LY∕T 3112-2019 狐人工授精技术规程.pdf

ICS 65.020.30 B 44 LY 中 华 人 民 共 和 国 林 业 行 业 标 准 LY/T 31122019 狐人工授精技术规程 Technical regulation of fox artificial insemination （发布稿）2019-10-23 发布 2020-04-01 实施 国家林业和草原局 发 布 LY/T 31122019 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 术语和定义.1 3 授精前准备.2 4 人员要求.3 5 种狐要求.3 6 授精操作.4 7 输精后管理.7 附录 A（资料性附录）人工授精常用器材药品表.8 附录 B（资料性附录）精液品质评定方法.9 附录 C（资料性附录）发情鉴定.11 附录 D（资料性附录）人工授精常用记录表.12 LY/T 31122019 II 前 言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由全国野生动物保护管理与经营利用标准化技术委员会（SAC/TC369）提出并归口。本标准起草单位：黑龙江省农垦科学院哈尔滨特产研究所、黑龙江普惠特产有限公司 本标准主要起草人：韩欢胜、赵列平、刘志平、卫喜明、殷亚杰、史文清、徐馨、安睿、翟学超、杨阳、杨娇、赵晓静、柴孟龙、张海燕 LY/T 31122019 1 狐人工授精技术规程 1 范围 本标准规定了蓝狐、银黑狐的人工授精技术要求，其他狐可参照使用。本标准适用于饲养场、人工输精站人工饲养狐的繁殖。2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。2.1 鲜精稀释液 fresh semen diluent 以稀释剂、营养剂和添加剂为主要成分配制的，适宜于鲜精在 3337保存 3h 仍有受精能力的溶液。2.2 精子活力 sperm motility 精液中呈直线前进运动精子所占精子总数的百分比，俗称精子活率。2.3 精子密度 sperm concentration 单位体积精液中所含的精子总数，亦称精子浓度。2.4 精子畸形率 sperm deformity rate 单位体积精液中头、体、尾等形态变异精子所占精子总数的百分比。2.5 有效精子数 number of effective sperms 被检测精液样本中形态正常呈直线前进运动的精子总数，即有受精能力的精子数量。2.6 外部观察发情鉴定法 external observation methods of estrus identification LY/T 31122019 2 根据母狐特征性行为表现、精神状态及外阴变化，判断其是否发情和发情状况的方法，简称外部观察法。2.7 人工授精 artificial insemination 采用辅助器械通过人工方式将精液输送到发情母狐子宫体内，以使其受孕的一种动物繁殖技术。3 授精前准备 3.1 计划编制 人工授精开始前应编制计划，预选用品(参见附录A),设计记录表(参见附录D中的D.1D.3)。3.2 授精操作室 3.2.1 操作室应设在靠近养狐场上风向附近，面积 15m225m2，要求安全、通风、保温和卫生，内设照明、电源插座和操作台等设施。3.2.2 操作室应分更衣室、采精输精室与精液检测处理室，中间应设有隔断。3.2.3 操作室墙壁、地面应采用瓷砖或水泥类的硬质便于消毒的防水材质。3.2.4 操作室应配有紫外线消毒灯与控温设备，温度控制在 1825。3.3 用品准备 3.3.1 授精前应将药品与器械备齐（参见附录 A）。3.3.2 更衣室应配备衣挂、鞋架、洗手池或洗手盆等。