第八章三萜类化合物.pptx

第八章三萜类化合物4 4、研究概况、研究概况、研究概况、研究概况 游离三萜游离三萜游离三萜游离三萜 1963 196319701970年年年年发现发现发现发现232232个个个个 1990 199019941994年年年年 发现发现发现发现330330个个个个(多为新骨架多为新骨架多为新骨架多为新骨架)三萜皂苷三萜皂苷三萜皂苷三萜皂苷 1966 196619721972年年年年鉴定了鉴定了鉴定了鉴定了3030个皂苷个皂苷个皂苷个皂苷 1987 198719891989年年年年 鉴定了鉴定了鉴定了鉴定了10001000多个皂苷多个皂苷多个皂苷多个皂苷 (尤以海洋生物中得到不少新型三萜尤以海洋生物中得到不少新型三萜尤以海洋生物中得到不少新型三萜尤以海洋生物中得到不少新型三萜)5 5、结合糖种类、结合糖种类、结合糖种类、结合糖种类 单糖单糖单糖单糖 glc glc、galgal、xylxyl、arabarab、rharha、fucfuc、glcAglcA、galA galA、quiqui等双糖、三糖、四糖等双糖、三糖、四糖等双糖、三糖、四糖等双糖、三糖、四糖 6 6、结合位置、结合位置、结合位置、结合位置 C3 C3、C28C28、C16C16、C23C23、C29C297 7、生源途径生源途径三萜类化合物得生物合成途径从生源来看三萜类化合物得生物合成途径从生源来看三萜类化合物得生物合成途径从生源来看三萜类化合物得生物合成途径从生源来看,(squalene)(squalene)(squalene)(squalene)通过不同得环化方式转变而来得通过不同得环化方式转变而来得通过不同得环化方式转变而来得通过不同得环化方式转变而来得,而鲨烯就是由焦磷酸金合欢酯而鲨烯就是由焦磷酸金合欢酯而鲨烯就是由焦磷酸金合欢酯而鲨烯就是由焦磷酸金合欢酯(farnesyl(farnesyl(farnesyl(farnesyl pyrophosphatepyrophosphatepyrophosphatepyrophosphate,FPP)FPP)FPP)FPP)尾尾缩合生成。尾尾缩合生成。尾尾缩合生成。尾尾缩合生成。焦磷酸金合欢酯焦磷酸金合欢酯第二节第二节第二节第二节 三萜类化合物得结构与分类三萜类化合物得结构与分类三萜类化合物得结构与分类三萜类化合物得结构与分类三萜三萜三萜三萜-以六分子异戊二烯为单位得聚合体。由于三萜以六分子异戊二烯为单位得聚合体。由于三萜类化合物生物活性得多样性及重要性类化合物生物活性得多样性及重要性,近年来成为中药近年来成为中药化学研究得一个热点领域化学研究得一个热点领域,而且加之现代分离、分析技而且加之现代分离、分析技术得运用术得运用,大大加快了三萜类化合物得研究进展。大大加快了三萜类化合物得研究进展。1966197219661972年间仅有年间仅有3030个皂苷结构被搞清楚个皂苷结构被搞清楚,而而1987198919871989年年2 2年多时间分离鉴定得新皂苷就有年多时间分离鉴定得新皂苷就有1000 1000 多多种。种。三萜类化合物得存在形式三萜类化合物得存在形式三萜类化合物在自然界得存在形式有游离或者与三萜类化合物在自然界得存在形式有游离或者与糖结合成苷或酯得形式存在。