1、1.1.细胞计数方法细胞计数方法(1)(1)显微镜细胞直接计数法:原理显微镜细胞直接计数法:原理(2)(2)显微镜细胞间接计数法:原理显微镜细胞间接计数法:原理2.2.血液组成和红细胞发育过程血液组成和红细胞发育过程3.3.手工显微镜法红细胞计数手工显微镜法红细胞计数 掌握掌握原理原理、试剂试剂、方法、方法、计算计算、注意事项注意事项、参考值参考值显微镜细胞计数法显微镜细胞计数法血细胞计数仪计数法血细胞计数仪计数法直接计数法直接计数法间接计数法间接计数法(比值计数法)(比值计数法)将标本作适当稀释将标本作适当稀释(或浓缩或浓缩)后直接在显后直接在显微镜下计数一定容积内的细胞,经换算微镜下计数一
2、定容积内的细胞,经换算可知单位体积标本中的细胞数。可知单位体积标本中的细胞数。一、原理一、原理二、应用二、应用常用于常用于血细胞计数、尿沉渣定量分析、血细胞计数、尿沉渣定量分析、脑脊液细胞计数、浆膜腔积液细胞计数、脑脊液细胞计数、浆膜腔积液细胞计数、精子计数精子计数等。等。1.1.显微镜显微镜三三.器材器材2.2.微量吸管微量吸管3.3.计数板:改良计数板:改良NeubauerNeubauer计数板计数板21.1.取小试管加白细胞稀释液取小试管加白细胞稀释液0.38ml0.38ml。四四.操作操作以白细胞计数为例以白细胞计数为例2.2.微量吸管准确吸取血液微量吸管准确吸取血液20ul20ul。
3、3.3.擦去管尖外余血擦去管尖外余血,将吸管插入试管底将吸管插入试管底,轻轻将血吹出,并吸上清液漱洗微量轻轻将血吹出,并吸上清液漱洗微量 吸管内的余血,洗吸管内的余血,洗2 23 3次,混匀。次,混匀。4.4.充液,静置充液,静置2 23min3min,待白细胞下沉。,待白细胞下沉。5.5.低倍镜计数四角四个大方格内的白细低倍镜计数四角四个大方格内的白细 胞数。胞数。五五.计算计算WBC/L所数所数WBC总数总数/4/4所数所数WBC总数总数/2010/20109 91010202010106 6例:例:红细胞稀释液红细胞稀释液1.99ml1.99ml,加血,加血10ul10ul,混匀。充液,
4、静置混匀。充液,静置2 23min3min,计数中央大,计数中央大方格内四角和正中五个中方格内的红细方格内四角和正中五个中方格内的红细胞胞,共共600600个个,请计算红细胞计数结果。请计算红细胞计数结果。RBC/LRBC/L600600 /525525 1010200200 10106 66.0106.0101212一、原理一、原理二、应用二、应用将待测标本制成涂片,经适当染色将待测标本制成涂片,经适当染色后,显微镜下计数待测细胞的后,显微镜下计数待测细胞的相对比相对比值值,结果以分数或百分率表示,或换,结果以分数或百分率表示,或换算成单位体积标本中的细胞数。算成单位体积标本中的细胞数。常用
5、于常用于白细胞分类计数白细胞分类计数、网织红细胞网织红细胞计数计数和和点彩红细胞计数点彩红细胞计数等。等。血细胞血细胞(45%)血浆血浆(55%)红细胞红细胞白细胞白细胞血小板血小板中性粒细胞中性粒细胞嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞淋巴细胞淋巴细胞单核细胞单核细胞固体成分固体成分 (8 89 9%)水水(9192%)血浆蛋白血浆蛋白非蛋白类非蛋白类无机盐无机盐纤维蛋白原纤维蛋白原清蛋白清蛋白球蛋白球蛋白血血 液液血血 清清血血 浆浆全全 血血红细胞计数(红细胞计数(RBCRBC)血红蛋白测定(血红蛋白测定(Hb,HGBHb,HGB)红细胞形态检查红细胞形态检查血细胞比容测定(