3.3.3 采精输精室应配备保定架、水盆、毛巾、洗涤消毒药品、阴道扩张管、输精针、1mL10mL 注射器、剪刀、废物收集桶等。3.3.4 精液检测处理室应配备操作台、集精杯、温度计、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、恒温水浴锅和洗涤消毒用品等。3.3.5 发情鉴定应配备酒精棉球、棉签、显微镜、载玻片等，宜配备电阻测情仪。3.3.6 环境与器械清洗消毒应配备试管刷、连续注射器、蒸馏水、洗涤消毒药品、烘干箱、消毒柜与高压蒸汽灭菌锅等。3.4 清洗消毒 3.4.1 环境 人工授精开始前首次消毒，操作室室外宜用火碱或生石灰消毒，室内宜用 1%4%氢氧化钠或 0.1%0.2%新洁尔灭溶液消毒，以后室内每天宜用紫外线消毒，不应使用有异味的消毒药品。LY/T 31122019 3 3.4.2 器械 3.4.2.1 人工授精器材均应根据材质有选择地进行清洗消毒。3.4.2.2 消毒前清洗，各种器材、用具使用前后应及时清洗消毒，清洗可先用清水加洗涤剂洗刷除去污垢，然后用清水冲洗，与精液接触的器具在烘干前应用蒸馏水至少冲洗 2 次。3.4.2.3 金属和玻璃器具应用消毒药浸泡和刷洗后，在 120烘干箱内烘干 2h 以上。3.4.2.4 塑料制品（如塑料阴道扩张管）可按上述程序洗刷后，置于 75%酒精中浸泡 1h2h，用蒸馏水洗净，再根据材质在 6080烘干箱内烘干备用。3.4.2.5 用于狐阴部擦拭的毛巾、工作服洗净后可用高压蒸汽消毒锅消毒灭菌。3.4.3 人员 操作人员在进行人工授精操作前后都应严格消毒。采精员应剪净指甲，用肥皂水将手洗净，清水冲洗擦干，戴一次性手套，穿工作服。4 人员要求 4.1 人员由发情鉴定员、保定员、输精助手和输精员组成，要求无人畜共患传染病。4.2 发情鉴定员 1 名2 名，人员的数量应根据母狐的数量和其人员工作能力具体而定，有条件时最好培养饲养员使其能够对自己分管的母狐发情状况做到初步确定。4.3 保定员 1 名，在操作室内专职保定供采精和输精的用狐。4.4 输精助手 1 名，协助输精员工作，兼负责器械的刷洗消毒及室内卫生，采精和输精的记录等工作。4.5 输精员 1 名，具有一定的专业理论基础和现场工作经验。5 种狐要求 5.1 种公狐 可进行采精繁殖配种的种公狐应符合下列条件：a)具备本品种特征和种用要求；b)进入配种期体况中上；c)10 月龄以上；d)毛色纯正，系谱清晰；e)健康无传染病，主要指睾丸无畸形、包皮系带无粘连、生殖系统无炎症，无布鲁氏杆菌与加德纳氏菌等传染病；f)繁殖性能要求：发情期每两周检测一次精液质量，鲜精质量应符合本标准 6.3 要求。LY/T 31122019 4 5.2 种母狐 可输精的种母狐应符合下列条件：a)具备本品种特征和种用要求；b)进入配种期体况中等；c)10 月龄以上，6 岁以下；d)毛色纯正，系谱清晰；e)健康无传染病，主要指生殖系统无畸形、无炎症，无布鲁氏杆菌与加德纳氏菌等传染病；f)繁殖性能要求：母性强、上年无空怀、产仔多。6 授精操作 6.1 发情鉴定 6.1.1 发情鉴定可采取母狐外阴观察为主，阴道细胞发情鉴定，或电阻测情仪测情为辅的综合判定方法（参见附录 C）。6.1.2 进入发情期，发情鉴定员对参配母狐进行外阴观察记录，对有发情表现的母狐定期观察，最后通过阴道细胞发情鉴定法或电阻测情仪确定输精时间与次数，将每天可输精的母狐数汇报输精员。6.1.3 最佳输精时间为母狐外阴肿胀回缩出现皱纹，阴道细胞抹片无核角化细胞 80%以上，电阻测情仪电阻值由高转低时进行。6.2 精液采集 6.2.1 采精前准备 精液采集前应提前做如下准备：a)按每天输精母狐数准备用品；b)将消毒的输精针、集精杯、阴道扩张管放入 3337恒温箱；c)将消毒过的毛巾用 0.1%0.2%新洁尔灭温热溶液浸湿；d)将鲜精稀释液在 3337范围的恒温水浴中提前 30min 预热；e)确定公狐的采精只数。