游离三萜化合物不糖结合成苷或酯得形式存在。游离三萜化合物不溶于水溶于水,易溶于有机溶剂。三萜苷类易于水易溶于有机溶剂。三萜苷类易于水,其水其水溶液剧烈振摇时能产生大量、持久得肥皂样泡沫溶液剧烈振摇时能产生大量、持久得肥皂样泡沫,故称为三萜皂苷。另外故称为三萜皂苷。另外,三萜皂苷多具有羧基三萜皂苷多具有羧基,所所以又常称为酸性皂苷。以又常称为酸性皂苷。三萜皂苷分类三萜皂苷分类:1、按存在形式、结构、性质分为、按存在形式、结构、性质分为:(1)三萜皂苷及苷元三萜皂苷及苷元(2)其她三萜类其她三萜类(树脂、苦味素、三萜醇、树脂、苦味素、三萜醇、三萜生物碱三萜生物碱)2、按碳环得数目分类、按碳环得数目分类:(1)链状三萜链状三萜(较少较少)(2)单环三萜单环三萜(较少较少)(3)双环三萜双环三萜(较少较少)(4)三环三萜三环三萜(较少较少)(5)四环三萜四环三萜(较多较多)l l羊毛脂甾烷型羊毛脂甾烷型 茯苓酸茯苓酸l l大戟烷型大戟烷型 大戟醇大戟醇l l达玛烷型达玛烷型 酸枣仁皂苷酸枣仁皂苷 人参皂苷人参皂苷 l l葫芦素烷型葫芦素烷型 雪胆甲素及乙素雪胆甲素及乙素l l原萜烷型原萜烷型 泽泻萜醇泽泻萜醇A、Bl l楝烷型楝烷型 川楝素川楝素l l环菠萝蜜烷型环菠萝蜜烷型 环黄芪醇环黄芪醇(6)五环三萜五环三萜(较多较多)齐墩果烷型齐墩果烷型 齐墩果酸齐墩果酸 乌苏烷型乌苏烷型 乌苏酸乌苏酸羽扇豆醇型羽扇豆醇型 白桦脂醇白桦脂醇 白桦脂酸白桦脂酸 木栓烷型木栓烷型 雷公藤酮雷公藤酮羊齿烷型和异羊齿烷型羊齿烷型和异羊齿烷型 何帕烷型和异何帕烷型何帕烷型和异何帕烷型 其她类型其她类型9大家应该也有点累了，稍作休息大家有疑问的，可以询问和交流大家有疑问的，可以询问和交流大家有疑问的，可以询问和交流大家有疑问的，可以询问和交流 羊毛脂甾烷型羊毛脂甾烷型 达玛烷型达玛烷型大戟烷型大戟烷型茯苓酸茯苓酸大戟醇大戟醇 -香树脂醇型香树脂醇型 a a-香树脂醇型香树脂醇型 羽扇豆醇型羽扇豆醇型齐墩果酸齐墩果酸熊果酸熊果酸白桦脂酸白桦脂酸第三节第三节 理化性质和溶血作用理化性质和溶血作用【物理性质】【物理性质】1 1、性状、性状 多为无定形粉末多为无定形粉末(极性较大极性较大),),具吸湿性具吸湿性;苦、苦、辛辣辛辣,有粘膜刺激性。有粘膜刺激性。2 2、熔点与旋光性、熔点与旋光性 游离态有固定熔点游离态有固定熔点;皂苷无明显熔点皂苷无明显熔点,一般一般测得得大多为分解点。三萜化合物均有旋光性。测得得大多为分解点。三萜化合物均有旋光性。【物理性质】3 3、溶解度、溶解度、溶解度、溶解度 游离态溶于有机溶剂游离态溶于有机溶剂,不溶于水不溶于水;成苷后成苷后,极性极性增强增强,可溶于水可溶于水,易溶于热水、稀醇、热甲醇、热易溶于热水、稀醇、热甲醇、热乙醇乙醇,几不溶或难溶于丙酮、乙醚等极性小得有机几不溶或难溶于丙酮、乙醚等极性小得有机几不溶或难溶于丙酮、乙醚等极性小得有机几不溶或难溶于丙酮、乙醚等极性小得有机溶剂。皂苷常用正丁醇作为分离提取得溶剂。皂溶剂。皂苷常用正丁醇作为分离提取得溶剂。皂溶剂。皂苷常用正丁醇作为分离提取得溶剂。皂溶剂。皂苷常用正丁醇作为分离提取得溶剂。皂苷有助溶性苷有助溶性苷有助溶性苷有助溶性,可促进其她成分在水中得溶解度。