胶体金法各种方法法原理.doc

金-F14A-FABP
羊抗鼠IgG

双抗体夹心法原理
以FABP为例（检测抗原）
金-F14A-羊抗鼠IgG

样品（血清）含FABP蛋白
阳性反应

金-F14A-FABP
金-F14A-FABP-F14A

金标记F14A抗体

显示红色
显示红色

阳性反应

阴性反应

金-F14A-羊抗鼠IgG

不显色
显示红色
金标记F14A抗体

Y1=F14A（标记了胶体金）
Y2=F104B（固定在NC膜上即T线）
Y3=羊抗鼠IgG（固定在NC膜上即C线）
此方法较常用，主要用于较大分子量的蛋白（抗原）的检测。要求两株抗体针对一个抗原的不同位点才可以。也有个别的检测项目是双抗原夹心检测抗体的，原理类似。

竞争法原理
以吗啡为例（检测抗原）
阳性反应

金-吗啡抗体-吗啡
显示红色

不显色
吗啡-BSA
金-吗啡抗体-吗啡
羊抗鼠
金标记吗啡抗体
样品（尿液）含吗啡

阳性反应

阴性反应

阴性尿液抗体-吗啡
羊抗鼠
金-吗啡抗体-羊抗鼠
金标记吗啡抗体
显示红色

显示红色

Y1=胶体金标记的吗啡单抗
Y2=吗啡-BSA偶联物
Y3=羊抗鼠
此方法主要用于小分子抗原（毒品、农药、肽链等）的检测。由于抗原分子量小不能直接固定于NC膜上，常常用化学方法把小分子偶联到BSA等大分子物质上再固定于NC膜上。此结果与双抗原夹心法相反，阴性CT两条都是红线，阳性只有C线一条红线。

间接法原理
显示红色

显示红色

以HIV为例（检测抗体）
不显色
显示红色

此方法主要用于血清中抗体检测，纯化或者重组的抗原固定于NC膜上，标记多为蛋白A(ProteinA或叫SPA，抗体Fc端结合而与其它蛋白质不结合)。此方法要求胶体金过量，一般来说样品再加入前需要稀释或者加极少量后再加缓冲液。
斑点免疫渗滤法使用就是间接法。