第1章--《植物组织培养实验室的构建和操作技术》复习题及参考答案.doc

(完整word)第1章 《植物组织培养实验室的构建和操作技术》复习题及参考答案
第1章 《植物组织培养实验室的构建和操作技术》参考答案
一、填空:
1、组织培养实验室必要的设备有   超净工作台、   高压灭菌器  、  空调机  、   天平  、 显微镜 、 蒸馏水发生器 、酸度计等 。
2、培养基成分主要包括    ①无机营养成分（大量元素、微量元素和铁盐） 、    ②有机营养成分（包括维生素、氨基酸等) 、  ③植物生长调节物质 、   ④碳水化合物 、 ⑤其它物质 。
3、培养基最常用的碳源是 蔗糖，使用浓度在1%-5％ 常用 3 %。
4、糖在植物组织培养中是不可缺少的,它不但作为离体组织赖以生长的  碳源  ，而且还能维持   培养基渗透压  。
5、在固体培养时琼脂是使用最方便、最好的 凝固剂和支持物 ，一般用量为 6—10g／L 之间。
6、驯化的目的： 在于提高试管苗对外界环境条件的适应性，提高其光合作用的能力，促使试健壮,提高苗的移裁成活率   。
7、生长素/细胞分裂素的高低决定着外植体的发育方向，其比值
高：有利于 根的形成和愈伤组织 的形成；
低:有利于 芽 的形成。
8、培养基灭菌一般在 108 kPa的压力下,锅内温度达 121 ℃ ，维持 20—30 min.
9、选择外植体时应选择 ①选择优良的种质、②选健壮的植株 、③选最适的时期 和④选取适宜的大小 。
10、诱导胚状体比诱导芽的优点： (1）数量多 、 （2）速度快 、 （3）结构完整 。
11、试管苗的生态环境： 高温且恒温 、 高湿 、 弱光 、 无菌 。
12、培养基中加入活性炭的目的： 利用其吸附能力，减少一些有害物质的影响 .

二、名词解释
1、MS培养基（ MS culture medium）:它是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。是目前应用最广泛的培养基。特点是无机盐离子浓度较高,有高含量的N、K，硝酸盐量大，营养丰富。
2、母液：是欲配制液的浓缩液。配成比所需浓度高10—100倍.母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等.好处： ①保证各物质成分的准确性 ②配制时的快速移取③便于低温保藏。
3、褐变：是指外植体在培养中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质,有时使整个培养基变褐，从而抑制其他酶的活性，影响材料的培养。
4、玻璃化现象（vitrification phenomenon):在长期的离体培养繁殖时,有些试管苗的嫩茎、叶片呈现半透明水渍状，这种现象称为玻璃化。
5、消毒：指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用.
6、灭菌：是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体,即把所有生命的物质全部杀死.
7、接种:在无菌条件下，用灼烧过的镊子将外植体放到培养基上的操作过程。

