食品中空肠弯曲菌检测江苏出入境ppt课件.ppt

粪便中空便中空肠弯曲菌弯曲菌检测孙孙燕萍燕萍燕萍燕萍1.一、空一、空肠弯曲菌的分弯曲菌的分类和特性：和特性：n n属于弯曲菌属。主要包括空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni）、结肠(或大肠）弯曲菌（Campylobacter coli）、海鸥弯曲菌（Campylobacter lari）、乌普色拉弯曲菌（Campylobacter upsalensis）、胎儿弯曲菌（Campylobacter fetus）等11种。其中空肠弯曲菌（C.jejuni）对食品安全的威胁最为严重。2.空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni）是从20世纪80年代起受到国内外广泛重视的人畜共患病菌。致病性：人类：急性细菌性肠炎、格林-巴利综合征 （GBS）、食物中毒。动物：雏鸡腹泻与肝炎；火鸡的肝炎与蓝冠病。犊牛的腹泻；绵羊的腹泻或流产。3.空空肠弯曲菌的生物学特性弯曲菌的生物学特性n n 革兰氏染色染色阴性。呈弧形，S形或螺旋形；菌体两端尖，有极鞭毛，能做 快速直线或螺旋体状运动；1.55m0.20.5m，无荚膜。n n 微需氧环境：5%O2、10%CO2和85%N2。n n 最适生长温度：42-43，37 可生长，30 以下不生长。4.空空肠弯曲杆菌的流行病学和弯曲杆菌的流行病学和临床表床表现n n 宿主：家禽、野生鸟类为最主要的传染源。(Rosef 等在1981年调查了129个野生鸟类，结果 表明24.8%携带空肠弯曲菌)鸟类迁移会造成病原菌对湖水与河水的污染。5.n n细菌分布范围 *该该菌分布广泛，已从多种菌分布广泛，已从多种动动物中分离出；也物中分离出；也发发现现于食物与于食物与饮饮水中，尤其是畜禽肉及水中，尤其是畜禽肉及脏脏器与器与鲜鲜奶。奶。*食用食用动动物中物中鸡鸡的的带带菌率菌率为为首位首位，其次，其次为为猪。主猪。主要分布在活要分布在活鸡鸡的消化系的消化系统统中如腺胃、十二指中如腺胃、十二指肠肠、空空肠肠、回、回肠肠、盲、盲肠肠、直、直肠肠、泄殖腔等。、泄殖腔等。*该该菌在人或菌在人或动动物的物的粪粪便中存活便中存活约约4 4周；在被周；在被污污染染的水源中可存活的水源中可存活约约5 5周。周。6.n n 感染途径：*传传播途径主要是由于播途径主要是由于摄摄取了取了该该菌菌污污染的食物与染的食物与 饮饮水后，水后，细细菌在人菌在人肠肠道内大量生道内大量生长长繁繁 殖，引起殖，引起 急性急性肠肠炎。炎。*被被污污染的禽肉与未染的禽肉与未经过经过巴氏消毒的牛奶是巴氏消毒的牛奶是导导致致 发发病的主要原因病的主要原因.7.n n 患者临床表现：患者表现为发热、腹泻、呕吐或肌肉痛。潜伏期平均3-5天，病程约7-10天，粪便的特征是有时带血，镜检中有多形核白血球，重症病例也有痢疾样血、粘液粪便。8.n n 根据美国疾病控制与根据美国疾病控制与预预防中心（防中心（USA-CDCUSA-CDC）多年）多年的美国食源性病原微生物引起的美国食源性病原微生物引起发发病人数的病人数的统计资统计资料，料，空空肠肠弯曲菌弯曲菌导导致的病例数致的病例数排名第二排名第二排名第二排名第二。禽肉、生牛奶禽肉、生牛奶中的空中的空肠肠弯曲菌被美国列弯曲菌被美国列为为重点重点监测监测食源性致病菌食源性致病菌之一。之一。n n3232ndnd CCFH CCFH（19991999年）提出年）提出5 5组优组优先先评评估的估的“病原病原-食食品品”组组合合,其中包括其中包括“禽肉禽肉-空空肠肠弯曲菌弯曲菌”。n n空空肠肠弯曲菌在弯曲菌在许许多多发发达国家也是被达国家也是被报报告最普遍的胃告最普遍的胃肠肠炎致病菌之一，如：美国、英国、丹麦、芬炎致病菌之一，如：美国、英国、丹麦、芬兰兰、爱尔兰爱尔兰、荷、荷兰兰、挪威、瑞典、瑞士等。、挪威、瑞典、瑞士等。