慢性丙型肝炎患者基因分型与...、抗体检测结果的相关性分析_韩金育.pdf

慢性丙型肝炎患者基因分型与病毒载量、肝功能、抗体检测结果的相关性分析韩金育1,金方方2,韩 莹2,孟 欢2,陈 瑾2,王雅杰1,2(1.北京大学地坛医院教学医院检验科,北京1 0 0 0 1 5;2.首都医科大学附属北京地坛医院检验科,北京1 0 0 0 1 5)D O I:1 0.1 1 7 4 8/b j m y.i s s n.1 0 0 6-1 7 0 3.2 0 2 2.1 1.0 0 3收稿日期:2 0 2 2-0 6-1 3;修回日期:2 0 2 2-0 6-2 1基金项目:吴阶平医学基金会临床科研专项资助基金(编号:3 2 0.6 7 5 0.1 9 0 8 9-7 5)通讯作者:王雅杰,首都医科大学附属北京地坛医院检验科主任。摘要:目的 分析慢性丙型肝炎患者丙型肝炎病毒(HC V)基因型分布概况,并探讨其与性别、年龄、病毒载量、肝功能、抗体检测结果的关系,为慢性丙型肝炎的诊疗提供实验室依据。方法 通过回顾性研究,收集2 0 2 0年1月至2 0 2 1年1 2月就诊于首都医科大学附属北京地坛医院未经过治疗的2 4 7例慢性丙型肝炎患者一般临床资料、基因分型、丙型肝炎病毒核酸定量结果、肝酶 丙氨酸氨基转移酶(A L T)、天门冬氨酸氨基转移酶(A S T)、总胆红素(T B I L)、直接胆红素(D B I L)、碱性磷酸酶(A L P)、-谷氨酰转移酶(G G T)、白蛋白(A L B)及丙型肝炎病毒抗体S/C O值,比较分析HC V不同基因型病毒载量、肝功能及丙型肝炎病毒抗体检测结果的差异。结果 在2 4 7例慢性丙型肝炎患者中,1 b型1 4 3例(5 7.9%)、2 a型7 1例(2 8.7%)、3 a型1 9例(7.7%)、3 b型1 4例(5.7%),不同基因型性别、年龄、病毒载量、T B I L、D B I L、A L P、A L B差异无统计学意义(P0.0 5),3 a型、3 b型A L T、A S T水平显著高于1 b型、2 a型(P0.0 5),3 a型G G T水平显著高于1 b型、2 a型(P0.0 5)。1 b型丙型肝炎病毒抗体S/C O值显著高于2 a型、3 a型、3 b型(P0.0 5).A L T,A S Tl e v e l so f ty pe3 a,ty pe3 bw e r es ign i f i c a n t lyh igh e r t h a nty pe1 ba n dty pe2 a(P0.0 5).GG Tl e v e l o f ty pe3 aw a s s ign i f i c a n t lyh igh e r t h a nty pe1 ba n dty pe2 a(P0.0 5).HC Va n t i b o dyS/C Or a t i oo fty pe1 bw a ss ign i f i c a n t lyh igh e r t h a nty pe2 a,ty pe3 a,a n dty pe3 b(P0.0 0 1).C o n c l u s i o nH epa t i t i sCv i r u s i n f e c t i o ni nt h ec u r r e n t s t u dyi sd o m i n a t e dbyty pe1 b,f o l l o w e dbyty pe2 a,ty pe3 a,a n dty pe3 b.T h ed i f f e r e n c e so fv i r a l l o a d,s e x,age,T B I L,D B I L,A L Pa n dA L Ba r en o t s ign i f i c a n t,w h i l e t h ed i f f e r e n c e s o fA L T,A S T,GG Ta n dHC Va n t i b o dyt e s t r e s u l t sa r es ign i f i c a n t.K e yw o r d s:C h r o n i ch epa t i t i sC;G e n o ty pe;V i r a l l o a d;l i v e r f u n c t i o n;H C Va n t i b o dyS/C Or a t i o 丙型肝炎病毒(h e p a t i t i sCv i r u s,HC V)感染是慢性肝脏疾病的常见病因,在全世界范围内,大约有1.31.5亿人感染HC V1,公众的生命健康受到严重危害。