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广 东 化 工 2023 年 第 4 期 94 第 50 卷 总第 486 期 复方板蓝根颗粒中有效成分研究进展复方板蓝根颗粒中有效成分研究进展 颜晓维，何蓉，刘芳(湖南科技职业学院药学院，湖南 长沙 410200)摘 要复方板蓝根颗粒是一种常见中药成方制剂，由板蓝根和大青叶 2 味药材经传统的水煎醇沉法制备而成，有清热解毒、凉血的功效，用于温病发热、风热感冒、咽喉肿烂。多年来，该制剂质量标准没有变化更新，制剂中有效成分的定性和定量研究还欠缺系统的整理。本文通过查阅近十年相关文献，对复方板蓝根颗粒的有效成分研究现状进行综述，以期为后续质量标准的提升提供参考。关键词复方板蓝根颗粒；板蓝根；大青叶；有效成分；质量标准 中图分类号R917 文献标识码A 文章编号1007-1865(2023)04-0094-02 Research Orogress of Effective Components in Compound Banlangen Granules Yan Xiaowei,He Rong,Liu Fang(School of Pharmacy Hunan Vocational College of Science and Technology,Changsha 410200,China)Abstract:Compound radix isatidis granule is a common chinese medicine prescription preparation,prepared by the traditional decoction alcohol sinking method of isatis root and folium isatidis 2 flavor herbs,which have the effect of clearing heat,detoxification and cooling blood,and are used for warm fever,wind fever and cold,throat swelling is.Over the years,the quality standards of the preparation have not changed and updated,the qualitative and quantitative research on the active ingredients in the preparation has not been systematically sorted out.This paper reviews the current status of the active ingredients of the compound radix isatidis granule by consulting the relevant literature in the past ten years,in order to provide a reference for the subsequent improvement of quality standards.Keywords:compound Isatidis root granule；isatis root；folium isatidis；the active ingredients；quality standard 1 背景背景 菘蓝的药用价值高，是一种临床常用中药材，通常分部位入药，干燥叶为大青叶，干燥根为板蓝根，临床多用于抗病毒感染。菘蓝野生种质资源较少，现以栽培种植为主，喜欢山地林缘较湿润的环境。复方板蓝根颗粒的处方中仅有两味药材，大青叶占 60%，板蓝根(占 40%)，辅料为淀粉和蔗糖，制备工艺很传统水提醇沉法。多年来，复方板蓝根颗粒的质量标准没有变化更新，并不能系统、全面地评价该产品1。本文根据近 10 余年报道的科研成果和相关文献，对复方板蓝根颗粒各化学成分研究进行了系统综述，为后续复方板蓝根颗粒标准的研究与产品评价提供参考。