6、血细胞比容测定(Hct,HCT,Ht,PCVHct,HCT,Ht,PCV)网织红细胞计数(网织红细胞计数(Ret,RETRet,RET)点彩红细胞计数点彩红细胞计数红细胞沉降率测定(红细胞沉降率测定(ESRESR)红细胞平均指数红细胞平均指数红细胞体积分布宽度红细胞体积分布宽度原红原红 早幼红早幼红 中幼红中幼红 晚幼红晚幼红 网织红网织红 红细胞红细胞骨髓造血干细胞骨髓造血干细胞EpoEpo红系祖细胞红系祖细胞erythrocyte red blood cell (blood routine)用用等渗稀释液等渗稀释液将血液稀释一定倍数,充将血液稀释一定倍数,充入计数池中,于显微镜下计数一定体
7、积入计数池中,于显微镜下计数一定体积内的红细胞数,经过换算求得每升血液内的红细胞数,经过换算求得每升血液中的红细胞数量。中的红细胞数量。一一.原理原理(red blood cell count,RBC)1.1.显微镜显微镜二二.器材器材2.2.微量吸管微量吸管3.3.计数板:改良计数板:改良NeubauerNeubauer计数板计数板氯化钠氯化钠 1.0 1.0g g结晶硫酸钠结晶硫酸钠 5.0 5.0g g氯化高汞氯化高汞 0.5 0.5g g蒸馏水蒸馏水 加至加至200200mlml三三.试剂试剂赫姆氏(赫姆氏(HayemHayem)红细胞稀释液红细胞稀释液 氯化钠:调节渗透压氯化钠:调节
8、渗透压硫酸钠:提高比密,防止红细胞粘连。硫酸钠:提高比密,防止红细胞粘连。氯化高汞:防腐剂氯化高汞:防腐剂(RBC)四四.方法方法1.1.小试管加小试管加RBCRBC稀释液稀释液1.991.99mlml。2.2.采血,取血采血,取血1010ulul。3.3.擦去管外的血擦去管外的血,轻吹入试管底部,轻吹入试管底部,再再漱洗吸管漱洗吸管2 2 3 3次,次,立即混匀立即混匀。4.4.混匀混匀后充入计数室后充入计数室,静置静置3 3 5 5 minmin,高倍镜下计数。高倍镜下计数。(RBC)充液位置充液位置充液位置充液位置为为红红细细胞胞计计数数区区域域压线细胞的计数原则压线细胞的计数原则:数左
9、不数右数左不数右,数上不数下数上不数下五五.计算计算RBC/LRBC/L5 5个中方格内个中方格内RBCRBC数数/5/52525101020020010106 6 5 5个中方格内个中方格内RBCRBC数数/100/10010101212 六六.报告方式报告方式10101212L L R R B B C C :(RBC)七七.参考值参考值男性:男性:(4.0 (4.05.5)105.5)101212L L 女性:女性:(3.5 (3.55.0)105.0)101212L L新生儿:新生儿:(6.0(6.07.0)107.0)101212L L 400 400550550 万万/ulul 35
10、0 350500500 万万/ulul(RBC)八八.注意事项注意事项1.1.采血时不要过分挤压。采血时不要过分挤压。2.2.取血量必须准确,动作要迅速,防止取血量必须准确,动作要迅速,防止 血液凝固。血液凝固。3.3.血液加入稀释液后,应立即混匀。血液加入稀释液后,应立即混匀。4.4.充池前要摇匀充池前要摇匀,充池时不能产生气泡。,充池时不能产生气泡。5.5.压线细胞应数上不数下压线细胞应数上不数下,数左不数右。数左不数右。(RBC)1.1.HayemHayem红细胞稀释液由哪些成分组成?红细胞稀释液由哪些成分组成?各有什么作用?各有什么作用?2.2.请说出红细胞计数的参考值。请说出红细胞计数的参考值。3.3.取静脉血取静脉血2020ll加至加至0.780.78mlml白细胞稀释液白细胞稀释液 内,混匀,滴入计数盘,计数五个大方内,混匀,滴入计数盘,计数五个大方 格中白细胞数为格中白细胞数为625625个,则应报告白细胞个,则应报告白细胞 计数结果为计数结果为 A.50010 A.500109 9/L B.25.010/L B.25.0109 9/L/L C.50.010 C.50.0109 9/L D.62.5I0/L D.62.5I09 9/L/L