DB13_T 499-2004 商品肉鸡大肠杆菌病防治技术规程(河北省).pdf

841 DB13 河北省地方标准0813/T499-2004 商品肉鸡大肠杆菌病防治技术规程2004-03-10发布2004-03-10实施河北省质量技术监督局发布本标准附录A、附录B为规范性附录.本标准由闸北省畜牧局提出.前言本标准起草单位t向北省畜牧兽医研究所.本标准主要起草人z张继东、李淑芳、杨国恩、王玉清、杨祖亚、薛宗丽.OB13/499-2004 DB 13/499-2004 商品肉鸡大肠杆菌病防治技术规程1m圄本标准规定了商品肉鸡大肠杆菌病的诊断和防措.本标准适用T肉鸡饲养场和1动物诊疗单位对肉鸡大肠杆菌病的肪桶，2 规范性引用文件下列文件通过本规范的引用而成为本规范的条款.凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括国J误的内容)成修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使闻这些文件的最新版本-凡是不住日期的引用主件，其最新版本适用于本标准回NY5035无公害食品肉鸡饲养兽茹使用准则NY5036无公害食品肉鸡饲养兽医防疫准则NY/T503B无公害食品肉鸡饲养管理准则中华人民共和国动物防疫法第八届全国人大常蚕会1997年7月3日颁布中华人民共和国兽药典(2000版3 术语和定义-f列术语和定义适用于本标准.商晶肉鸣大肠杆菌宿由E虫病性大肠杆菌引起的商品肉鸡的原盎性政继发性的细曲性传染病.i主病主要危害肉雏鸡，其特征求现其JP&血型、肺炎型、脑失型、气囊炎型、关节进型、HIil进型、肉芽肿型和1脑提割等多种病剖，是目前危害商品肉鸡业的一种重要的细菌性疾病之4诊断4.1 诊断原则jj且过流行病学调查、l临床者现、病理变化等作山的l临床诊断可作为处理疫情的依据，组病原分离鉴定，ilF除其他病原l苗染，则可语断为原发性大肠杆菌病.继发性大肠杆菌病的语断，必组在其他原发性在南基础上分离山大肠杆菌，4.2 行特点4.2.1 发病日龄各年龄商品肉鸡均易l苗圃20-45日龄的商品肉鸡发病流行最讲迪E脐炎型发病较早，出生后即可能注生。其他病现410日龄即可能发生，迦常30日龄前后的肉仔鸡发病较多，4.2.2 发病率和病死罪发病卑和l病死幸与大肠杆菌血泊型且菌株的毒力、有无继发和井提感染、饲养管理水平、环境卫生条件、防前措施是否及时有效而差异较大.一般发病率为11%-69%，病?E草3.8%-72.9%.4.2.3 症病季节大肠杆菌病-年四季均可发生，但以每末春韧较为多见-4.2.4 情撞撞在4.2.4.1 消化道饲料及饮水被大肠杆曲-污染，肉仔鸡来食:此饮用后通过消化道而感染，DB 3/499-2004 4.2.4.2 呼咂道带有大脑杆菌的尘接植眼人，进入呼哑道后侵入血植引起感染-4.2.4.3 置壳穿量置壳表面持鼎的大肠杆菌q/t非易穿透tlt壳进入置内，这种种蛋常于孵化启用引起死胚.DJt刚醉出的小鸡即可发病，4.2.4.4 垂直传播患有大匾杆菌性输卵营爽的母鸡，在面的形成过程中大脑杆菌即可进入置内，造成垂直传楠，4.3 脑库症枕B:病性大厨杆菌所置在捕的l临床表现与鸡只的发病日龄、病程H:是短、呈侵害组织器官与部位、有无撞撞井盎肆果有很大关系.根据商品肉鸡发病的临床表现主要分为I;J.or.提型z8).u/t血型E表现为离群呆立或挤堆，羽毛松乱，食散减退蔚蓝蝠，排黄白色稀冀，打喷喔，呼咂困难，瞌啸，头部皮下水肿等症状，多在发病2d4d内死亡a部分病鸡不表现任何l临阵症状或症状不明显而突揣死亡。b)肺炎型z主要发生于孵化后期的胚胎且出壳后的推鸡，摘死率为3%10%.