第1章--《植物组织培养实验室的构建和操作技术》复习题及参考答案.doc

(完整word)第1章 植物组织培养实验室的构建和操作技术复习题及参考答案第1章 植物组织培养实验室的构建和操作技术参考答案一、填空:1、组织培养实验室必要的设备有超净工作台、高压灭菌器 、空调机、天平 、显微镜 、 蒸馏水发生器 、酸度计等 。2、培养基成分主要包括无机营养成分（大量元素、微量元素和铁盐）、有机营养成分（包括维生素、氨基酸等)、植物生长调节物质、碳水化合物、其它物质。 3、培养基最常用的碳源是 蔗糖，使用浓度在1%-5 常用 3 %。4、糖在植物组织培养中是不可缺少的,它不但作为离体组织赖以生长的碳源 ，而且还能维持培养基渗透压 。 5、在固体培养时琼脂是使用最方便、最好的 凝固剂和支持物 ，一般用量为 610gL 之间。6、驯化的目的：在于提高试管苗对外界环境条件的适应性，提高其光合作用的能力，促使试健壮,提高苗的移裁成活率 。7、生长素/细胞分裂素的高低决定着外植体的发育方向，其比值 高：有利于 根的形成和愈伤组织 的形成； 低:有利于 芽 的形成。8、培养基灭菌一般在 108 kPa的压力下,锅内温度达 121 ，维持 2030 min.9、选择外植体时应选择 选择优良的种质、选健壮的植株 、选最适的时期 和选取适宜的大小 。10、诱导胚状体比诱导芽的优点： (1）数量多 、 （2）速度快 、 （3）结构完整 。11、试管苗的生态环境： 高温且恒温 、 高湿 、 弱光 、 无菌 。12、培养基中加入活性炭的目的： 利用其吸附能力，减少一些有害物质的影响 .二、名词解释1、MS培养基（ MS culture medium）:它是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。是目前应用最广泛的培养基。特点是无机盐离子浓度较高,有高含量的N、K，硝酸盐量大，营养丰富。2、母液：是欲配制液的浓缩液。配成比所需浓度高10100倍.母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等.好处： 保证各物质成分的准确性 配制时的快速移取便于低温保藏。3、褐变：是指外植体在培养中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质,有时使整个培养基变褐，从而抑制其他酶的活性，影响材料的培养。4、玻璃化现象（vitrification phenomenon):在长期的离体培养繁殖时,有些试管苗的嫩茎、叶片呈现半透明水渍状，这种现象称为玻璃化。5、消毒：指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用.6、灭菌：是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体,即把所有生命的物质全部杀死.7、接种:在无菌条件下，用灼烧过的镊子将外植体放到培养基上的操作过程。三、问答题1、一般组织培养的操作工序：（1）、培养器皿的清洗;(2）、培养基的配制、分装和高压灭菌；（3)、无菌操作-材料的表面灭菌和接种；（4）、将培养物放到培养室培养;（5）、试管苗的驯化、移栽和初期管理。2、固体培养基与液体培养基相比有何特点?优点：操作简便，通气问题易于解决，便于经常观察研究。缺点：培养物与培养基的接触(即吸收)面积小，各种养分在琼脂中扩散较慢,影响养分的充分利用，同时培养物排出的一些代谢废物，聚集在吸收表面，对组织产生毒害作用.3、论述植物生长调节物质在组织培养中的作用？ 并列举常见的种类(1) 生长素类：主要被用于诱导愈伤组织形成，促进细胞脱分化；促进细胞伸长；诱导根的分化，促进生根(2) IAA(吲哚乙酸） ；NAA(萘乙酸）；IBA（吲哚丁酸）; 2,4D（2，4二氯苯氧乙酸）(3）细胞分裂素类： 诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。促进细胞分裂与扩大。抑制根的分化。抑制衰老，减少叶绿素分解,有保鲜效果。(4) 包括6BA（6-苄基腺嘌呤)、Kt ( 激动素)、Zt (玉米素）等。4、在培养基中加入活性炭有什么作用？(1）主要是利用其吸附作用，减少一些有害物质的影响（2）活性炭使培养基变黑，有利于某些植物生根（3）对形态发生和器官形成有良好的效应5、常用的培养基有哪些？说明其特点 (1)MS培养基：1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。是目前应用最广泛的培养基.特点是无机盐离子浓度较高(2) hite培养基：无机机盐浓度较低，适于生根培养。(3）N6培养基: KNO3和（NH4）2SO4含量高，不含钼。