DB15_T 332-2000 用酶联免疫吸附实验检测猪瘟免疫抗体技术规程(内蒙古自治区).pdf

10512 DB15 蒙古自治区地方标准DB15/T332一-2000用酶联免疫吸附实验检测猪瘟兔疫抗体技术规程ical Standards by means ofEnzyme-Linked Immunosorbent Assay for the Detection of Swine Fever Immune Antibody 2000-04一15实施内蒙古自治区质量技术监督局发布/卢前中一一同用酶联免疫吸附试验CELlSA)检测猪瘟血清抗体，制定出科学合理的免疫程序，达到有效防制猪附录A、附录B是标准的附录。附录C是提示的附录。由内蒙古自治区畜牧厅提出o草单位:内蒙古自治区兽医卫生监督检验所。要起草人:李润清、赵林立、王旭红、杨冬梅、刘志刚。II/手/内蒙古自治区地方标准用酶联检疫吸附实验检测猪瘟免疫抗体技术规程Technical Standards by means ofEnzyme-Linked Immunosorbent Assay for the Detection of Swine Fever Immune Antibody 了猪瘟免疫抗体检测技术及操作方法。对象为内蒙古自治区境内饲养的生猪。DB151T332-2000 具体情况，合理确定抽样范围，每群抽样5%20%。认真填写抽样送检单，格式见附录B(标样品:无菌采集猪血，分离血清，检验所需血清约O.5lmL血清在冰冻状态下保存和送试剂配制见附录A(标准的附录)包被液将猪瘟抗原作100倍稀释后加入ELISA板孔中，每孔加100II L置湿盒子4C过夜。去孔内液体，用洗涤液冲洗板3次，拍干。血清稀释液将待检血清作100倍稀释，每孔力日1001。同时，设猪瘟阳性、阴性血清对培育1小时。血清稀释液将免抗猪IgG一辣根过氧化物酶结合物作100倍稀释，每孔加入100L37C培入底物溶液1001，室温下避光显色30分钟。入终止液501.于酶标仪中测定492nm波长的光密度值(OD值。准O.2为猪瘟免疫抗体阳性。告按附录B格式填写结果报告单。术监督局2000-02-14批准2000-04一15实施f白DB15/T332-2000 附录A(标准的附录EL1SA 试剂自己制被液CO.05MpH9.6碳酸盐缓冲液):1.59g 2.93g O.20g CO.01M pH7.4磷酸缓冲盐水)CPBS):2.9g O.2g 8.0g O.2g O.2g 液(磷酸缓冲盐水-吐温)CPBS-T)lOOOml O.5ml CPBS-T)lOOml 5ml 即成。C C6Hs07 I-bO)21.OOg 至lOOOml 12HzO 71.60g 至lOOOmlDB15/T332一-2000o.1M拧棱酸溶液24.3ml O.2M磷酸氢二铀溶液25.7ml 调pH5.0 底物溶液20mg 20ml 前加30%H20275ul H2S04)76.OOml 500ml蒸馆水中缓慢加入浓硫酸。f严文采样地点DB15/T332一-2000附录B(标准的附录)监测报告单格式采样送检单群体数量采样数量采样人受理日期:编号采样日期年月日(T DB15/T332-2000 结果报.B:.目单编号采样地点检验数量阳性数量率性n口备注检验人:审核人:年月日f幻DB15/T332一-2000附录c(提示的附录)注意事项配制洗涤液时应使用无离子水或双蒸水。每次洗板后，尽量不使孔中有残余液体，以免产生非特异反应。底物溶液应在用前现配现用。终止反应后，应立即读数。/i;)