丙型肝炎防治指南(2 0 1 9年版)中提出在我国一般人群中HC V感染人数大约为5 6 0万,加上HC V感染高发地区的人群,共达到10 0 0万左右2。许多感染者死于丙肝相关疾病,其中因延误诊断进展为肝硬化及肝癌是主要死因。因此,HC V感染及时诊疗十分重要。HC V为有包膜的单股正链R NA病毒,HC V基因组的变异性很高,根据HC V基因组核苷酸序列的差异,HC V可以分为16种基因型,不同基因型的患病率具有显著的地理性差异,因此了解HC V基因型的流行规律可为本地区丙型肝炎诊疗提供参考。研究3表明HC V感染的严重程度及预后与分型密切相关,因此掌握HC V基因型分布特点对于了解导致HC V感染的危险因素及丙型肝炎病情发展具有重要临床价值。近些年来,随着抗病毒药物的应用,丙型肝炎患者的生存质量得到了明显提高,但在抗病毒药物治疗的过程中,临床医生制定个体化治疗方案以及抗病毒药物的疗效与患者HC V基因型紧密相关。基于以上所述,本研究选取就诊于北京地坛医院具有明确基因分型的慢性丙型肝炎患者作为研究对象,对基因分型检测结果进行回顾性分析,分析HC V基因型分布情况,并探讨其与病毒载量、肝功能、抗体检测结果的关系,为掌握HC V不同基因型致病性、所致病情严重程度奠定基础,同时旨在为丙型肝炎的诊疗提供实验室依据,具有重要的临床价值。材料和方法 1 一般资料 本研究选取2 0 2 0年1月至2 0 2 1年1 2月在首都医科大学附属北京地坛医院就诊具有明确基因分型未经过治疗的2 4 7例初诊慢性丙型肝炎患者作为研究对象,其中男性1 4 4例,女性1 0 3例,患者年龄2 5 8 0岁,年龄中位数为5 3岁。对患者一般临床资料、基因分型检测结果、肝功能检测结果及丙型肝炎病毒抗体检测结果进行回顾性分析。慢性丙型肝炎的临床诊断符合中华医学会肝病学分会、中华医学会感染病学分会制订的 丙型肝炎防治指南(2 0 1 9年版)4。1.1 纳入标准 临床资料完整;患者既往未进行抗病毒治疗,为初诊患者;无合并其他炎症、恶性肿瘤等疾病。1.2 排除标准 哺乳、妊娠妇女;患有自身免疫性肝病;合并H I V及其他肝炎病毒感染;合并包括有药物性肝损伤、酒精性肝病等在内的其他肝脏疾病。2 方法 2.1 HC V基因型检测 HC V基因分型荧光探针法:采用A B I-7 5 0 0实时荧光P C R仪检测各亚型特异性探针的荧光信号,对丙型肝炎患者进行基因分型。HC V基因分型测序法:对于未明确基因型的样本,采用中山大学达安基因股份有限公司的磁珠法进行HC VR NA的提取并进行P C R扩增、纯化,并采用A B I 3 7 3 0 X L测序仪对产物进行测序,并与G e n B a n k上的HC V序列进行参比从而确定基因分型。2.2 HC V R NA检测 采用购自罗氏生物公司的C o b a sAm p l i P r e p仪器进行核酸提取,并采用购自罗氏生物公司的C o b a sT a q M a n分析仪进行自动扩增并检测。2.3 HC V肝功能生化指标的检测 采用购自日立公司的7 1 8 0全自动生化分析仪进行丙氨酸氨基转移酶(A L T)、天门冬氨酸氨基转移酶(A S T)、总2181L a b e l e dI mm u n o a s s a y s&C l i nM e d,N o v.2 0 2 2,V o l.2 9,N o.1 1胆红素(T B I L)、直接胆红素(D B I L)、碱性磷酸酶(A L P)、-谷 氨 酰 转 移 酶(G G T)、白 蛋 白(A L B)测定。2.4 HC V抗体检测 采用购自美国雅培公司的A R CH I T E C Ti 2 0 0 0 S R全自动免疫分析仪对慢性丙型肝炎患者的抗体进行检测。3 统计学处理 采用S P S S2 3.0软件进行统计分析,首先对计量资料进行正态性检验,本研究中的计量资料经过正态性检验不符合正态分布,用中位数(四分位数范围)M(P2 5P7 5)表示,组间比较采用K r u s k a l-W a l l i s检验,计数资料采用2检验,以P 0.0 5)。