甲醛消毒剂对洁净区消毒效果的验证方案.doc

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甲醛消毒剂对洁净区消毒效果的验证方案
1 目的
检查并确认甲醛消毒剂对洁净区的消毒效果，使洁净区符合GMP、产品的生产工艺规程、检验规程的要求。
2 范围
本方案适用于XXXXXXXXX股份有限公司(以下简称公司)甲醛消毒剂对洁净区的消毒效果的验证。
3 责任人
验证成员由生产一部技术人员和操作人员、质检部技术人员和操作人员、生产计划部人员、总工程师、副总经理组成。
质检部负责组织制定验证方案、验证中取样检验和验证资料的归口管理。
生产一部负责协助配合质检部制定和实施验证方案。
生产计划部负责验证工作的协调。
总工程师负责验证文件的审核。
副总经理负责验证文件的批准。
4 验证依据
洁净区技术要求
SMP07001A0 验证管理程序
5 概述
洁净区是进行最终和非最终灭菌产品生产、口服溶液产品生产、灌装或组装、封盖以及进行产品的微生物培养和检验的工作场地。本公司洁净区消毒方法是用注射用水进行清洁卫生后，用适当浓度的消毒剂对洁净区的墙面、顶棚、地面、门窗及工作台等进行擦拭，并向空间喷洒适量的消毒剂或进行熏蒸、用紫外灯照射，以达到消毒灭菌的目的，使洁净区能满足该洁净区的要求以及使洁净区符合GMP、产品的生产工艺规程、检验规程的要求。甲醛消毒剂对洁净区消毒效果的验证主要由消毒剂、消毒剂浓度、注射用水等的确认和消毒后效果及有效期的确认等组成，以证明所用的甲醛消毒剂对洁净区的消毒是可行的。
6 验证方法
通过用甲醛消毒剂对洁净区消毒后，用生物指示剂进行细菌挑战性试验、表面污染试验，确认洁净区能达到该洁净区的要求、符合GMP和本公司产品生产工艺、检验规程的要求。
7 验证程序
7.1 甲醛消毒剂、注射用水的确认
对甲醛消毒剂、注射用水进行核对，应符合规定要求，结果见下表。
名称
生产厂家
生产批号
核对结果
甲醛

是□ 否□
注射用水

是□ 否□
核对人/日期

复核人/日期

7.2 消毒剂浓度的确认
对甲醛消毒剂浓度进行核对，应符合规定，结果见下表。
清毒剂名称
消毒剂浓度
核对结果
甲醛
37%--40%
是□ 否□
核对人/日期

复核人/日期

7.3 甲醛对洁净区消毒效果的验证
7.3.1 甲醛溶液对洁净区消毒效果的挑战性试验
甲醛溶液对洁净区消毒效果的挑战性试验方法是：用纯化水或注射用水对洁净区进行清洁后，将装有枯草芽孢杆菌的生物指示剂(使用前测定其初期数，应不少于10个)表皿置于被测洁净区的中央地面，打开表皿，然后将甲醛溶液倒入一干净烧杯中并置于电炉上，加热使其蒸发，直至蒸发近干，熏蒸量按8—9ml/m3计算，关闭洁净区的门窗至少8小时，消毒结束后，开启空调净化系统，并将枯草芽孢杆菌生物指示剂放入大豆酪素消化液体培养基中，在37℃下培养3天，观察测枯草芽孢杆菌是否被杀灭，若没有枯草芽孢杆菌生长，则为合格。试验结果见下表。
试验次数
生物指示剂个数
枯草芽孢杆菌培养温度(℃)
培养时间 (天)
枯草芽孢杆菌是否被杀灭
结论(是否符合规定)
1
1