6.2.2 保定 将采精公狐置于保定架上，保定员用颈钳或卡板固定狐头部，同时握住尾部，使公狐呈放松站立姿势。6.2.3 清洗消毒 LY/T 31122019 5 用消毒的温湿毛巾擦拭采精狐的腹部和阴囊部，以毛绒湿，无毛屑和灰尘洒落为准。6.2.4 采精操作 6.2.4.1 采精时先按摩公狐睾丸和阴茎部，给狐一个采精信号。6.2.4.2 按摩数秒后，采精者的拇指、食指捏在公狐阴茎两侧，中指捏在阴茎腹面，捏住阴茎中部并沿阴茎纵向撸压和滑动阴茎包皮，对阴茎进行摩擦刺激。6.2.4.3 撸压开始时滑动速度要快一些，宜 4 次/s5 次/s，撸动幅度宜 7cm8cm，撸压 5s7s 后，阴茎勃起，阴茎中部的球状海绵体亦随之膨大。6.2.4.4 然后，将阴茎从公狐两后腿之间拉向后方，将包皮撸至球状海绵体后方继续撸压球状海绵体和后部的阴茎，撸压速度减慢，宜每 10s 撸压 12 次13 次，撸压球状海绵体时稍用力些，如此反复撸压按摩（10s 左右）直至公狐射精为止。6.2.5 精液收集 精液收集时只收集中段乳白色精液。6.2.6 采精频率 每个发情季节每只公狐可采精15次25次，采精频率以3天不超过2次为宜。6.3 精液检测 采集的精液应进行检测并做好记录（参见附录 B、附录 D 中表 D.1），鲜精质量应符合：a)鲜精色泽为乳白或稍带黄色；b)无尿液、血液和脏物；c)精液量0.3mL；d)精子活力0.7；e)精子畸形率15%；f)精子密度4 亿/mL。6.4 精液稀释 6.4.1 稀释倍数 将收集精液的集精杯置入 3337恒温水浴锅中，根据精子活力、精子密度、精液量确定稀释倍数。6.4.2 等温稀释 LY/T 31122019 6 用等温鲜精稀释液进行逐级稀释，方法是将稀释液沿集精杯壁缓慢加入到精液中，轻轻兑匀，严禁将稀释液快速冲入精液和剧烈震荡，确保稀释精液中每 mL 至少含有 0.6 亿个有效精子，估测时密度以中密为好(参见附录 B)。6.5 精液保存 6.5.1 精液稀释完应即时输精，在 3337水浴中精液保存使用时间不宜超过 3h。6.5.2 精液如需延期使用，应用加 15%20%卵黄的鲜精稀释液稀释后，放于 46 冰箱冷藏，2天内用完，用前显微镜加热板温控在 3537条件下镜检合格者方可使用。6.6 人工输精 6.6.1 母狐保定 抓取待输精母狐，固定在保定架，将母狐倒立保定或站立保定。6.6.2 清洗消毒 用消毒的温湿毛巾擦拭外阴及其周围，应一狐一块毛巾。6.6.3 输精操作 6.6.3.1 将阴道扩张管缓慢插入母狐阴道内，其前端抵达子宫颈处，左手虎口部托于母狐下腹部，拇指、食指和中指摸到阴道扩张管的前端。6.6.3.2 左手固定子宫颈，右手握持输精针通过阴道扩张管内腔轻轻插入，前端抵子宫颈口处。6.6.3.3 左右手配合探寻子宫颈口，输精针头过子宫颈口后，在子宫体内 1cm2cm 位置时固定不动。6.6.3.4 由助手将吸有精液的注射器插接在输精针上，推动注射器把精液缓慢地注入子宫体内，也可事先将吸有精液的注射器插接在输精针上，输精者直接将精液注入。6.6.3.5 用注射器吸取精液时，吸取至固定刻度后，应再吸入少许空气，以保证输精时将所有精液输入子宫体内。6.6.4 输精剂量 每只母狐每次输精剂量应为0.8mL1.0mL。6.6.5 输精频数 每只母狐每个发情期输2次3次为宜，可隔天输精，或连输两天后停一天再输。6.6.6 输精结束后工作 人工输精结束后应进行以下工作：a)清扫消毒操作间，将废弃物品统一销毁；LY/T 31122019 7 b)将器械清洗消毒，方法同 3.4.2，将设备统一储存；c)整理记录，安排下次输精计划。