DB37∕T 4043—2020 生鲜乳中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的测定 液相色谱-柱后光化学衍生法(山东省).pdf

TCS 67.050 X 04 DB37 山东省山巳ET且，万标准DB37/T 4043-2020 生鲜乳中黄曲霉毒素81、82、G1、G2、M1、M2的测定液相色谱-柱后光化学衍生法Detection of aflatoxin B1、B2、G1、G2、M1、M2contents in raw milk by liquid chromatography with post-column photochemical derivatization 2020-07-09发布2020-08-09实施山东省市场监督管理局发布目IJ1=1 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准白山东省畜牧局提出并组织实施。本标准白山东省畜牧业标准化技术委员会归口。DB37/T 4043-2020 本标准起草单位:山东省农科院农业质量标准与检测技术研究所、青岛农业大学、青岛农业大学海部学院。本标准主要起草人:王玉诗、韩荣伟、于忠、娜、蔡达、徐宁、张潇、高磊、赵玉华、刘俊华、秦宏伟、邱慧玲、王军、盖学武、焦霞、杨永新。I DB37/T 4043-2020 生鲜乳中黄曲霉毒素81、82、G1、G2、M1、M2的测定液相色谱一柱后光化学衍生法警示:整个分析操作过程应在指定区域内进行。该区域应避光(阳光)，具备相对独立的操作台和废弃物存放装置。在整个实验过程中，操作者应按照接触剧毒物的要求采取相应的保护措施。1 范围本标准规定了测定生鲜乳中黄曲霉毒素Bj、B2Gj、G2、Mj、比含量的液相色谱柱后光化学衍生测定方法。本标准适用于生鲜乳中黄由霉毒素Bj、B2、Gj、G2、Mj、比的定量测定。本标准方法的检出限:黄由霉毒素Bj为o.002g/kg，黄由霉毒素B为0.002g/kg，黄由霉毒素G为0.002g/kg，黄由霉毒素Gj为0.002g/kg，黄由霉毒素Mj为0.005g/kg，黄曲霉毒素比为0.002g/kg;本标准方法的定量限:黄由霉毒素Bj为o.006g/kg，黄曲霉毒素B2为0.005g/kg，黄曲霉毒素G为0.005g/kg，黄曲霉毒素Gj为0.006g/kg，黄由霉毒素Mj为0.015g/kg，黄由霉毒素M2为0.006g/kgo2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 原理试样中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2用甲醇溶液提取，提取液经黄由霉素毒素免疫亲和柱净化、富集，用高效液相色i普分离后经柱后光化学衍生，荧光检测器检测，外标法定量。4 试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，水为GB/T6682中规定的一级水。在1甲醇:色谱纯。4.2 乙睛:色谱纯。4.3 甲醇水溶液:取50mL甲醇，加入.50mL纯水，混合均匀。4.4 流动相:乙睛十水二20十800分别取200mL乙睛，800 mL水，混合均匀，并脱气备用O4.5 黄曲霉毒素(Bj、B2、Gj、G二、Mj、M2)标准储备溶液:采购市售标准溶液，分别用甲醇配成100ng/mL 的标准储备液。储备液于4oc避光保存(有效期三个月)。4.6 免疫亲和柱:柱容量二三100ng(柱容量、回收率、柱回收率验证方法参见商品说明书)。注:对于每个批次的亲和柱在使用前需进行质量验证。4.7 滤膜0.45m有机滤膜。5 仪器设备5.1 液相色谱仪:荧光检测器。5.2 光化学衍生装置。5.3 分析天平，感量0.01g。5.4 固相萃取装置。5.5 旋涡混合器。5.6 冷冻离心机:转速不小于10000 r/mino 5.7 氮吹仪。6 测定步骤6.1 提取DB37/T 4043-2020 称取20g样品，精确到0.01g，置于50mL的离心管中，加入10mL甲醇，涡旋5min，以10000 r!min 的转速在5C条件下子冷冻离心机离心10min，取上清i夜力口水定容至50mL.备用。6.2 净化将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温，待免疫亲和柱内的液体放弃后，将上述样液移至50mL注射器筒中，控制流速为1mL/min3 mL/mino待样液滴完后，往注射器筒内加入10mL水，以稳定流速淋洗免疫亲和柱后，吹干亲和柱。加入2X2mL乙睛(或甲醇)洗脱亲和柱，控制流速为1mL!min3 mL!min，吹干亲和柱，收集全部洗脱液至刻度试管中。在50C下氮气缓缓地将洗脱液吹至近干，用初始流动相定容至1.0 mL，涡旋30s溶解残留物，0.45m有机滤膜过滤，供液相色i晋测定。6.3 标准曲线配置用流动相(4.4)将黄曲毒毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2稀释成o.1 ng/mL10.0 ng/mL的系列标准溶液。6.4 测定6.4.1 液相色谱参考条件液相色谱参考条件列出如下:a)色谱柱C1R柱(柱长250mm，柱内径4.6mm，填料粒径5m)b)流动相:乙睛+水(20+80，体积比);c)柱温30C;d)流速o.8 mL!min;e)进样量20L;f)检测器:荧光检测器;g)检测波长EX(激发波长)=355 nm,EM(发射波长)=430 nm。6.4.2 定量测定2 DB37/T 4043-2020 根据试样溶液中黄由霉毒素BhB2、Gj、G2，Mj、比的含量情况，边走浓度相近的混合标准工作溶液，混合标准工作溶液中黄由霉毒素Bj、B2Gj、G2，Mj、比的响应值应在仪器检测的线性范围内。对混合标准工作溶液和试样溶液等体积注入液相色谱仪。按照保留时间进行定性，以标准曲线进行走量测定。标准品色谱图参见附录A中图A.1。6.5 空白试验除不称职试样外，均按上述步骤同时完成空白试验。7 试验数据处理试样中黄由毒毒素以B1、Bz、G1、Gz、M1、M2分别计，单位为微克每千克(11 g/kg)，按下列公式(1)计算:=DXE X些些.(1)r.m.1(100 式中:一一试样中黄曲毒毒素B1、B2G1、Gz、M1、比的含量，单位为微克每千克(g/kg);从标准工作由线上得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mUV一一样品溶液定容体积，单位为毫升(mUm 样品溶液所代表试样的质量，单位为克(g)。计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。8 重复性在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。3 DB37/T 4043-2020 附录(资料性附录)A 黄曲毒毒素B1、B2、G1、G2、M1、M夜相色i普图色谱图u A Ex:3苟明，Ern:430nl幢ijjlltr=叫由rENZ350 300 250 200-h150 1000 500。40 m n 35 30 25 20 15 10 5。说明:黄曲霉毒素B1、乱、G1、G二、M1、M二标准溶液浓度分别为3.92 ng/mL,1.02 ng/mL、3.9ng/mL、1.0 ng/mL、1.0 ng/mL、1.0 ng/mLo 高效;夜相色i昔分离黄曲毒毒素B1、B2、G1、G2、M1、矶的标准国语图A.1 4