是□ 否□
是□ 否□
2

是□ 否□
是□ 否□
3

是□ 否□
是□ 否□
2
1

是□ 否□
是□ 否□
2

是□ 否□
是□ 否□
3

是□ 否□
是□ 否□
3
1

是□ 否□
是□ 否□
2

是□ 否□
是□ 否□
3

是□ 否□
是□ 否□
测试人/日期

复核人/日期

7.3.2 甲醛溶液对洁净区消毒效果的表面污染试验
甲醛溶液对洁净区消毒效果的表面污染试验方法是：用纯化水或注射用水对洁净区进行清洁后，将甲醛溶液倒入一干净烧杯中并置于电炉上，加热使其蒸发，直至蒸发近干，熏蒸量按8—9ml/m3计算，关闭洁净区的门窗至少8小时，消毒结束后，开启空调净化系统，洁净区内的墙壁、地面、工作台等表面用事先经过灭菌的生理盐水、注射用水或缓冲液(磷酸缓冲生理盐水)浸润的适当大小的灭菌纱布或灭菌脱脂棉充分擦拭约10Cm2的面积，然后放入经灭菌处理的广口瓶中，加入一定量的注射用水振摇，对其进行浸取，将浸取液倒入装有牛肉汤培养液的培养皿中，进行细菌培养，至少培养3天，若无细菌生长，则为合格。试验结果见下表。

擦拭位置
取样个数
细菌培养温度(℃)
培养时间 (天)
是否有细菌
生长
结论(是否符合规定)
墙壁
1

是□ 否□
是□ 否□
2

是□ 否□
是□ 否□
3

是□ 否□
是□ 否□
地面
1

是□ 否□
是□ 否□
2

是□ 否□
是□ 否□
3

是□ 否□
是□ 否□
工作台
1

是□ 否□
是□ 否□
2

是□ 否□
是□ 否□
3

是□ 否□
是□ 否□
测试人/日期

复核人/日期

7.3.3 甲醛溶液对洁净区消毒效果的有效期验证
甲醛溶液对洁净区消毒效果的有效期验证方法是：用纯化水或注射用水对洁净区进行清洁后，将甲醛溶液倒入一干净烧杯中并置于电炉上，加热使其蒸发，直至蒸发近干，熏蒸量按8—9ml/m3计算，关闭洁净区的门窗至少8小时，消毒结束后，开启空调净化系统，分别在0、6、12、24、32、40、48小时，对洁净区内的同一地面用事先经过灭菌的生理盐水、注射用水或缓冲液(磷酸缓冲生理盐水)浸润的适当大小的灭菌纱布或灭菌脱脂棉充分擦拭约10Cm2的面积，然后放入经灭菌处理的广口瓶中，加入一定量的注射用水振摇，对其进行浸取，将浸取液倒入装有牛肉汤培养液的培养皿中，进行细菌培养，至少培养3天，以培养出细菌的取样点确定甲醛溶液对洁净区消毒效果的有效期。试验结果见下表。
消毒后取样时间(小时)
细菌培养温度(℃)
培养时间 (天)
是否有细菌
生长
结论(是否符合规定)
0

是□ 否□
是□ 否□
6

是□ 否□
是□ 否□
12

是□ 否□
是□ 否□
24

是□ 否□
是□ 否□
32

是□ 否□
是□ 否□
40

是□ 否□
是□ 否□
48

是□ 否□
是□ 否□
有效期(小时)