见图2。图2 HC V不同基因型年龄、性别对比图 3 H C V基因型与病毒载量的相关性分析 HC V R NA是病毒复制的直接标志,是临床上明确HC V感染的重要实验室依据,同时也是评价抗病毒药物治疗效果的标准。因此探讨HC V基因型与病毒载量之间的关系对于临床诊疗具有重要意义。本研究中基因型1 bHC V R NA病毒载量中位数为1.9 11 06I U/m L,基因型2 aHC V R NA病毒载量中位数为1.0 41 06I U/m L,基因型3 aH C VR N A病毒载量中位数为1.1 5 1 06I U/m L,基因型3 bHC VR NA病毒载量中位数为3.2 61 06I U/m L,对不同基因型病毒载量进行比较,发现4种基因型病毒载量差异无统计学意义(P0.0 5)。见表1。表1 HC V不同基因型病毒载量比较M(P2 5P7 5)HC V基因型例数病毒载量(I U/m L)1 b1 4 31.9 11 06(3.3 71 055.2 01 06)2 a7 11.0 41 06(1.2 51 053.5 01 06)3 a1 91.1 51 06(5.5 21 047.2 91 06)3 b1 43.2 61 06(1.4 31 066.0 61 06)H值5.7 9 7P值0.1 2 2 4 H C V基因型与肝功能的相关性分析 肝功能生化检测指标能够很好地反映肝脏损伤程度,H C V不 同 基因型因生物学特性不同对肝脏的3181标记免疫分析与临床 2 0 2 2年1 1月第2 9卷第1 1期损伤程度存在差异,因此探讨H C V不同基因型与肝功能的关系对临床病情评估具有重要意义。本研究分析比较了2 4 7例慢性丙型肝炎患者的A L T、A S T、T B I L、D B I L、A L P、G G T、A L B水平差异,结果发现,H C V3 a型、3 b型A L T、A S T水平显著高于1 b型、2 a型(P 0.0 5)。3 a型G G T水平显著高于1 b型、2 a型(P 0.0 5)。见表2。表2 HC V不同基因型肝功能检测结果比较M(P2 5P7 5)项目1 b2 a3 a3 bH值P值A L T(U/L)5 0.0(3 0.47 5.8)a b4 0.2(2 7.47 7.7)a b7 7.6(5 7.41 2 2.5)7 5.3(4 7.61 2 3.1)1 6.9 90.0 0 1A S T(U/L)4 0.4(2 8.05 8.2)a b3 4.3(2 2.75 5.0)a b7 1.0(4 7.91 0 1.4)7 0.5(4 1.09 9.2)2 1.4 70.0 0 1T B I L(m o l/L)1 5.1(1 0.41 9.1)1 1.6(1 0.21 6.4)1 3.8(1 2.02 1.3)1 7.9(1 1.92 1.5)6.3 50.1 0 0D B I L(m o l/L)5.7(3.78.1)5.5(3.67.2)6.1(4.59.2)6.6(4.39.1)3.3 30.3 4 0A L P(U/L)7 2.5(5 9.08 5.7)7 2.3(5 3.38 7.5)8 4.3(5 5.11 0 4.1)6 3.2(5 5.77 6.6)4.4 90.2 1 4G G T(U/L)2 6.9(1 6.25 4.4)a2 2.9(1 4.65 2.9)a6 0.2(2 4.41 4 0.9)3 8.8(2 2.29 0.6)1 1.8 80.0 0 8A L B(g/L)4 5.6(4 2.94 8.2)4 5.6(4 3.74 8.1)4 5.1(3 9.54 7.7)4 5.7(4 2.94 8.8)2.0 40.5 6 3 注:与基因型3 a比较,aP0.0 5;与基因型3 b比较,bP0.0 5 5 H C V基因型与H C V抗体S/C O值的相关性分析 在4种基因型中,HC V1 b型抗体S/C O值最高,与2 a、3 a、3 b型相比,差异具有统计学意义(P0.0 0 1)。见表3。