有时高达40%回主要表现为卵黄眼收及脐带收捕不良，脐带发炎、捏榈、发虹、肿胀，脐孔阳舍不良或不阳台，周围应脏旦量褐色，来食盘踞少i且不食，精神玩恤，下嗣-患有该型大肠杆菌捕的肉鸡多在山壳J02d3d向死亡，不死的南鸡生-民也较疆慢，c)腼虫型z主要表现腹泻，粪便且黄蜡色水样，捎瘟，脱水，最后衰竭死亡，的气囊班!:多由9&血刑转变而米，发生气囊班与肺炎I3周曲以上肉仔玛多嚣，表现为精神祝郁，呼吸困难，瞄嗽，有湿性罗青，食散耐i且1!;庄地，伴有血胃、腹腔积槽，后腹部软而大，自)UJl提型=表现为nR睦肿胀，由泪，结膜潮虹，角膜挥拙，有肺性分描物，睡孔缩小.Om.璋莘捕、凹陷.失明多盘为(i侧失明).的关节炎型由败血型腼进型等转变而来，表现为关节肿大，耻行E11)脑提型z发病肉目睹睡为主要特征E的肉芽肿型:病鸡排黄向色稀哑，生-民盎育受阻，4.4睛理由j幢变化4.4.1 耻血型纤维茧性心包炎，心包肥厚、挥拙，呈乳白色，其至有多量纤维素性棒山物I与IC，肌粘在回常伴发肝脏肿大，肝周罔纤维素性捧出，其至整个肝脏被一层纤维索性薄l监所包矗g血腔内有盘量不等的血水，拥有纤维圭性捧出物.wt纤维素性播出物充斥于胆脏器官，造成胆胆再器官的纤维素性粘连，有时伴发气囊炎，气囊增!亨、海拙，4.4.2 脐最型卵黄咂收不且，卵茧酶菲薄，卵黄班化.里黄褐色或黄绿色7，/(样，旧有干酣样颗粒物，哥县，常伴有血腥炎和心包虫，脐部肿大，应_OJ1.肿，脐孔阳舍不全回4.4.3 田先型小脑甜膜充血、flI血、由癌，腼内有大量擅件，直肠内有多量绿色稀粪-脏胃黠踹充血瑶山血E胆囊肿大，克描阻计-4.4.4 气童提型胸腹部气量高度浑曲，增厚，有时旦黄褐色，囊腔内有勤量不等的干酣样物回胸膛腔均有大量幅油播出物-肺部发炎、充血、出血、.I;Hf.气骨内有大量黠植，气骨甜!出充血、增厚、鼻腔有大量甜植.4.4.5 英节提型2 DB 13/499-2004 肃查关节以酣关节多见肿胀，滑擅增多、坦恤，关节童内有干酷样物，有时出现关节粘连-4.4.C5 肉芽肿型在肝、盲腼、十二指局和脑系膜形成肉芽肿.4.5 睛盟章暗面4.5.1 宿料的罪靠当鸡群盎捕后，最好将典型病例活体整个尸体造植.尸体造植应在病鸡死亡后，立即送植.选植病料应取自未经抗菌药物插疗的病鸡.靠性死亡病例，其肝、牌、心血、卵黄囊和脑等均可作为持检病料-4.5.2 晴原幢瞌程序病原植验程序应挂固1所示进行，鉴别培养曾鼻E事量.a.咽伊虹.-平极鉴定菌事特串f.章片草兰E且也幢撞.生也由瞌圄1大瞄杆菌分离培鼻与鉴定程序框固4.5.3 晴原分离培葬无菌操作，在待植病料表面切一小口，用灭菌铀金耳从中菌取组织或血植，接种到鉴别lil.脂平*培养基上11增菌肉面中.37C培养24ho周抗菌药物拍疗过的病鸡，在初步分离细菌时，应先进行增菌培养，然后进行鉴别培养.造植尸体剖开后应先进行接种培养，捕后观察各内脏器官的南理变化.4.5.4 宿圃悻噩噩学理事4.5.4.1 菌嚣特征大厨杆菌在营养琼脂平坦培养基上形成的菌落边撞整齐、表面先捕、温洞、低而髓瞌凸、中等大小、无色半透明、露珠样菌落z在麦扉凯琼脂培养基上菌嚣呈粉红色E在伊红一景兰琼脂平握上菌落里紫红色、隆起、表面温润、带有蓝蠕色的金属光浑，4.5.4.2 细菌军在将病料及培养物锥片!ll妹片，经革兰民染色后幢幢.革兰民染色时，大肠杆菌为革兰民阴性、无芽胞的短小杆菌，多单在Dl成月1而不形成-J:i;:链，多数有鞭毛，能运动.4.5.5 生化iit瞌鉴定在进行厨杆菌科的属、种鉴定时，生化特性是重要的指挥，但生化试验不能鉴别菌株有无!t病性目3 DB 13/499-2004 主要的鉴定试验为糖发酵试验.