测试人/日期

复核人/日期

7.3.4 甲醛溶液熏蒸灭菌后洁净区环境中残留量的测试
7.3.4.1 试液准备
(1) 甲醛标准溶液
a 甲醛稀释液：准确移取符合中国药典标准的“甲醛溶液”1mL，加水准确稀释至200mL作为甲醛稀释液。准确移取该溶液10mL至碘瓶内，准确加0.1mol/L碘液50mL，再加入1mol/L氢氧化钾溶液20mL。避光放置15分钟后，加入15mL的10%硫酸，用0.1mol/L硫代硫酸钠溶液滴定。另用水10mL进行空白试验。
甲醛稀释液中的甲醛浓度(mg/mL)=
式中 VA—甲醛稀释液消耗0.1mol/L硫代硫酸钠溶液体积(mL)
VB—空白试验消耗0.1mol/L硫代硫酸钠溶液体积(mL)
1.5013—1mL碘液(0.1mol/L)相对甲醛的量(mg)
10—甲醛稀释液取样量(mL)
b 甲醛标准液：准确移取甲醛稀释液，加水准确稀释1000倍，即得(ug/mL)
(2) AHMT溶液：取4-氨基-3-肼-5-巯基-1，2，4-三唑0.5克，加0.2mol/L盐酸100mL溶解，避光保存。
7.3.4.2 取样方法及取样量
用纯化水或注射用水对洁净区进行清洁后，将甲醛溶液倒入一干净烧杯中并置于电炉上，加热使其蒸发，直至蒸发近干，熏蒸量按8—9ml/m3计算，关闭洁净区的门窗至少8小时，消毒结束后，开启空调净化系统，分别在0、1、2、4、6、8、10小时用30L的塑料袋收集熏蒸洁净区内的空气，将袋内空气用由吸收瓶、泵、气流计等组成的装置捕集至瓶内吸收液中(n=3)。
7.3.4.3 供试液的配制
取0.5%硼酸溶液20mL作为吸收液，用溶液吸收法，以1L/min的速度分别让不同时间的取样空气通过10min，然后将吸收液移至25.0mL的容量瓶中，加水稀释至25.0mL，即得。
7.3.4.4 试验操作及测试结果
(1)取供试液2.0mL至带栓试管中，加5mol/L氢氧化钠溶液2.0mL，及AHMT溶液2.0mL，轻摇数次混匀后，室温放置20min。然后加高碘酸钾溶液2.0mL，摇2—5分钟至无气泡生成止；同时用水2.0mL同法制成对照液，在550nm附近测最大吸光度。
(2)分别取甲醛标准液0、0.5、1.0、1.5、2.0mL，加水使成2.0mL，然后按(1)操作，测定吸光度，制出甲醛浓度(ug/mL)与吸光度的关系检量线。环境中的甲醛浓度(ppm)可由下式求出：
甲醛浓度(ppm)=
式中 a—供试液中甲醛浓度(ug/mL)
V—采样气体量(L)
t—采样时平均温度
22.4—1mol气体在0℃，1个大气压下的体积(L)
30.03—甲醛分子量
25—供试液全量(mL)
甲醛熏蒸洁净区后在不同时间的残留量测试结果见下表：
消毒后取样时间
(小时)
测试结果
(ppm)
测试方法
是否符合要求
结论(是否符合国家环境标准)
0

是□ 否□
是□ 否□
1

是□ 否□
是□ 否□
2

是□ 否□
是□ 否□
4

是□ 否□
是□ 否□
6

是□ 否□
是□ 否□
8

是□ 否□
是□ 否□
10

是□ 否□
是□ 否□
换气时间

测试人/曰期

复核人/曰期

8 验证结果分析及评价
根据甲醛溶液对洁净区消毒效果的验证结果进行分析和评价，并规定出各种甲醛消毒剂的消毒有效期。甲醛溶液消毒剂的消毒效果，相关资料及文件应符告GMP规定要求，测试结果应能达到该洁净区的要求。若验证结果不符合要求，应提出解决办法、建议或改进意见。填写下表。
验证项目
甲醛消毒剂对洁净区消毒效果的验证
完成日期

验证结果分析和评价(必须含有效期)

负责人/日期
验证成员签名

备注

9 验证周期
洁净区在投入使用前用甲醛消毒时应进行验证。
洁净区在正常使用一段时间后，应定期对甲醛的消毒效果进行验证，验证周期一般为一年。
若洁净区长期停用后启用，应重新对甲醛的消毒效果进行验证。
5771001803090012095 579036822859633082
5771001803090012386 576137399735760696
5771001803090013594 578077579902515512
5771001803090012387 577164982601818051
5771001803090012138 572131192158918326
5771001803090012359 579036822361076053
5771001803090012356 576135286143791742
5771001803090012355 575087869704693279

17088100343355274 101229944325833379
17088100343355275 101866732938832008
17088100343356107 101581152501500522
17088100343356108 101000180059871732
17088100343354295 101074194142687017
17088100343356184 101878660869628802
17088100343356185 101775831174086674
17088100343356109 101086014373572846
17088100343356110 101152207216014916
17088100343355237 101027041605702709
17088100343355238 101229364861425414
17088100343356169 101862204402635718
17088100343354928 101760654089788804