三、问答题
1、一般组织培养的操作工序：
（1）、培养器皿的清洗;
(2）、培养基的配制、分装和高压灭菌；
（3)、无菌操作—-材料的表面灭菌和接种；
（4）、将培养物放到培养室培养;
（5）、试管苗的驯化、移栽和初期管理。
2、固体培养基与液体培养基相比有何特点?
优点：操作简便，通气问题易于解决，便于经常观察研究。
缺点：培养物与培养基的接触(即吸收)面积小，各种养分在琼脂中扩散较慢,影响养分的充分利用，同时培养物排出的一些代谢废物，聚集在吸收表面，对组织产生毒害作用.
3、论述植物生长调节物质在组织培养中的作用？ 并列举常见的种类
(1) 生长素类：主要被用于诱导愈伤组织形成，促进细胞脱分化；促进细胞伸长；诱导根的分化，促进生根
(2) IAA(吲哚乙酸） ；NAA(萘乙酸）；IBA（吲哚丁酸）; 2,4—D（2，4—二氯苯氧乙酸）
(3）细胞分裂素类： ①诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。②促进细胞分裂与扩大。③抑制根的分化。抑制衰老，减少叶绿素分解,有保鲜效果。
(4) 包括6—BA（6-苄基腺嘌呤)、Kt ( 激动素)、Zt (玉米素）等。
4、在培养基中加入活性炭有什么作用？
(1）主要是利用其吸附作用，减少一些有害物质的影响
（2）活性炭使培养基变黑，有利于某些植物生根
（3）对形态发生和器官形成有良好的效应
5、常用的培养基有哪些？说明其特点
(1)MS培养基：1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。是目前应用最广泛的培养基.特点是无机盐离子浓度较高
(2) hite培养基：无机机盐浓度较低，适于生根培养。
(3）N6培养基: KNO3和（NH4）2SO4含量高，不含钼。广泛应用于禾谷类植物的花粉和花药培养.
(4）B5培养基：主要特点是含有较低的铵盐，较高的硝酸盐和盐酸硫胺素.适宜双子叶植物特别是木本植物的培养
(5) M-8P培养基：为原生质体培养而设计的。其特点是有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素
6、植物组织培养技术主要包括哪些环节?各环节的主要工作内容？
（1）培养基的配制及灭菌
（2）外植体的选择及灭菌
（3）外植体的接种及培养
(4）试管苗的驯化与移栽
7、如何配制组织培养用的培养基？
(1）配制母液:一般母液配成比所需浓度高10—100倍的浓缩液，配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。
(2) 配制方法:
①将母液按顺序摆放
②取适量的蒸馏水入容器
③按需要量依次取母液及生长调节物质
④加入蔗糖（30g/L）溶解
⑤定容
⑥调PH值
⑦分装培养瓶，并加琼脂(6-10g/L)，封口
⑧高压灭菌
8、组织培养中常用的灭菌方法？
n分为物理的和化学的两类,
(1）物理方法如干热(烘烧和灼烧)、湿热(常压或高压蒸煮）、射线处理（紫外线、超声波、微波)、过滤和大量无菌水冲洗等措施；
（2）化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏儿、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。
9、怎样进行培养基的高压湿热灭菌？
方法是：关闭放气阀,通电后，待压力上升到49kPa时，打开放气阀,放出空气(注意完全排除锅内空气,使锅内全部是水蒸气,灭菌才能彻底），待压力表指针归零后，再关闭放气阀。当压力表上升达到108kPa时,锅内温度达121℃（在此蒸气温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢），维持20—30min。
10、如何对外植体进行表面消毒？
（1) 将需要的材料用水洗干净.
(2) 表面灭菌：用70%酒精浸30-60s左右。
(3) 灭菌剂处理:0.1％升汞10分钟、或在10％漂白粉上清液中浸泡10—15分钟。
(4) 用无菌水冲洗3-5次左右
11、无菌操作时应注意哪些事项？
（1） 在接种4h前用甲醛熏蒸接种室;
（2） 在接种前15-20min，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯;
（3） 接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等；
（4） 上工作台后，用酒精棉球擦拭双手,特别是指甲处。然后70%酒精喷雾降尘,并擦拭工作台面；
（5） 接种工具蘸95%酒精,灼烧；
（6） 接种时将试管斜着,使试管口在酒精灯火焰上转动，灼烧数秒钟。接完种后,将管口在火焰上再灼烧数秒钟。
（7) 接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等;
(8) 接种完毕后要清理干净并用酒精擦工作台。
12、接种后离体培养物对光、温、湿等环境条件的要求？
（1) 光照:愈伤组织的诱导不需光照或弱光，器官分化需要光照，一般12－16h/d，光照度1000－5000lx。
（2) 温度：一般25±2℃
（3） 湿度:培养室内的湿度要求保持70％－80％的相对湿度。
13、在植物组织培养中，通过哪些途径可以得到完整的植株？
(1） 外植体→愈伤组织→根、芽→试管苗
①同时长芽和根
②先长芽，再长根
③先长根，再长芽
(2） 外植体→胚状体→试管苗
（3) 外植体→根、芽→试管苗。
14、论述离体培养可能出现的异常现象及防止措施？
（1）污染：污染原因从病源分面主要有细菌和真菌和两大类。
预防措施:（1)减少或防止材料带菌（2）外植体灭菌要彻底
（3）玻璃器皿和金属器皿的灭菌 (4）布质制品的灭菌（5）无菌室的消毒(6)操作人员一定要严格按照无菌操作的程序进行接种。
(2)、褐变:防止的措施有 ：选择适宜的外植体及最佳培养基、连续转移、加抗氧化剂、加活性剂。
（3）、玻璃化现象，预防措施:
①适当控制培养基中无机营养成分；
②适当提高培养基中蔗糖和琼脂浓度；
③适当降低细胞分裂素和赤霉素浓度，增加生长素量;
④增加自然光照，控制光照时间；
⑤控制好培养温度;
⑥增加容器通风,最好进行CO2施肥
15、与常规苗相比，试管苗具有哪些特点?
（1）生长细弱；
(2）光合作用差
(3)叶片气孔数目少，活性差
（4）根的吸收功能弱
(5)对逆境的适应和抵抗能力差
16、如何提高试管苗移栽的成活率？
(1）试管苗的生理状况 应选择壮苗，以提高移栽后的成活率
(2）加入植物生长调节物质 如生长素
（3）降低无机盐的浓度
（4）加入少量活性炭，尤其是用酸、碱和有机溶剂洗过的活性炭
（5）环境因子 适当的环境条件能提高移栽的成活率
（6)移栽过程中让试管苗从无菌向有菌逐渐过渡