可促进其她成分在水中得溶解度。可促进其她成分在水中得溶解度。可促进其她成分在水中得溶解度。4 4、发泡性、发泡性 皂苷水液经剧烈震荡能产生持久性泡沫皂苷水液经剧烈震荡能产生持久性泡沫,且不因且不因加热而消失加热而消失(原因原因:降低水液表面张力降低水液表面张力)【化学性质】1 1、颜色反应、颜色反应:Liebermann-BurchardLiebermann-Burchard反应反应:浓硫酸浓硫酸浓硫酸浓硫酸-醋酐醋酐醋酐醋酐(1:20(1:20)KahlenbergKahlenberg反应反应 20%20%五氯化锑五氯化锑五氯化锑五氯化锑(或三氯化锑或三氯化锑或三氯化锑或三氯化锑得氯仿饱和得氯仿饱和液液)可用于滤纸显色可用于滤纸显色,干燥后干燥后60-7060-70加热加热,显蓝色、灰蓝色、显蓝色、灰蓝色、灰紫色等灰紫色等Rosen-HeimerRosen-Heimer反应反应 25%25%三氯乙酸三氯乙酸三氯乙酸三氯乙酸乙醇液乙醇液,可用于滤纸显可用于滤纸显色色,加热至加热至100100,猩红色猩红色,逐渐变为紫色逐渐变为紫色SalkowskiSalkowski反应反应 氯仿氯仿氯仿氯仿-浓硫酸浓硫酸浓硫酸浓硫酸,硫酸层显红色或蓝色硫酸层显红色或蓝色,氯仿氯仿层有绿色荧光出现层有绿色荧光出现2、沉淀反应皂苷水液可和一些金属盐类如铅盐、钡盐、铜盐等产生沉淀。酸性皂苷(三萜皂苷)可用中性盐如硫酸铵、乙酸铅等沉淀,中性皂苷(甾体皂苷)用碱性盐如碱式乙酸铅沉淀。因采用此法重金属离子会超标,故现在多不用。【化学性质】3 3、皂苷得水解、皂苷得水解 皂苷酸水解多采用缓和酸水解皂苷酸水解多采用缓和酸水解,两相酸水解、酶两相酸水解、酶解或解或SmithSmith降解法。其原因为降解法。其原因为:一般酸水解时一般酸水解时,易引易引起皂苷元得结构变化起皂苷元得结构变化,而得不到真正得苷元。而得不到真正得苷元。糖醛酸苷键得裂解一般采用光解法、四乙酸铅糖醛酸苷键得裂解一般采用光解法、四乙酸铅-乙酸酐法乙酸酐法,以及微生物转化法。以及微生物转化法。酯苷键得水解多采用酯苷键得水解多采用LiILiI在在2,6-2,6-二甲基吡啶二甲基吡啶/甲醇甲醇溶液中与皂苷一起回流溶液中与皂苷一起回流,本方法既不损伤苷元本方法既不损伤苷元,也也不会使糖得结构发生变化。不会使糖得结构发生变化。【化学性质】【溶血作用】皂苷具有破坏红细胞而产生溶血得现象。溶血指数:指在一定条件下(等渗、缓冲及恒温)下能使同一动物来源得血液中红细胞完全溶血得最低浓度。皂苷得溶血作用就是皂苷和红细胞壁上得胆甾醇结合,破坏血红细胞得正常渗透性,使细胞内压增加,而产生溶血。但不就是所有皂苷都具溶血作用。另外有些树脂、脂肪酸、挥发油也能产生溶血现象。第四节第四节 三萜类化合物得提取分离三萜类化合物得提取分离【提取方法】1、醇提取法最常用得提取皂苷得方法2、酸水解有机溶剂萃取法提取皂苷元得方法3、碱水提取仅适用于含羧基得皂苷提取。【分离方法】1、沉淀法 分段沉淀法利用皂苷难溶于乙醚、丙酮得性质,将皂苷溶于甲醇或乙醇,滴加乙醚或丙酮或乙醚:丙 酮(1:1)得混合物液,边加边摇,皂苷即可析出。但本法不易得到纯品。