2 主要有效成分主要有效成分 复方板蓝根颗粒制剂处方、工艺简单，但化学成分复杂。陈丹等人2对复方板蓝根颗粒 HPLC 指纹图谱进行了研究，对市场上同一生产厂家的 10 批次复方板蓝根颗粒进行 HPLC 指纹图谱分析，发现 10 批次的 HPLC 图谱中均有非常复杂的出峰情况，但是各批次图谱之间出峰保留时间及峰面积均符合一定规律，说明复方板蓝根颗粒中的化学成分复杂，但在同一生产厂家的生产工艺条件下，有效成分的种类及含量是稳定的，是值得进一步研究确定标准的。闫峻等人3对复方板蓝根颗粒建立的质谱指纹图、王卿等人4对复方板蓝根颗粒建立的 TLC和 HPLC 指纹图谱均证实了这一点。2.1(R,S)-告依春研究概况(R,S)-告依春是一对对映异构体，又名表告依春，具有较强的抗病毒活性，而且在板蓝根药材中的含有量比较稳定，是板蓝根药材含量控制成分，也属于板蓝根特征性成分。在 2020版中国药典第一部中，板蓝根原药材中不仅对(R,S)-告依春进行 TLC 定性鉴别，还对该成分进行了 HPLC 的含量测定。目前，多采用色谱法对其进行质量检测，且以高效液相色谱法为主，但是色谱条件的选择以及对样品的前处理较有不同。张慧晔等人5采用HPLC法，样品仅以水为溶解进行摇匀溶解处理，10批次样品中的表告依春含量值为0.0960.130 mg/g。全维明等人6采用HPLC，样品通过以75%乙醇为溶剂，超声提取30 min后，蒸干、水溶解的方式进行处理，3批次样品中的表告依春含量值分别为0.680 mg/g、0.701 mg/g、0.731 mg/g。李兴东等人7采用HPLC法，样品以水为溶剂，超声30 min进行提取，3批次样品中的(R,S)-告依春含量值分别为69.86 g/g，67.66 g/g 和 70.11 g/g，并建议复方板蓝根颗粒中(R,S)-告依春不得少于 64 g/g。郑程等人8采用 TLC 法定性分析，采用HPLC 法定量分析：定性仅针对随机一份样品，样品处理方式为水溶解、二氯甲烷萃取、浓缩，对照品为甲醇溶解，样品平行点样 10 次，文中所展示的色谱原图斑点清晰，与(R,S)-告依春对照品斑点位置比较，3 次对应斑点清晰明亮，4 次对应斑点较暗淡，3次基本观察不到斑点，排除薄层色谱的本身误差，也可能是因为(R,S)-告依春的稳定性较差所致；定量分析，样品以水为溶剂，超声(功率为250 W，频率为40 kHz)15 min进行提取，发现26个批次样品中仅检测到12个批次的(R,S)-告依春含量值，且数值相差较大，最低为0.0169 mg/袋(=0.0011 mg/g)，最高的为 0.4684 mg/袋(=0.0312 mg/g)。谭敏洁等人9采用HPLC 法，样品以水为溶剂，60 超声(功率为 300 W，频率为40 kHz)45 min进行提取，结果8个批次样品的(R,S)-告依春含量未检测到或低于检测限，另外26个批次的含量值也相差较大，最低为0.0193 mg/袋(=0.0013 mg/g)，最高的为0.4229 mg/袋(=0.0282 mg/g)。罗华玲等人10应用液质联用(HPLC-MS/MS)法，样品以三氯甲烷为溶剂回流提取，8批次样品中的(R,S)-告依春含量值为1.5322.682 mg/15 g/袋(=0.10210.1788 mg/g)。李柯等人11采用 HPLC 法，样品以 50%甲醇为溶剂，超声(功率500 W，频率 40 kHz)10 min 进行提取，结果显示(R,S)-告依春稳定性不好含量较低(含量值跳动在 0.63.3 mg/袋之间，均值1.4 mg/袋)，不适宜作为含量测定指标或含量控制成分。综合上述文献，(R,S)-告依春成分在各生产企业各批次的复方板蓝根颗粒中含量均比较低，且并不稳定，除了各色谱条件选择以及样品前处理的差异原因外，还与原药材的质量以及生产工艺条件有关。因为有文献报道12，板蓝根中可能存在一种转换酶，将芥子苷类化合物表原告依春和原告依春降解为(R,S)-告依春，煎煮或沸水浴可使该酶失活。