9.NCTC 11168 基因基因组图谱基因组相对小，大小在1.6-1.7Mbp.DNA中富含A/T,G/C比率在29-47mol%.由于基因组体积小，对培养要求就比较苛刻。NCTC11168共有碱基对1.641.481个，含有1654个基因组。A/T的含量在69%。10.二、二、粪便中空便中空肠弯曲菌的弯曲菌的检验技技术20122012年年年年试试行行行行江江江江苏苏省感染性腹泻省感染性腹泻省感染性腹泻省感染性腹泻综综合合合合监测监测工作方案工作方案工作方案工作方案11.空空肠弯曲菌弯曲菌n n空肠弯曲菌：在微需氧条件下42生长而25不能生长，在选择性固体培养基上形成特征性菌落，按照本标准检验时具有相符合的运动特性、生长特性与生化特性的革兰氏阴性菌。12.设备和材料和材料n n微需氧培养装置:能够提供微需氧条件（5%O2、10%CO2和85%N2)如使用产气剂的 厌氧罐/袋或其它 可代用的装置等。13.三气培养箱（如三气培养箱（如Binder等等)14.弯曲菌弯曲菌检验程序程序15.增菌液接种增菌液接种 n n方法一：稀释处理 将24 h和48h的增菌液原液分别划线接种mCCDA平板.（备注：也可选用CFA显色平板或SimPlate分离鉴定及定量培养基）优点：经济、方便 缺点：可能会有杂菌干扰16.n n mCCDA mCCDA平板上所挑取的可疑菌落通常平板上所挑取的可疑菌落通常带带有有金属光金属光泽泽、扁平、湿、扁平、湿润润、沿划、沿划线线生生长长。17.n nCFA显色平板上所挑取的可疑菌落为红色、突起、湿润，菌落较小直径约23mm，边缘有一圈红色的透明环，中间有一个圆形的不透明、颜色较深的红色小点的菌落。18.n n将所挑取的35个可疑菌接种到不含抗生素的哥伦比亚血琼脂平板，微需氧条件下420.5培养24 h-48h后，进行后续的空肠弯曲菌鉴定。19.空空肠弯曲菌的弯曲菌的鉴定定n n快速鉴定 1.形态与动力性检测 *对挑取菌落进行革兰氏染色镜检，空肠弯曲菌为革兰氏阴性，弯曲如小逗点状，两菌体的末端相接时，呈S形、海鸥展翅状或螺旋状。*对挑取可疑菌落制作湿片，镜检可见本菌呈螺旋样运动。20.快速快速鉴定定 2.氧化酶试验 使用铂/铱接种环或玻璃棒，挑取单个菌落的一部分，然后接种到用氧化酶试剂润湿的滤纸上，如果在10秒内出现紫红色、紫罗兰或深蓝色为阳性，弯曲菌则为阳性。21.快速快速鉴定定3.过氧化氢酶检测 挑取一环菌落培养物，加到在干净显微镜玻片上的一滴3过氧化氢溶液中，如果在30秒内出现气泡则判定结果为阳性。22.快速快速鉴定定4.马尿酸盐水解试验 挑取欲检测的菌落培养物，加到盛有0.4mL 1的马尿酸钠的试管中制成菌悬液，注意不要带入培养基琼脂。混合均匀后在37水浴中温育2 h或36培养箱中温育4 h。轻轻地在马尿酸盐溶液的顶部加入0.2mL茚三酮溶液，不要振荡，在37水浴或36培养箱中温育10 min后判读结果。若出现黑紫色则为阳性；若出现淡紫色或没有颜色变化则为阴性。23.快速快速鉴定定5.吲哚乙酸脂水解试验 挑取欲检测的菌落培养物，加到羟基吲哚醋酸盐纸片上面，再滴加一滴灭菌蒸馏水。如果吲哚乙酸脂水解，则在510min内出现深蓝色；若没有颜色变化则表示水解反应没有发生。24.n n后续鉴定 1.微需氧条件下25生长试验 2.有氧条件下420.5生长试验 3.先锋霉素（头孢霉素）的敏感性检测 （可选）ISO：奈啶酮酸的敏感性检测 （越来越多的C.jejuni与C.coli的非特异 性菌株出现）25.后后续鉴定定n n微需氧条件下25生长试验 挑取欲检测的菌落培养物，接种到哥伦比亚血琼脂平板上，25微需氧条件下培养484h，若为空肠弯曲菌则不出现生长。26.后后续鉴定定n n有氧条件下420.5生长试验 挑取欲检测的菌落培养物，接种到哥伦比亚血琼脂平板上，420.5有氧条件下培养484 h，若为空肠弯曲菌则不出现生长。27.