7 输精后管理 7.1 输精母狐 7.1.1 输精母狐应避免惊吓，防止胎位异常、流产和难产。7.1.2 输精母狐饲料不宜大变，不得饲喂发霉变质、冰冷饲料。7.1.3 做好输精母狐疾病、体况、流产等相关记录（参见附录 D 中表 D.2）。7.1.4 进入预产期应做好产前准备工作，增加人员，做好仔狐代养、喂养、接产、疾病防治的准备工作。7.2 产仔记录 做好产仔记录（参见附录D中表D.2），存档。7.3 工作总结 对人工授精整体工作进行汇总（参见附录D中表D.3）、总结、存档。LY/T 31122019 8 A A 附 录 A（资料性附录）人工授精常用器材药品表 A.1 人工授精常用器材药品表 序号 品名 单位 数量 规格说明 1 烘干箱 台 1 2 消毒柜 台 1 3 冰箱 台 1 4 恒温水浴锅 台 1 5 蒸汽消毒锅 台 1 6 酒精 瓶 适量 75%酒精 7 新吉尔灭消毒液 瓶 适量 8 蒸馏水 桶 适量 9 洗涤液 瓶 适量 10 洗涤盆 个 适量 11 毛巾 块 若干 12 试管刷 个 若干 13 连续注射器 个 23 14 保定架 个 1 15 集精杯 个 若干 16 输精针 个 若干 17 阴道扩张管 个 若干 18 注射器 个 若干 1mL、2/2.5mL、5mL、10mL 19 显微镜 台 1 400 倍600 倍 20 恒温加热板 个 1 21 盖玻片/载玻片 盒 适量 22 擦镜纸 本 适量 23 棉签 包 若干 24 一次性手套/口罩 包 适量 25 剪刀 包 1 26 工作服 件 适量 27 超声波清洗器 台 1 28 蒸馏水器 台 1 29 空调 台 1 30 紫外灯 2W/m2 适量 31 精子密度仪/细胞计数板 台/个 1 LY/T 31122019 9 B B 附 录 B（资料性附录）精液品质评定方法 B.1 精子活力（或精子活率）B.1.1 精子活力宜用显微镜镜检法评定；B.1.2 在普通载玻片上滴一滴精液，然后用盖玻片均匀覆盖整个液面，做成压片镜检；B.1.3 在400倍600倍带有恒温加热板（3337）的显微镜下进行目测评定；B.1.4 采用01.0的10级评分标准；B.1.5 对精液样品中前进运动精子所占百分率进行估测；B.1.6 100%直线前进运动者为1.0分，即精子活力1.0，90%直线前进运动者为0.9分，即精子活力 0.9，以此类推。B.2 精子密度 B.2.1 精子密度宜采用血细胞计数法进行检测；B.2.2 用1mL细管吸取3%NaCl溶液0.2mL或2mL注入小试管内；B.2.3 根据稀释倍数要求，用血吸管吸取并弃去10L或20L的3%NaCl溶液（或稀释液）；B.2.4 再用血吸管吸取被检精液10L或20L注入到小试管内摇匀；B.2.5 取一滴稀释后精液滴于计算板上的盖玻片边缘，使精液渗入到计算室内，充满其中，不得有气泡；B.2.6 在400倍600倍显微镜下统计出计算室的四角及中央5个中方格内的80个小方格内的精子数；B.2.7 对于头部压边界线的精子应遵循“数上不数下，数左不数右”的原则；B.2.8 计算公式：精子密度（1mL原精内的精子数）=5个大方格内的精子数5（等于整个计算室25个大方格内的精子数）10（等于1mm3内的精子数）1000（等于1mL被检稀释液样品内的精子数）被检精液稀释倍数。B.3 精子密度估测法 在 400 倍600 倍显微镜下根据精子的稠密程度及其分布，将精子密度分为“密”“中”“稀”三级。密：整个视野内充满精子几乎看不到空隙，很难见到单个精子活动，密度在 10 亿/mL 左右。中：视野内精子之间有相当于一个精子长度的明显空隙，可见单个精子的活动，密度在 2 亿/mLLY/T 31122019 10 左右。稀：视野内精子之间的空隙大于 3 个以上精子的长度，甚至可查清所有精子数。“0”:代表在整个视野中未发现精子。