胆甾醇沉淀法利用胆甾醇能和皂苷生成复合物得性质,但三萜皂苷与胆甾醇形成得复合物没有甾体皂苷与胆甾醇形成得复合物稳定。先将皂苷和胆甾醇充分反应,然后用水、醇、乙醚顺次洗涤沉淀,以除去糖类、色素、油脂和游离得胆甾醇,再将沉淀干燥,乙醚回流,提去胆甾醇,剩下为较纯皂苷。【分离方法】2、大孔树脂法 适合皂苷得精制和初步分离。先用水洗除去糖和水溶性杂质,再用不同浓度醇浓度由低至高洗脱皂苷按极性由大到小得顺序被洗下来。【分离方法】3 3、色谱分离法、色谱分离法 吸附柱色谱法吸附柱色谱法:吸附剂为硅胶吸附剂为硅胶,流动相为氯仿流动相为氯仿-甲醇不同比例甲醇不同比例 分配柱色谱法分配柱色谱法 支持剂支持剂:硅胶硅胶 固定相固定相:3%:3%草酸水溶液草酸水溶液 流动相流动相:含水混合有机溶剂含水混合有机溶剂 反相柱色谱反相柱色谱:吸附剂为吸附剂为Rp-18Rp-18、Rp-8Rp-8或或Rp-2,Rp-2,流流动相为甲醇动相为甲醇-水水,乙腈乙腈-水水【分离方法】(3)高效液相色谱法 目前最常用,一般选用反相柱,流动相为甲醇-水,乙腈-水。(4)凝胶色谱法 应用较多得就是能在有机相使用得Sephadex LH-20。【分离方法】第五节第五节 三萜类化合物检识三萜类化合物检识【理化检识】1、泡沫试验 中药水提取液振摇后,产生持久泡沫(15分钟以上),注意假阳性反应。2、显色反应(见颜色反应)3、溶血试验 取供试液1ml,水浴蒸干,生理盐水溶解,加入几滴2%红细胞悬浮液,若发生溶血,溶液由混浊变澄明。【色谱检识】1 1、薄层色谱、薄层色谱硅胶为吸附剂硅胶为吸附剂,皂苷元展开剂为亲脂性展开剂皂苷元展开剂为亲脂性展开剂;皂皂苷得展开剂为含水有机溶剂。酸性皂苷薄层拖尾苷得展开剂为含水有机溶剂。酸性皂苷薄层拖尾,可加入少量甲酸或乙酸消除。可加入少量甲酸或乙酸消除。显色剂显色剂:10%:10%硫酸乙醇溶液、三氯乙酸试剂、香草硫酸乙醇溶液、三氯乙酸试剂、香草醛醛-浓硫酸试剂。浓硫酸试剂。2 2、纸色谱、纸色谱水为固定相水为固定相,展开剂含水量较多展开剂含水量较多,但斑点不太集中。但斑点不太集中。第六节第六节 三萜类化合物得结构研究三萜类化合物得结构研究【UV光谱】随共轭程度而变化。随共轭程度而变化。随共轭程度而变化。随共轭程度而变化。11-oxo,11-oxo,1212-齐墩果烷型化齐墩果烷型化齐墩果烷型化齐墩果烷型化合物可用合物可用合物可用合物可用UVUV判断判断判断判断18-H18-H得构得构得构得构型型型型,当当当当18-H18-H为为为为 构型构型构型构型,最大吸最大吸最大吸最大吸收在收在收在收在248-249nm,18-H248-249nm,18-H为为为为 构型构型构型构型,最大吸收在最大吸收在最大吸收在最大吸收在242-242-243nm243nm。【MS特征】EI-MS:EI-MS:皂苷得不到分子离子。皂苷得不到分子离子。游离三萜游离三萜(皂苷元皂苷元)可得到分可得到分子离子及碎片离子子离子及碎片离子(M-CH(M-CH3 3、M-OHM-OH、M-COOH)M-COOH)。齐墩果烷型齐墩果烷型:结构中含环己烯时结构中含环己烯时,可发生可发生RDARDA裂解。裂解。羽扇豆烷型羽扇豆烷型:出现一个失去异丙出现一个失去异丙基得基得M-43M-43得特征离子峰。得特征离子峰。