雄一拉二氏试验及拧撞醋盐和tlJ+.l试验阴性，植基质及甲基虹试验阳性，生化试验方法挂附录A的规定进行，4.5.6 酷惰性试验4.5.8.1 且角膜结睡试验用铀盒耳钩取菌蔷捧入睡鼠眼结膜内，如有产厨毒素型大肠杆菌存在，则引起角睡结膜炎-4.5.6.2 J、且提种由瞌取分离物24h肉面培养物胆幢幢种18日-22g小鼠，每只小鼠接种0.2时，接种后72h死亡，即证明t辈分离物具有!l摘力，4.5.6.3 昂瞎雏鸣接种试验取分离物24h肉面培养物O.3ml-0.5ml腹腔接种2周酷内易感雏鸡，多在ld-7d内死亡，表现与自棉病例相同的症状和病理变化.4.5.7 血清学幢剖用已知大匾杆菌的单因于血惰，对经细菌学确定为致病性大肠杆菌的分离菌株进行鉴定.在禽病中常见致病性大肠杆菌的血情酣有儿十种，占优势的血清型有01_Oh 03.Olh 0:15、h、07Ho不同地区致肃性大屉杆菌的血情用差别植大，5 瞄油5.1 彝噩哥擅卫生5.1.1 每批鸡血栏目府对鸡舍、用具进行情就、捎毒，捎毒剂的选择应符合E中华人民共和国曾由典的规定-清理完毕到F(j(进鸡前中:舍至少2用目6.1.2 应实行金桂全出制饲养，同一养盟场不能饲养其他禽提.8.1.3 盟及时情陆嗣握的垫料和l粪便，在|剖定地点高咀堆H扯理a8.1.4 应保持育雏舍温度稳定，不能忽高想低，饲养密度噩合理，舍内迦JX应良好-5.2 饲养方式可果用地面散养或网上平养方式，地面散养时垫料要干燥、无事变且不应有病原菌群落。有条件的商品肉鸡养监墙应封阳饲养，从肉仔鸥育雏到山栏整个饲养过程中将养堕入且同时封阳在肉鸡养噩允许的空间内，使整个弄植空间与外界环境相对隔离，5.3 tt.水曹理应来用自由忧*的方式，确保饮水器不描水，防止垫料和饲料事变.快7，/(器噩每日1肯t;、捎毒，捕毒剂应符合中华人民共和国兽药典的规定团5.4 帽料曹理自由来食瑾定期饲唱.不应饲唱发睡变质的饲料，上r1I前7d.饲料中应不肯任何药物或药物饲料插加剂.每次播料量应1世据需要确定，保持饲料新鲜，且时请除散落的饲料.5.5 瞄噩应有般地控制商品III肉鸡多发、常见阳病毒性在前，副少慢性町咂道病的发生，最大限度地描少大肠杆菌病的发生机合回5也1直接利由符合t中华人民抖和国动物防擅怯的噩求，选择适宜的直苗、先瘟程序和兔班方挂，5.6 苗喃防治5.6.1 l.Jt排料方式桥加吕di应符合NY5035的要求。5.6.2 抗菌药物的使用应科学规范.对选用药物的剂量和l应用时间且休茹WJ应严格掌握.5.6.3 进行药物的敏础性制定，以选择高敏茹物应用，确保捕疗效果。大屉杆菌对抗菌药物的敏感性测定方挂挂附录B的规定进行目5.8.4 可使用国家兽茹管理部门批准的针对本病的世生在制剂，5.8.5 可使用国家兽药管理部门批准的针对本捕的中草药制剂，5.8.6 建立井保存ITi疗记录a包括.&:捕时间及症状，怕疗用药的商品名称和l有敢成卦，生产厂家且生产日期前疗时间、剂蓝、疗程、疗放及停茹时间a记录应在情辟后蛙挫保存2年.4 DB 13/499-20.0.4 A.1 幅在酵试验A.1.1 试验原理附景A规菇性附景)大团杆菌生化试验方法大肠杆菌能分解多种糖、醇，使其产酣睡产菌产气，井在与画杆菌科的其他属、种且其他细菌的鉴别上具有一定的意义，是进行大肠柯:菌鉴定的常用试验，A.1.2 培养基蛋白脏lo.g.牛肉漫膏址，氧化铀5g.1.6%提甲酣茸酒精蓓擅o.lml作指示剂，矗锢*10.0.0.皿1.调至pH7.4-7.6.分辑于事先装有小倒营的小试管内，于121c高压灭菌15min.供发酵试验常用的精有葡萄糖、事L糖、麦芽醋、甘露醇、肃糖等.各种暗的2日量-耻为0.5%-血，但因1%为好.