染色体制备及识别.ppt

染色体制备及识别染色体制备及识别人类淋巴细胞染色体制备、G显带及核型分析淋巴细胞染色体制备一、常用设备一、常用设备 无菌工作台无菌工作台 隔水式电热恒温培养箱隔水式电热恒温培养箱 电热式水浴箱电热式水浴箱 电热干燥箱电热干燥箱 光学显微镜光学显微镜 离心机离心机二、常用试剂二、常用试剂 培养基（1640）新生小牛血清 植物血球凝集素（PHA）双抗（青、链霉素）抗凝剂（肝素，EDTA）秋水仙碱（胺）甲醇、冰乙酸 胰蛋白酶 Giemsa染液 三、常用易耗品三、常用易耗品 玻璃培养瓶 刻度玻璃离心管 翻口胶塞 玻璃滴管 载玻片四、细胞培养和四、细胞培养和G显带染色体制备显带染色体制备1 细胞培养细胞培养1640+10%牛血清+PHA 种全血0.5ml 37 培养70h 加秋水仙碱 2h2 染色体制备染色体制备 培养物 离心（2000转/分钟）去上清 加 0.075M KCL 低渗处理 加1ml3:1甲醇、冰乙酸 离心 甲醇、冰乙酸固定二次 滴片 60 烤片2h3 G显带显带 0.025%胰蛋白酶染色体玻片 处理30-90秒 2-5%Giemsa染色5-10分钟 自来水蒸馏水冲洗 干燥 显微镜观察4 染色体计数和核型分析染色体计数和核型分析染色体计数：一般情况下计数30个分裂相，遇嵌合体或性畸型时计数100个分裂相核型分析：一般分析3个分裂相 G显带染色体识别1 2 34 5 6 78 9 10 1112 13 14 1516 17 18 19X20 21 22 Y1 2 3 4 5 6 7 X8 9 10 11 12 13 14 1516 17 18 19 20 21 22 Y