B.4 精子密度回归方程估测法 B.4.1 回归方程：Y0.03187320.0111555X B.4.2 Y代表每mL精子数，X代表400倍显微镜下一个视野精子数；B.4.3 估测范围限于精子密度小于1亿个/mL时,应在原精液稀释后检测；B.4.4 在400倍显微镜下，单个视野精子数每增加10个时，其精液的密度增加0.1亿/mL。B.5 精子畸形率 B.5.1 精子畸形率宜进行精子染色镜检；B.5.2 取一滴被检精液置于载玻片上，密度大时需用生理盐水稀释，将样品滴以拉出形式制成抹片；B.5.3 用0.5%龙胆紫酒精或蓝墨水染色3min，自然干燥，水洗；B.5.4 水洗后在400倍600倍显微镜下观察，检测不同视野的精子数，不少于200个，计算出畸形精子百分率，重复取平均数。B.5.5 计算公式：精子畸形率=畸形精子数/计数精子总数100%。LY/T 31122019 11 C C 附 录 C（资料性附录）发情鉴定 C.1 外阴观察、阴道细胞发情鉴定与电阻测情三种发情鉴定方法对照表 鉴定方法 发情时期 输精开始时间 发情前期 发情盛期 发情末期 外阴变化a 阴毛分开，外阴露出，外阴肿胀潮红，进一步发展，外阴肿胀明显，阴蒂呈椭圆形。外阴高度肿胀外翻，外阴呈圆形，阴门两侧上部有轻微皱起，色泽深，并有白色或黄色凝乳状分泌物。外阴逐渐回缩，颜色变浅，肿胀和外翻消失，最后呈灰白色。外阴肿到最大程度后微缩变软起皱时。阴道细胞变化 开始白细胞多，少量有核上皮细胞，进一步白细胞减少，有核上皮细胞增多，再进一步白细胞极少，有核和无核角化细胞各半。无核角化细胞占优势，80%以上，有核角化细胞少量。白细胞出现,并逐渐增多,有核多角形角化细胞和血细胞较多。无核角化细胞在 80%以上时。阴道电阻值变化b 利用发情期母狐阴道电阻值变化进行发情程度的测定，发情期母狐电阻变化整体上是由低到高，再由高降低的过程，一般在峰值后进行输精。发情期电阻的最大值通常蓝狐在 8001200 之间，银狐在 600800 之间，人工输精时间最佳点，蓝狐通常是在阴道电阻达到最大值后 24h48h 之内，银狐则 24h 之内。电阻值从最高点下降约 20%时。a.外阴变化可采用画“”号的方法记录，阴部第一次出现隆起可标“”，再次查隆起增加明显时可标“”，隆起最大时可标“”。b.应用电阻测情仪测情时，发情开始，外阴没有肿到合适程度时，不必开始测电阻值，一般在发情前期外阴变红肿胀增加时开始测电阻值。LY/T 31122019 12 D D 附 录 D（资料性附录）人工授精常用记录表 表D.1 公狐精液采集与稀释记录表 NO.场名：年度：公狐编号 品种 色型 体重（kg）是否纯种 健康状况 序号 采精 日期 原精 稀释后 采精员 备注 精液量（mL）颜色 活力 密度（亿/mL）畸形率（%）其他 稀释 倍数 精液量（mL）活力 有效精子数(亿/mL)其他 1 2 3 4 5 6 LY/T 31122019 13 表D.2 母狐人工授精繁殖记录表 NO.场名：年度：母狐编号 品种 色型 体重（kg）是否纯种 健康状况 发情鉴定情况 人工输精情况 妊娠情况 产仔情况 备注 鉴定日期 发情状态 输精日期 公狐号 精液量（mL）预产日期 妊娠状况 产仔日期 活仔数（只）死胎数（只）填表说明：发情鉴定采取外生殖器观察结合阴道细胞发情鉴定或电阻测情方法进行鉴定，可根据习惯以“”、“”、“”、“”、“”、“”“”标记发情状态，也可直接记录测定的电阻值。LY/T 31122019 14 表D.3 母狐人工授精汇总表 NO.场名：年度：序号 参配狐号 初配日期 输精次数 结束输精日期 妊娠状况 产仔日期 产仔数 其他 备注 1 2 3 4 5 6 汇总 参配母狐数（只）发情数（只）发情率（%）妊娠数（只）妊娠率（%）产仔数（只）产仔率（%）_