广泛应用于禾谷类植物的花粉和花药培养.(4）B5培养基：主要特点是含有较低的铵盐，较高的硝酸盐和盐酸硫胺素.适宜双子叶植物特别是木本植物的培养(5) M-8P培养基：为原生质体培养而设计的。其特点是有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素 6、植物组织培养技术主要包括哪些环节?各环节的主要工作内容？ （1）培养基的配制及灭菌（2）外植体的选择及灭菌（3）外植体的接种及培养(4）试管苗的驯化与移栽7、如何配制组织培养用的培养基？(1）配制母液:一般母液配成比所需浓度高10100倍的浓缩液，配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。(2) 配制方法:将母液按顺序摆放取适量的蒸馏水入容器按需要量依次取母液及生长调节物质加入蔗糖（30g/L）溶解定容调PH值分装培养瓶，并加琼脂(6-10g/L)，封口高压灭菌8、组织培养中常用的灭菌方法？n分为物理的和化学的两类,(1）物理方法如干热(烘烧和灼烧)、湿热(常压或高压蒸煮）、射线处理（紫外线、超声波、微波)、过滤和大量无菌水冲洗等措施；（2）化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏儿、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。9、怎样进行培养基的高压湿热灭菌？方法是：关闭放气阀,通电后，待压力上升到49kPa时，打开放气阀,放出空气(注意完全排除锅内空气,使锅内全部是水蒸气,灭菌才能彻底），待压力表指针归零后，再关闭放气阀。当压力表上升达到108kPa时,锅内温度达121（在此蒸气温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢），维持2030min。10、如何对外植体进行表面消毒？（1) 将需要的材料用水洗干净.(2) 表面灭菌：用70%酒精浸30-60s左右。(3) 灭菌剂处理:0.1升汞10分钟、或在10漂白粉上清液中浸泡1015分钟。(4) 用无菌水冲洗3-5次左右11、无菌操作时应注意哪些事项？（1） 在接种4h前用甲醛熏蒸接种室;（2） 在接种前15-20min，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯;（3） 接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等；（4） 上工作台后，用酒精棉球擦拭双手,特别是指甲处。然后70%酒精喷雾降尘,并擦拭工作台面；（5） 接种工具蘸95%酒精,灼烧；（6） 接种时将试管斜着,使试管口在酒精灯火焰上转动，灼烧数秒钟。接完种后,将管口在火焰上再灼烧数秒钟。（7) 接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等;(8) 接种完毕后要清理干净并用酒精擦工作台。12、接种后离体培养物对光、温、湿等环境条件的要求？ （1) 光照:愈伤组织的诱导不需光照或弱光，器官分化需要光照，一般1216h/d，光照度10005000lx。（2) 温度：一般252（3） 湿度:培养室内的湿度要求保持7080的相对湿度。13、在植物组织培养中，通过哪些途径可以得到完整的植株？(1） 外植体愈伤组织根、芽试管苗同时长芽和根先长芽，再长根先长根，再长芽(2） 外植体胚状体试管苗（3) 外植体根、芽试管苗。14、论述离体培养可能出现的异常现象及防止措施？（1）污染：污染原因从病源分面主要有细菌和真菌和两大类。预防措施:（1)减少或防止材料带菌（2）外植体灭菌要彻底（3）玻璃器皿和金属器皿的灭菌 (4）布质制品的灭菌（5）无菌室的消毒(6)操作人员一定要严格按照无菌操作的程序进行接种。(2)、褐变:防止的措施有 ：选择适宜的外植体及最佳培养基、连续转移、加抗氧化剂、加活性剂。（3）、玻璃化现象，预防措施:适当控制培养基中无机营养成分；适当提高培养基中蔗糖和琼脂浓度；适当降低细胞分裂素和赤霉素浓度，增加生长素量;增加自然光照，控制光照时间；控制好培养温度;增加容器通风,最好进行CO2施肥15、与常规苗相比，试管苗具有哪些特点?（1）生长细弱；(2）光合作用差(3)叶片气孔数目少，活性差（4）根的吸收功能弱(5)对逆境的适应和抵抗能力差16、如何提高试管苗移栽的成活率？(1）试管苗的生理状况 应选择壮苗，以提高移栽后的成活率 (2）加入植物生长调节物质 如生长素 （3）降低无机盐的浓度 （4）加入少量活性炭，尤其是用酸、碱和有机溶剂洗过的活性炭 （5）环境因子 适当的环境条件能提高移栽的成活率（6)移栽过程中让试管苗从无菌向有菌逐渐过渡