后后续鉴定定n n先先锋锋霉素（霉素（头孢头孢霉素）的敏感性霉素）的敏感性检测检测（可（可选选）挑取菌落培养物，在布氏肉挑取菌落培养物，在布氏肉汤汤中制中制备备成成浓浓度度为为0.5 0.5 McFarlandMcFarland的菌的菌悬悬液，再用布氏肉液，再用布氏肉汤汤制制备备1 1：1010的稀的稀释释液，在液，在5 5Mueller HintonMueller Hinton血血琼琼脂平板上脂平板上进进行涂布，行涂布，静置静置5min5min后去除多余液体，将平板在后去除多余液体，将平板在3636培养箱培养箱中放置中放置10 min10 min。将先。将先锋锋霉素（霉素（头孢头孢霉素）霉素）药药敏敏纸纸片放在片放在琼琼脂表面。培养皿盖子在上面，脂表面。培养皿盖子在上面，3636微需微需氧条件下将平板培养氧条件下将平板培养222h222h。如果。如果细细菌菌紧贴紧贴着着纸纸片片生生长则为长则为有抗性；如果有抗性；如果纸纸片周片周围围出出现现不同程度的不同程度的细细菌抑制生菌抑制生长则为长则为敏感敏感 28.n n主要弯曲菌的生化特性与主要弯曲菌的生化特性与鉴定表：定表：空空肠肠弯曲菌弯曲菌 结肠结肠弯曲菌弯曲菌 海海鸥鸥弯曲菌弯曲菌 乌乌普普萨萨拉弯曲菌拉弯曲菌.形形态态、动动力性：力性：革革兰兰氏阴性，弯曲如小逗点状，两菌体的末端相接氏阴性，弯曲如小逗点状，两菌体的末端相接时时呈呈S S形或形或 螺螺 旋状或海旋状或海鸥鸥展翅状，并呈展翅状，并呈现现螺旋螺旋样样运运动动氧化氧化酶试验酶试验：阳阳 性性过过氧化氧化氢酶试验氢酶试验：或或微弱微弱马马尿酸尿酸盐盐水解水解试验试验：吲哚吲哚乙酸脂水解乙酸脂水解试验试验：先先锋锋霉素敏感性：霉素敏感性：R R R SR R R S微需氧条件微需氧条件2525生生长试验长试验：不生不生长长有氧条件有氧条件4242生生长试验长试验：不生不生长长 （注：（注：阳性；阳性；阴性；阴性；S S 敏感；敏感；R R 有抗性）有抗性）29.已已试用用过的弯曲菌生化的弯曲菌生化鉴定与定与筛选检测的商品化的商品化试剂n n C.1 弯曲菌的生化弯曲菌的生化鉴定系定系统 C.1.1 API为手工生化鉴定系统，用于弯曲菌的菌种鉴定，鉴定结果准确，所需时间1天。（需要一定的技术与经验积累）C.1.2 VITEK 2 为自动生化鉴定系统，可以鉴定出空肠弯曲菌空肠亚种、结肠弯曲菌、胎儿弯曲菌胎儿亚种，且结果准确，操作简便，所需时间6小时左右。30.微生物微生物API鉴定系定系统 31.C.2 弯曲菌的弯曲菌的筛选检测方法方法 C.2.1 miniVidas用于弯曲菌的初筛，原理为酶联荧光免疫分析(ELFA)方法。对于结果阴性的可以直接判定为阴性，对于结果阳性的需进一步确认，可比传统方法快2天。（具体参照厂家说明）C.2.2 BAX系统原理为利用PCR进行基因检测，用于空肠弯曲菌和大肠弯曲菌的筛选，阳性结果仍需确认。32.空空空空肠肠弯曲菌弯曲菌弯曲菌弯曲菌检测检测流程流程流程流程样本制本制备增菌增菌检测样本本+选择性增菌性增菌 肉肉汤微需氧培养微需氧培养 阴性阴性结果果无空无空肠弯曲菌弯曲菌初初筛方法方法检测 选择性平板性平板进行分行分纯培养培养阳性阳性结果果经经典培养典培养典培养典培养鉴鉴定方法定方法定方法定方法微生物手工微生物手工微生物手工微生物手工/自自自自动动生化生化生化生化鉴鉴定系定系定系定系统统基因基因鉴定方法定方法33.谢谢大家！34.后面内容直接删除就行资料可以编辑修改使用资料可以编辑修改使用35.主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！36.致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求37.感感谢您的您的观看和下看和下载The user can demonstrate on a projector or computer,or print the presentation and make it into a film to be used in a wider field38.