陆萄萄糖、甘露醇在培养基商压灭菌前加入外，乳糖、直在糖和麦芽糖则需先配制成10%-20%水槽植，过植酷菌或1l5C加热15min灭菌后.无菌操作加入培养基中.A.1.3就验方法以无菌操作，用接种环取少量供试大肠杆菌纯培养物接种于糖发酵培养基中.37C恒温培养，每天观察井记录结果，根据需要可培养观察lOd.A.1.4 结果判定若分解楠、醇后产醋、产气，则培养擅变为黄色且有气泡形成:但产醋则培养植变为黄色，无气泡形成;不产睡不产气者则培养班不变色且无气泡形成.大腼杆菌能迅速分解葡萄黯和甘露醇，产酣或产气.大多盘菌株在24h内能分解乳楠、圭芽糖，半辈k菌株能发酵嚣睛，也可采用半圃件事脂培养基，即在上述培养基内挂0.4%-0.6%加入瑭脯，省去小倒臂，做穿刺撞种.若分解捕、醇类产醒产气，则培养基变为黄色且括穿刺蜡戚管壁且管l自处有幢小气地形成，A.2甲基红峭的过验A.2.1 试验原理细菌在葡萄糖代由中生成两国圃，两国醒再被分解生成甲醋、乙醋、乳醋、瑞酣睡等，使pH降至4.5且!GJ!低，甲基红指示荆呈现红色.A.2.2 培养基磷酸氢二悍(&HPO.)5g.蛋自脏5g.葡萄糖5g，革锢*100o.ml.各mt分拥军解后调至pH7.2.过酶，分革试管.121C高压灭菌lSmin备用.A.2.3 指示荆甲基红o.Ig.95%酒精30.0.时，藉锢水200m1.先将甲基红用洒精棉解后，再加入菇锢*至500.皿1.A.2.4 试验方击与结果判定在培养基中接种少量大腼杆菌培养物，于37C培2d-剧，然后于每5m1培养物中如入甲基红指示;lJJ5捕-6摘，立即现事结果，呈鲜红色的判为阳性反应，羁阳性的为描红色，阴性的为黄色，若4Bh培养物为阴性的可取部分培养植试验).则应娃娃蜻养4d-5d重试.A.3 蛙-培(V-p)二民试验A.3.1 试验原理有些细菌可分解葡畸黯产生丙酣睡，再将丙圃醋脱捶形成L酷甲基甲醇.l.J醋甲基甲醇在耐性环DB13/49弘一2004境中可植氧化为二乙酷，进而与晴养基内蛋白E在中的精氨酸所青的皿基发生反应，生成红色化合物，即为v-p试验阳性回.3.2 培辑基应持合A.2.2的要求sA.3.3明filJA.3-3.1 奥梅扭(O-Meara)民法试剖肌醋。咽地，氢氧化钥(KOH)40g，嚣惘jI./.100m1.将KOIl精于藕锢水中后加入肌酶，A.3.3.2 贝克脱(Barrit)f.2t5去试制甲擅为6%a-事酣洒精南擅:乙植为40%KOH 7./.楠植E.3.4 试验古法与结果判定.3.4.1 且幢幢去取少量营养瑭HIl幼龄培养物接种，311:蜗养4Bh，在每lm1培养物中加入相应试剂1m!，充分据句后置于室温!Il(.31C下4h现喜结果，呈现虹色者为fl性，A.3.4.2 贝克脱氏埠撞A.3.4.1的方怯接种井培养4dJfi，在每2.5m1培养物中加入相应，试剂甲擅0.6时，再如乙擅O.2ml，充分幅匀，阳性反应即刻鸥在5min内呈现红色，若无红色山现，可静置于室温wt 31C下2h内现察结果，仍不呈现红色者判为阴性回大肠杆菌的姓-蜻(V-p)二民试验阴性，A.4幢基匾昭1P.朵，i ndo le)试验A.4.1 试验原理细菌分解蛋白脏中的包氨酸，生J&阳酣睡、1宦基质啤|噪、氨等，肯定基质与试剂中的对二甲基氨基苯甲醒作用，生成可见的红色玫现i基质.A.4.2 培鼻基蛋白JIf，(或脚蛋白脏)20g，氧化铀5g，嚣锢水1000ml.榕解后调至pll1.4，分装小试管，121 商E灭菌15min用，本培养基中所用盖自陈应含丰富的色氨酸，每批蛋白wf-应先用己知阳性菌株植验合格后才可供使用aA.4.3试JA.4.3.1 i!A:.