而且(R,S)-告依春本身的化学稳定性较差13-14，以致含有板蓝根的成方制剂中的(R,S)-告依春含量不稳定，方宇等人15研究感冒解毒灵颗粒中(R,S)-告依春的稳定性时，发现(R,S)-告依春仅在 25 2 相对湿度 65%5%条件下基本稳定，若室温或湿度变化增加均会对感冒解毒灵颗粒中已有的(R,S)-告依春结构产生较大影响，以致含量下降。目前，复方板蓝根颗粒的包装一般为复合膜袋，贮藏条件仅为密封、防潮，但是外界室温如若发生变化，势必也会对制剂中(R,S)-告依春的含量产生影响。因此，结合(R,S)-告依春的固有理化特性、各生产企业之间的制备工艺条收稿日期 2022-08-03 基金项目 本文系 2021 年度湖南科技职业学院校级课题研究成果(KJ21229)作者简介 颜晓维(1989-)，女，湖南湘潭人，硕士研究生，讲师，主要研究方向为药物化学。2023 年 第 4 期 广 东 化 工 第 50 卷 总第 486 期 95 件差异和原药材的来源不同，导致上述文献中采用不同条件或方法检测得到的结果差异较大。如何保证复方板蓝根颗粒(或其他含板蓝根成分的制剂)中的(R,S)-告依春含量稳定仍是一个需要解决的问题，包括对制剂生产后的贮藏及包装要求均要考虑在内。2.2 核苷研究概况 核苷类物质也是一类主要抗病毒活性成分，在板蓝根中主要存在有腺苷、尿苷和鸟苷等。但是在 2020 版中国药典第一部中，板蓝根原药材中缺乏对核苷类成分的鉴别和含量测定标准。目前，多数文献对于复方板蓝根颗粒中核苷类成分的质量检测手段主要是 HPLC 法，为了节省人力物力，与(R,S)-告依春同时进行检测。张慧晔等人5采用 HPLC 法检测，10批次样品中尿苷、腺苷含量分别为 0.1000.209 mg/g、0.0540.078 mg/g。郑程等人8采用 HPLC 法检测，尿苷、鸟苷 和 腺 苷 含 量 分 别 为0.12552.5232 mg/15 g/袋(=0.00840.1682 mg/g，1个批次未检测到或低于检测限)、0.01121.3123 mg/15 g/袋(=0.00070.0875 mg/g，4个批次未检测到或低于检测限)、0.06151.6128 m/15 g/袋(=0.00410.1075 mg/g，2个批次未检测到或低于检测限)。谭敏洁等人9采用HPLC法检测，腺苷含量值为0.03131.7649 mg/袋(=0.00210.1177 mg/g)。李柯等人11采用上述 HPLC 条件下检测，尿苷、鸟苷和腺苷含量分别为 3.36.5 mg/袋(=0.220.43 mg/g)、2.14.0 mg/袋(=0.140.27 mg/g)、1.73.8 mg/袋(=0.110.25 mg/g)，尿苷、鸟苷和腺苷总含量为 8.014.0 mg/15 g/袋(=0.530.93 mg/g)，含量稳定性良好；后续又对另外32批次样品的三种核苷总量进行测定，各个厂家之间其总含量相差较大，最低为0.47 mg/15 g/袋(=0.0313 mg/g)，最高的为 10.30 mg/15 g/袋(=0.6867 mg/g)，建议复方板蓝根颗粒中这三种核苷的总量不得少于 3.0 mg/15 g/袋(=0.2000 mg/g)。综合分析上述文献报道，各生产企业之间复方板蓝根颗粒中各类核苷成分含量差异较大，较多采用检测多种核苷成分总量的方法进行制剂质量控制，但要确保药品质量，还是需要建立全过程的质量控制体系。2.3 氨基酸研究概况 板蓝根和大青叶中含有的氨基酸非常丰富多样，在 2020版中国药典第一部中，板蓝根原药材中特别对精氨酸进行了 TLC 定性鉴别，但并没有对该成分进行含量测定。原药材中的氨基酸有游离型和结合型两种，其中具有抗炎抗病毒活性的以结合型为主，但是定量结合型氨基酸，一般需要先水解，该过程时间较长，影响条件较多，水解产物不单一，过程复杂，欠缺较高的结果准确性。目前较多的报道主要是以 L-脯氨酸、精氨酸、亮氨酸等为指标性成分，进行定性分析，缺少定量研究。