肠道病毒71型灭活疫苗.ppt

Enterovirus type 71 inactivated vaccine课程：生物技术制药班级：2013生技一班肠道病毒肠道病毒7171型灭活疫苗型灭活疫苗刘雨桐.EV71图片图片肠道病毒 71 型(enterovirus 71，EV71)为单股正链 NA病毒，是小 NA 病 毒 科 肠 道 病 毒 属 中 的 重 要 成 员 之 一。EV71 基因组由 7400 多个核苷酸构成，包含一个开放读码框，编码大约 2200 个氨基酸的多聚蛋白。该多聚蛋白可被进一步水解成 P1、P2 和 P3 三个前体蛋白，P1 前体蛋白编码VP1、VP2、VP3 和 VP4 四种结构蛋白，P2、P3 前体蛋白编码 7种非结构蛋白(2A 2C 和 3A 3D)EV71 包括 A、B 和C 3 种基因型，11 个基因亚型，每种亚型感染均可引起手足口病(hand，foot and mouth disease，HFMDEV71简介简介.0102020203人血浆中含有的中和抗体可在细胞基质上中和不同的 EV71。可减少或消除毒株攻击乳鼠后的致病及死亡现象，而在毒株攻击乳鼠的同时或其后限定的时间内注射含 EV71 中和抗体的人血浆，可起到保护乳鼠的作用EV71 感染或疫苗免疫动物后产生的抗体具有病毒中和活性；中和抗体在体外与 EV71 中和后，可减少或消除毒株攻击乳鼠后的致病性；EV71 疫苗除能诱导中和抗体外，还能诱导细胞免疫应答，其也具有免疫保护作用。EV71疫苗可行性.0101020203030404全病毒灭活疫苗 减毒活疫苗基因工程疫苗病毒样颗粒(VLPs)疫苗肠道病毒 71 型疫苗分类0505合成肽疫苗.为什么选择灭活疫苗为什么选择灭活疫苗 生产工艺成熟，具有良好的免疫原性及安全性，众多研究证明灭活 EV71 病毒疫苗较其他形式疫苗，如 VP1 亚单位疫苗、DNA 疫苗、VLP 疫苗有更好的免疫效果，是 EV71 疫苗发展的主要类型。目前进入临床研究的 5 株 EV71 疫苗均为灭活疫苗，而临床试验结果表明这些疫苗均有较好的免疫原性及安全性。（2014）在中国内地1998 年后流 行株均为 C4，故中国企业研发的疫苗均以 C4 型毒株作为疫苗株。.12二倍体细胞疫苗生产工艺：疫苗株 株在人二倍体细胞（株）上适应传代，收获病毒液，经灭活、浓缩、层析过滤，吸附氢氧化铝佐剂后，制备成为肠道病毒 型灭活疫苗成品。细胞疫苗生产工艺：疫苗株株或株感染 细胞后，收获病毒培养液，经超滤浓缩、凝胶过滤、离子交换层析纯化、甲醛灭活，吸附氢氧化铝佐剂后，制备 7灭活疫苗成品。灭活疫苗两种类型.01 病 毒 液 的培养 及 灭 活02EV71病毒的纯化、检测及制备03灭活疫苗免疫原性检测及保护性研究灭活疫苗制备一般流程.12病毒液的灭活收获病毒液按（）加入福尔马林，灭活，并每间隔2取样，采用微量滴定法进行感染性滴度检测以观察其灭活效果。病毒微量滴定法：将灭活后的病毒液按 倍梯度稀释，以 孔置于孔平底细胞培养板，每个稀释度接种孔，每孔按 细胞培养液加入细胞，、时观察记录病变，超过细胞病变孔判为病变阳性病 毒 液 的 灭 活.EV71EV71病毒的纯化、检测及制备病毒的纯化、检测及制备病毒的纯化、检测及制备病毒的纯化、检测及制备 分 析分 析 检测将纯化后的产品进行灭活疫苗成品的制备 0101020203030404.0101020203030404膜分离技术超速离心凝胶过滤层析（gel filtration chromatography，GF）离子交换层析（ion-exchange chromatography，IEC）肠道病毒 71 型灭活疫苗分离纯化方法0505疏水相互作用层析（hydrophobic interaction chromatography，HIC）.03Options02Options01Options疫苗标准方面国家质量控制和审评部门结合2010版 中华人民共和国药典 和修订企业注册标准中对预防性疫苗的要求，对申报临床试验的灭活疫 苗 毒 株、原 液 和 成 品 标 准 进 行 规 范 和 统一。对种子库要求 疫 苗 主 要 保 护 区 氨 基 酸 序列在三级种子批均保持一致；疫苗纯度控制方面在疫苗纯度控制上，高效液相色谱法（）规定颗粒峰面积不低于，疫苗动物效力统一修定为以针后半数有效量（）作 为 效 力 指 标，保证了疫苗生产的一致性和有效性；标准品方面中国食品药品检定研究院（中检院）联合家企业已完成了疫苗中和抗体检测标准品和疫苗抗原定量标 准品的研制（国生标字、）。