表3 HC V不同基因型抗体S/C O值比较M(P2 5P7 5)基因型例数S/C O1 b1 4 31 4.3 1(1 3.2 41 5.2 2)2 a7 11 2.9 8(1 1.2 21 3.6 6)c3 a1 91 2.1 5(1 0.8 81 4.5 5)c3 b1 41 2.9 2(1 0.3 81 3.8 7)cH值4 2.8 8P值0.0 0 1 注:与基因型1 b比较,cP0.0 5)。HC VR NA水平能够反映病毒复制的活跃程度及肝脏疾病病情的进展,同时也是HC V感染诊断和衡量抗病毒治疗疗效的重要指标,本研究对检测到的4种基因型病毒载量进行了比较,结果显示HC V不同基因型病毒载量差异无统计学意义(P0.0 5),与周友乾1 0等的结果一致。HC V不同基因型具有不同的生物学特性,其致病能力也存在差异,因此对肝脏的损伤程度存在差异,肝脏生化检查(A L T、A S T、T B I L、D B I L、A L P、G G T、A L B)能够反映肝脏损伤程度、肝脏合成功能及代谢功能情况,因此本研究比较了HC V不同基因型的肝功能指标,A L T、A S T是常用的能够反映肝细胞损伤的指标,值越高提示肝脏损伤程度越严重,4181L a b e l e dI mm u n o a s s a y s&C l i nM e d,N o v.2 0 2 2,V o l.2 9,N o.1 1本研究结果表明,HC V3 a、3 b型A L T、A S T水平显著高于1 b、2 a型(P0.0 5),说明HC V3型引起肝脏损伤最为严重,分析其原因可能是由于3型基因编码的蛋白细胞毒性作用很强,此外HC V3型脂肪变性、肝细胞癌的发生率最高,同时因合并其他代谢性疾病推进肝脏疾病的进展1 1。血清中的-谷氨酰转移酶(G G T)主要来自于肝胆系统,当G G T持续升高时,提示病情不稳定或有恶化的趋势,本研究结果显示,HC V3 a型G G T水平最高,显著高于1 b型、2 a型(P0.0 5)。丙型肝炎病毒抗体不是保护性抗体,抗体阳性是临床确诊HC V感染的证据,本研究结果表明,HC V1 b型抗体S/C O值最高,且显著高于2 a、3 a、3 b型(P0.0 0 1),分析其原因可能是由于HC V1 b型毒株的免疫原性较强,引起机体较强的免疫应答,也有可能由于HC V2型、3型毒株较1 b型毒株变异速度较快,机体持续产生针对2型、3型丙型肝炎病毒的抗体较少。综上所述,HC V感染是全球广泛关注的公共卫生问题,多数患者可发展成慢性感染,构成严重的长期健康风险1 2,HC V基因型伴随人口流动和感染途径的多样化,其流行分布随之发生变化,因此了解HC V基因型的分布特点,掌握其流行病学规律,可为当地丙型肝炎的诊疗提供重要的实验室依据,具有重要的临床意义。近些年随着抗病毒药物的问世,丙型肝炎患者的生存质量得到了明显改善,但抗病毒治疗对于不同基因型患者疗效不同,S V R也不同1 3。国内研究显示,HC V1 b型患者对直接抗病毒药物(D AA)可获得9 8%以上的有效率,且安全性良好1 4,本研究中优势基因型为1 b型,D AA s治疗有助于丙型肝炎患者治愈。因此掌握HC V基因型分布情况,可以为临床医生制定个体化诊疗方案提供实验室依据,此外本研究的结果表明HC V不同基因型对肝脏损伤程度存在差异,尤其是HC V3型对肝细胞损伤最为严重,因此HC V基因型的研究为临床判断病情的严重程度提供实验室参考。本研究也存在一定局限性,例如由于地域性的缘故,HC V3型的样本例数少,且与1 b、2 a型相比相差很多,后期将纳入更多样本量及更多实验室血清学检测指标,进而为以后深入探索HC V感染后免疫病理机制及为HC V感染的诊疗提供科学依据。参考文献1T A I E BV,P A C OU M,HOS,e ta l.An e t w o r km e t a-a n a l y s i st o c o m p a r e s i m e p r e v i r w i t h b o c e p r e v i r a n d t e l a p r e v i r i nc o m b i n a t i o n w i t h p e g i n t e r f e r o n-a n d r i b a v i r i n i n p a t i e n t si n f e c t e dw i t hg e n o t y p e1h e p a t i t i sCv i r u sJ.J M e dE c o n,2 0 1 5,1 8(1 0):7 8 7-7 9 6.2中华医学会肝病学分会,中华医学会感染病学分会.