷却，立即使用。
5）1mol/L氢氧化钠溶液
称取氢氧化钠适量，加水振摇使溶解成饱和溶液，冷却后，置聚乙烯塑料瓶中，静置数日，澄清后备用。取澄清氢氧化钠饱和溶液5.6ml，加新沸过冷水定容至100ml，摇匀。
6）标准铅溶液
称取硝酸铅0.160g，置1000ml容量瓶中，加硝酸5ml和水50ml溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10ml置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml相当于10ugPb）。配制和贮存用玻璃容器均不得含铅。
7）取注射用水样品100ml，加水19ml，蒸发至20 ml，放置冷却后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml和水适量使成25 ml。加硫代乙酰胺试液2ml，摇匀，放置2分钟，和标准铅溶液1ml加水19.5ml用同一方法处理后颜色比较，不得更深（0.000 01％）。
5.5.8 易氧化物
1） 稀硫酸
量取浓硫酸57ml，加水稀释至1000ml。该液应含H2SO4为9.5%-10.5%。
2高锰酸钾滴定液（0.02mol/L）
称取高锰酸钾3.2g，加水1000ml，煮沸15分钟，密塞，静置2日以上，用垂熔玻璃滤器滤过，摇匀。置玻璃塞棕色玻璃瓶中，密闭保留。
3）取注射用水样品100ml，加稀硫酸10ml，煮沸后，加高锰酸钾滴定液（0.02mol/L）0.10ml，再煮沸10分钟，粉红色不得完全消失。
5.5.9 不挥发物
取注射用水样品100ml，置105℃恒重蒸发皿中，在水浴上蒸干，并在105℃烘箱内干燥至恒重，遗留残渣不得过1mg。
5.5.10 总有机碳（TOC）
1）总有机碳检验用水应采取每升含总有机碳低于0.10mg，电导率低于1.0μS/cm（25℃）高纯水。所用总有机碳检验用水和制备对照品溶液及系统适用性试验溶液用水应是同一容器所盛之水。
2）玻璃器皿预备
用能除去有机物质方法严格地清洗玻璃器皿。最终，用总有机碳检验用水润洗。
3）对照品溶液制备
A. 蔗糖对照品溶液
取经105℃干燥三小时后，加总有机碳检验用水溶解并稀释制成每升中约含1.19mg 溶液（每升含碳0.50mg）。
B. 1,4-对苯醌对照品溶液
取1,4-对苯醌对照品适量，精密称定，加总有机碳检验用水溶解并稀释制成每升中含0.75mg 溶液（每升含碳0.50mg）。
4）供试溶液
A．离线测定
因为水样采集及输送到测试装置过程中，水样很可能遭到污染，而有机物污染和二氧化碳吸收全部会影响测定结果真实性。所以，测定各个步骤全部应十分谨慎。采样时应使用密闭容器，采样后容器顶空应尽可能小，并应立即测试。所使用玻璃器皿必需严格清洗有机残留物，并用总有机碳检验用水做最终淋洗。
B．在线测定
将总有机碳在线检测装置和制水系统连接妥当。取水及测定系统全部须进行充足清洗。
5）系统适用性试验
取总有机碳检验用水，蔗糖对照品溶液和1,4-对苯醌对照品溶液分别进样依次统计仪器总有机碳响应值。按下式计算，以百分数表示响应效率应为85%～115%。
100×［（rss-rw）/（rs-rw）］
式中 rw —为总有机碳检验用水空白响应值；
rs —为蔗糖对照品溶液响应值；
rss —为1,4-对苯醌对照品溶液响应值。
6）测定法
取供试制药用水适量，按仪器要求方法测定。统计仪器响应值rU，除另有要求外，供试制药用水响应值应小于rs-rw 。
5.5.11 电导率
1）使用在线或离线电导率仪。在表7中，小于测定温度最靠近温度值，对应电导率值即为程度值。如测定电导率小于程度值，则划为符合要求；如测定电导率值大于程度值，则继续按2）进行下一步测定。
表1 温度和电导率程度（注射用水）
温度/℃
电导率/μs·cm-1
温度/℃
电导率/μs·cm-1
0
0.6
55
2.1
5
0.8
60
2.2
10
0.9
65
2.4
15
1.0
70
2.5
20
1.1
75
2.7
25
1.3
80
2.7
30
1.4
85
2.7
35
1.5
90
2.7
40
1.7
95
2.9
45
1.8
100
3.1
50
1.9

2）取足够量大水样（不少于100ml），置合适容器中，搅拌，调整温度至25℃，猛烈搅拌，每隔5分钟测定电导率，当电导率值改变小于0.1μs·cm-1时，统计电导率值。如测定电导率小于2.1μs·cm-1，则判为符合要求，继续按3）进行下一步测定。
3） 应在上一步测定后5分钟内进行，调整温度至25℃，在同一水样中加入饱和氯化钾溶液（每100ml水样中加入0.3ml），测定pH值，正确至0.1pH单位，在表8中找到对应电导率程度，并和2）中测得电导率值比较，如2）中没得电导值超出该程度值或pH值不在5.0～7.0范围内，则判为不符合要求。
表2 pH和电导率程度（注射用水）
pH/℃
电导率/μs·cm-1
pH/℃
电导率/μs·cm-1
5.0
4.7
6.1
2.4
5.1
4.1
6.2
2.5
5.2
3.6
6.3
2.4
5.3
3.3
6.4
2.3
5.4
3.0
6.5
2.2
5.5
2.8
6.6
2.1
5.6
2.6
6.7
2.6
5.7
2.5
6.8
3.1
5.8
2.4
6.9
3.6
5.9
2.4
7.0
4.6
6.0
2.4

5.5.12 微生物程度
取注射用水样品200ml， 经薄膜过滤法处理后接种至R2A琼脂培养基，30～35℃培养5天，100ml样品中需氧菌数不得超出10cfu。
供试液从制备至加入检验用培养基，不得超出1小时。
试验方法详见《微生物程度检验操作规程》。
5.5.13细菌内毒素
试验方法详见《微生物程度检验操作规程》。
5.5.14 注射用水企业质量标准
依据《中国药典》相关注射用水标准，制订和本企业实际生产使用时对注射用水质量需要，以上对注射用检测结果应完全符合表12要求。
表3 注射用水指标及限值
指标
限值
性状
无色、澄清液体、无臭、无味
pH值
5.0～7.0
硝酸盐
不得更深(0.000 006%)
亚硝酸盐
不得更深(0.000 002%)
氨
不得更深（0.000 02％）
重金属
不得更深（0.000 01％）
易氧化物
粉红色不得完全消失
不挥发物
遗留残渣不得过1mg/100ml
总有机碳（TOC）
不得超出0.50mg/L
电导率
符合表11表12要求
细菌内毒素
内毒素含量应小于0.25EU/ml
微生物程度
需氧菌总数不过超出10cfu/100ml