一擅(Ehr 1 i ch-Bohme)二氏t荆对二甲氨基革叩醒19，95%酒精95旧，纯陆盐酣20ml.A.4矗3.2柯凡克(Kovac)民试刑对二甲氨基苯甲醒5g，纯戊醉15时，纯榷盐醋25ml.配制方怯均是先将对二甲氨基苯甲醒需于陪中，然后辑慢加入楠盐醋，捆匀后置于lJ.相贮存，A.4.4 试验方法与结果判定取纯培养物少量接种后置于371:培养24h-4Bh(必要时可培养4d-5d)后，每2皿l培养物中加入上述试剂中的任何一种试剂2摘-3楠，轻描试管，.红色者为阳性Q先加少量己睡DJt二甲苯，摇动试管且提取和搜捕nl牒，持其捍于培养植表面后，再沿曹堕悻悻加入上边试J中的任何-种试剂量楠，在接触面呈红色者即为阳性反应.大肠杆菌的电|睐试验为阳性.A.5 梓槽醋盐和l用试验A.5.1 试验原理某些细菌可利阳培养基中的柑撞酷盐作为耻躁，分解拧悻酣盐生成碾酣盐，使培养基pH由醒性变为瞩性-大肠杆菌不能利用拧悻酣盐，在培养基中不能生快，A.5.2 培辑基6 DB 13/499-2004 氧化铀5g.确酷镇(MgSOt 7H20)O.地，瞬醋二氢幢Ig.睡醒二氢饵Ig.拧擅醋铀2g.琼I15g.0.2%模盛香草酣蓝40时，蘸锢水1000时，将各成分(指示1l1j除外加热糟解后调至pH6.8.捕后加入澳靡香草酣蓝指示剂，幅句扁舟革试管，121C高E灭菌15min，制成斜面备用.A.5.3 1式瞌方法且结果判定将培养物撞种于拧檀酷盐斜面I37C培养4d.7d，每天观察结果.阳性者在斜面上有菌落生*，培养基由锺色变为蓝色，大届轩菌拧擅酣盐利用试验阴性，7 D813/49弘一2004附录B规范性附录)大脑轩菌对抗菌茹帽的敏盛性割草方法8.1 纸片扩散法日.1.1含苟且E片的准备根据需要购买用于大届抨菌药敏试验的含药纸片.1.2 培鼻基的制备用灭菌的普通肉汤琼脂峰血擅琼脂培养基制成平植，备用。目.1.3菌渣的准备从保存和新分离的大肠杆菌培养斜面上钩血少许菌苔，接种普通肉涵培养基，于37C培养16b-18h.取出作为原菌植.再用普通肉杨培养基l!.li;1%元曲-蛋白酷:在把原菌班作1:1000倍稀释后备用-B.1.4操作步骤目.1.4.1 浩菌用灭菌棉棒菌取试菌植均匀徐布于培养基表面。.1.4.2 撞置纸片将各种抗菌药物纸片放置于培养基表面，使其紧贴于培养基上，置37C恒祖培养箱内培养16h24h.B.1.4.3 剌抑菌圈直在取出培养皿，回盘各纸片周罔的抖I菌固直径，精确到O.lmm.1.5 结果判定根据抑菌阁大小判定药物的敏感程度，分为高度敏感、中应敏感、轻度敏感、耐茹EB.1.6 注意事项瑭腼扩散辑片怯试验的准确性，回条件的不同而有所差异.如培养基成分、pH值、接种量及操作技术等，都会影响结果的准确性.纸片在平扭上放置要等距离，而且不能靠的太近B本怯只适用于定性试验.B.2 黯辑浩田2.1 茹璋的准备用无菌水将供试药物和释至所需椒度.目.2.2捕，事基准备普通肉商培养基，分装成13主试臂，其中第一直站L8mL，其余12支装1.臼nL.8.2.3 iit菌璋的准备应符合B.1.3的要求。8.2.4 操作步骤在装有1.8mL培养基的试管中，加入Q，2mL供试茹植，泪匀后吸取1.0皿L.加入装有1.OmL培养基的试管中，并按此方怯稀怦至第2支试管弃主;1.OmL.但丑j韧成为递踞椒度梯匾，最后一支不加药液作对照.然后加入1.OmL试菌液，井将各试管描匀，置T-37C恒温培养16h24b，观察结果-8.2.5 量ii拥菌埠度的确定经培养后的试管里拇情状态，据句.m不出现挥恤，判定为无菌生l(:;若培养后试管呈现挥融状态，判定为有菌生怯.从无菌生氏的各管中找山最低纠物浓度的试管，读营的药物根度，即为最压抑菌踉应.B