郑程等人8采用 TLC 法，定性分析样品中精氨酸、亮氨酸，样品、大青叶对照药材和板蓝根对照药材的处理方式为:以乙醇为溶剂超声、滤液浓缩的方式进行处理；对照品溶液为精氨酸、亮氨酸对照品的乙醇溶液；薄层板选用常规硅胶 G薄 层 板，展 开 剂 为 正 丁 醇(A)-冰 醋 酸(B)-水(C)(VAVBVC=1955)，一次展开，选用茚三酮试液进行显色，供试品溶液平行点样 10 次，文中所展示的色谱原图斑点清晰，与精氨酸和亮氨酸斑点位置比较：9 次对应斑点清晰明亮，1 次对应斑点较暗淡(9 号)。谭敏洁等人9采用 TLC法，定性分析样品中脯氨酸、亮氨酸，药材、对照药材、对照品以及色谱条件与郑程等人基本一致，所得色谱原图斑点清晰，供试品溶液的 8 次平行色谱图与对照品色谱图斑点位置进行比较可见，4 次对应斑点清晰明亮，4 次对应斑点较暗淡(4、5、6、7 号)。李柯等人11采用薄层色谱法，对复方板蓝根颗粒中 L-脯氨酸、精氨酸、亮氨酸进行定性鉴别，药材、对照药材、对照品以及色谱条件与郑程等人基本一致，所得色谱原图斑点清晰，斑点颜色区分明显，供试品溶液的 3 次平行色谱图与对照品色谱图斑点位置进行比较可见对应斑点均清晰明亮。综合文献资料，复方板蓝根颗粒中的氨基酸类成分由于种类较多且复杂，其专属特征研究较欠缺，比较适用于鉴别类项目的质量控制(以 TLC 法为主)，暂不适于作为含量测定项目的指标成分。2.4 靛玉红研究概况 靛玉红是大青叶中一种脂溶性有效成分，是大青叶原药材含量控制成分，也属于大青叶特征性成分。在 2020 版中国药典 第一部中，板蓝根大青叶原药材中不仅对靛玉红进行了TLC 定性鉴别，还对其进行了 HPLC 含量测定。然而，复方板蓝根颗粒制备工艺为水提醇沉法，因此即使在煮沸时靛玉红溶解也很少16。针对复方板蓝根颗粒中靛玉红的文献报道，主要以定性为主，郑程等人8、谭敏洁等人9、李柯等人11均采用 TLC 法对其进行鉴别，但是对于样品与大青叶对照药材的提取处理方法略有不同，郑程等人8采用水溶解、二氯甲烷萃取、浓缩的方式进行处理，谭敏洁等人9采用氯仿为溶剂、回流提取、滤液浓缩的方式进行处理，李柯等人11采用水+氯仿(11)为溶剂、回流提取、氯仿层浓缩的方式进行处理，结果均可证明制剂中靛玉红的存在。个别定量研究数据也证实了目前制备工艺对靛玉红溶出有较大影响，含量不高，罗华玲等人10应用液质联用(HPLC-MS/MS)法，对市售的8批次样品中的(R,S)-告依春、靛玉红的含量进行同时检测，8批次样品中的靛玉红含量值为0.2640.821 mg/15 g/袋(=0.01760.0547 mg/g)。2.5 多糖研究概况 复方板蓝根颗粒的原药材在水提醇沉法的工艺中，多糖溶出有限，而且多糖组分复杂，受提取条件影响也容易发生水解等变化。2014 年，陈吉业等人17采用乙醇提取、硫酸恒温降解、毛细管区带电泳法检测的方式，得知复方板蓝根颗粒中多糖的单糖组成较多，各生产厂家之间的差异主要是其单糖含量比例不同。3 结论结论 由于复方板蓝根颗粒中各有效成分的复杂性、不同的理化特性、各生产企业之间制备工艺条件的差异以及原药材来源的不同，导致相关报道中对采集的市售复方板蓝根颗粒的研究结果也产生了较大差异，但是也有一定规律：一般认为(R,S)-告依春和核苷是制剂的重要抗病毒成分，但要作为指标成分进行质量控制的前提，还是需要建立全过程质量控制体系；复方板蓝根颗粒中具有抗病毒活性的氨基酸主要是结合型氨基酸，目前其含量的检测方法并不简便准确，暂时比较适于作为鉴别项目的指标成分；靛玉红、多糖在水煎醇沉的制备工艺中溶出度低，比较适于作为鉴别项目的指标成分。参考文献参考文献 1彭婷婷，江勋，周峰复方板蓝根颗粒及板蓝根的质量研究概况J中成药，2017，39(12)：2573-2575 2陈丹，戚建中，符国成，等 复方板蓝根颗粒 HPLC 指纹图谱研究J 中国民族民间医药，2022，31(09)：40-44 3闫峻，刘舒，李伯平，等复方板蓝根颗粒 APCI-MS 指纹图谱及化学成分的 LC-APCI-MSn 研究J质谱学报，2017，38(03)：320-327 4王卿，张彦南，郑艳萍，等市售复方板蓝根颗粒质量对比研究J中医临床研究，2016，8(04)：44-46 5张慧晔，罗杰，黄亦南，等HPLC 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