丙型肝炎防治指南(2 0 1 9年版)J.实用肝脏病杂志,2 0 1 9,2 3(1):3 3-5 2.3K L E I NR,K L E I N B E,MO S SS E.V i s u a li m p a i r m e n ti nd i a b e t e sJ.O p h t h a l m o l o g y,1 9 8 4,9 1:1-9.4中华医学会肝病学分会,中华医学会感染病学分会.丙型肝炎防治指南2 0 1 9年版J.中华传染病杂志,2 0 2 0,3 8(1):9-2 8.5柴宁,李坤,蒋莹.血清白细胞介素-6水平变化与慢性丙型肝炎的相关性研究J.山西医药杂志,2 0 1 7,4 6(6):6 7 0-6 7 2.6WE NB,Z HAN GJ,L I U W,e t a l.H B Vc o i n f e c t i o nw i t hHC Va l t e r s c i r c u l a t i n g T f h c e l l d i s t r i b u t i o n a n d i m p a i r s HC Vn e u t r a l i z i n ga n t i b o d yr e s p o n s e sJ.JV i r a lH e p a t,2 0 1 9,2 6(8):1 0 0 2-1 0 1 0.7郭杰,曲沛,李韦杰,等.5 7 0 8例丙型肝炎病毒感染患者基因型检测结果 评 价 J.标 记 免 疫 分 析 与 临 床,2 0 2 0,2 7(5):7 3 4-7 3 7,7 8 5.8黄艳秋,史昌河.丙型病毒性肝炎基因分型及临床意义J.青岛大学医学院学报,2 0 1 2,4 8(5):4 6 8-4 7 0.9周友乾,尹凤鸣,冯经华.湘南地区住院患者丙型肝炎病毒感染方式的特征分析J.临床肝胆病杂志,2 0 1 2,2 8(6):4 4 3-4 4 5.1 0周友乾,尹凤鸣,冯经华.丙型肝炎病毒载量与基因型和抗病毒疗效的关系研究J.实用肝脏病杂志,2 0 1 1,1 4(5):3 4 0-3 4 3.1 1A L Y S S AGOO L S B YHUN T E R,L I S AR O S E N B L A T T,C HA DP A T E L,e t a l.C l i n i c a l c h a r a c t e r i s t i c s,h e a l t h c a r e c o s t s,a n dr e s o u r c eu t i l i z a t i o n i nh e p a t i t i sCv a r yb yg e n o t y p eJ.C u r rM e dR e sO p i n,2 0 1 7,3 3(5):8 2 9-8 3 6.1 2AUN I N STR,MA S S H K A,S U B R AMANYA G,e ta l.I n t r a c e l l u l a r h e p a t i t i s C v i r u s m o d e l i n g p r e d i c t s i n f e c t i o nd y n a m i c sa n dv i r a lp r o t e i n m e c h a n i s m sJ.JV i r o l,2 0 1 8,9 2(1 1):e 0 2 0 9 8-1 7.1 3孙雯雯,王秀 芹,陈冬 哲,等.山 东 地 区4 4 8例 丙 型 肝 炎 患 者HC V基因分型状况分析J.检验医学与临床,2 0 1 7,1 4(1 6):2 3 3 8-2 3 3 9.1 4纪冬,李伯安,陈国凤.直接抗病毒药物治疗对HC V相关分子检测的新需求J.中华检验医学杂志,2 0 1 9,4 2(3):1 5 5-1 5 9.5181标记免疫分析与临床 2 0 2 2年1 1月第2 9卷第1 1期