正在开展的疫苗标准研究 包括：比 活 一 致 性 标 准，细 胞 残 余N标准等；开展的疫苗标准品研究 包括疫苗效力标准品和冻干标准中和抗体检测株等.目前，亚洲地区进入临床试验阶段的灭活疫苗有 5 家(其中 3 家来自中国大陆，另外 2 家分别来自我国台湾和新加坡)，他们采用的病毒株、细胞系、培养技术和免疫佐剂有所不同(表 1)北京微谷生物医药有限公司(Vigoo)、中国科兴生物制品有限公司(Inovac)和中国医学科学院(CAMS)所研制的疫苗在 2013 年已完成了临床期试验，而我国台湾国家卫生研究院(NHI)和新加坡Inviragen公司研制的疫苗正在进行临床期试验(表 2)。.Vigoo 以 160、320和 640 U 剂量加以氢氧化铝佐剂的福尔马林灭活疫苗随机接种包括 12 36 月龄儿童和 6 11 月龄婴儿在内的 12 000名受试者。结果显示，疫苗仍然具有较好的疫苗效能，可使约 90%的受试者能抵御 HFMD，80%的抵御疱疹性咽峡炎或相关神经症状。Sinovac 分别以 400 U 加以氢氧化铝佐剂的疫苗或安慰剂随机接种 10 077 名受试者，其疫苗效能可达 88%以上。CAMS 则对 12 000 名 6 71 月龄的婴儿和儿童随机接种了 100 U 疫苗或安慰剂，疫苗也显示出了良好的安全性和免疫原性，但具体信息不详NHI 研制的疫苗不仅对EV71B1、B5 和 C4A 亚型具有较强的中和活性，对柯萨奇病毒 A16 也有一定的交叉中和活性在在期试验中期试验中.中国医学科学院医学生物学研究所全球首个针对肠道病毒71型（EV71）感染所致手足口病的创新疫苗通用名称：肠道病毒71型灭活疫苗（人二倍体细胞）英文名称：Enterovirus Type 71 Vaccine,Inactivated（Human Diploid Cell）（1）疫苗毒种是我国流行株，具有良好的免疫原性和抗原交叉反应性。（2）细胞基质采用人胚肺二倍体细胞，有效保证在儿童群体中使用的安全性。（3）生产技术采用细胞工厂大规模培养技术，有效提高疫苗产能和质量。（4）建立的疫苗保护性评价婴猴动物模型，为开展疫苗保护性效果的系统分析和评价创造基础条件。（5）对不同基因型毒株的交叉保护试验，进一步证明该疫苗对多数基因型别的EV71感染均具有保护效果。（6）疫苗诱导免疫反应的相关研究，为进一步阐明EV71感染致病机制及疫苗免疫学机理提供了大量数据和资料。是目前国内外新型疫苗研发中的重要创新点。.北京科兴生物制品有限公司自主研发的预防用生物制品1类新药益尔来福获批通用名称：肠道病毒71型灭活疫苗（Vero细胞）英文名称：Enterovirus Type 71 Vaccine,Inactivated（Vero Cell）全球首创预防用生物制品1类新药 对EV71所致手足口病的保护率高达94.6%对EV71所致手足口病重症和住院病例保护率为100%稳定性良好，有效期长达3年 不添加防腐剂与稳定剂，进一步降低安全风险 全球最高标准控制Vero细胞宿主蛋白与DNA残留.灭活疫苗仍然存在问题123EV71 免疫保护机制复杂，除体液免疫外，细胞免疫也发挥着重要的作用。然而，灭活疫苗主要诱导的是体液免疫，细胞免疫不够充分。灭活疫苗生产和运输成本高昂。疫苗效力较高而疫苗价格较低的常规免疫才符合我国的成本效益，这可能会制约灭活疫苗的应用。EV71 本身存在抗体依赖性增强感染现象，不恰当的疫苗接种有可能会增加重症病例的风险。.参考文献1.梁燕,赵红玲,刘龙丁,廖芸,董承红,纳锐雄,et al.肠道病毒71型灭活疫苗的规模化制备和免疫原性研究J.中国病毒病杂志.2012(06).2.梁争论.我国肠道病毒71型灭活疫苗研发现状J.中国病毒病杂志.2012(06).3.马洁,邓永强,秦成峰,秦鄂德.肠道病毒71型疫苗研究进展J.军事医学.2015(07).4.王一平,姚昕,毛群颖,梁争论.肠道病毒71型疫苗质量控制研究进展J.微生物学免疫学进展.2015(05).5.肖慧,明平刚,陈晓琦,徐葛林.肠道病毒71型灭活疫苗分离纯化方法的研究进展J.中国生物制品学杂志.2015(10).大谢谢家！.