鮰鱼蛋白ACE抑制肽的酶法制备及分离纯化.pdf

D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 0-9 9 7 3.2 0 2 3.0 9.0 1 2引文格式:李佳伶,关诗琦,蒋思雨,等.鮰鱼蛋白A C E抑制肽的酶法制备及分离纯化J.中国调味品,2 0 2 3,4 8(9):6 9-7 4,9 3.L I J L,GUAN S Q,J I AN G S Y,e t a l.P r e p a r a t i o n o f A C E i n h i b i t o r y p e p t i d e f r o m l o n g s n o u t c a t f i s h p r o t e i n b y e n z y m a t i c m e t h o d a n d i t s s e p a r a t i o n a n d p u r i f i c a t i o nJ.C h i n a C o n d i m e n t,2 0 2 3,4 8(9):6 9-7 4,9 3.鮰鱼蛋白A C E抑制肽的酶法制备及分离纯化李佳伶1,关诗琦1,蒋思雨1,蔡寅川2,郝刚1*(1.西南民族大学 食品科学与技术学院,成都 6 1 0 0 4 1;2.四川阿坝州工业经济研究所,四川 汶川 6 2 3 0 0 0)摘要:以脱脂后的鮰鱼肉为原料,采用分步酶解法制备血管紧张素转化酶(A C E)抑制肽,通过正交试验优化酶解条件。最佳酶解工艺:调节p H为8,温度为3 7,底物浓度为0.1 7 g/m L,先加胰蛋白酶,酶活/底物量为6 U/m g,水解1 h后再调节p H为 9,温度为5 5,再加入碱性蛋白酶,酶活/底物量为6 U/m g,水解4 h。在此条件下,鮰鱼肉蛋白水解度为1 2.6 3%,酶解液A C E抑制率为1 8.7%。分子量分布分析发现酶解产物分子量主要分布在5 0 0 D a以下,占多肽的9 8.2 3%。酶解产物经超滤(3 0 0 0 D a)分离后A C E抑制率提高至3 5.4%,再用D A 2 0 1-C大孔吸附树脂脱盐后A C E抑制率为5 6.6%,最后用葡聚糖凝胶G-1 5柱层析进行纯化后得到3个组分,组分G2的A C E抑制率为6 6.9%。经过分离纯化后的A C E抑制肽活性相比原酶解液提高了3.6倍。关键词:鮰鱼;A C E抑制肽;酶解;分子量分布;分离纯化中图分类号:T S 2 0 1.2 1 文献标志码:A 文章编号:1 0 0 0-9 9 7 3(2 0 2 3)0 9-0 0 6 9-0 6P r e p a r a t i o n o f A C E I n h i b i t o r y P e p t i d e f r o m L o n g s n o u t C a t f i s h P r o t e i n b y E n z y m a t i c M e t h o d a n d I t s S e p a r a t i o n a n d P u r i f i c a t i o nL I J i a-l i n g1,GUAN S h i-q i1,J I ANG S i-y u1,C A I Y i n-c h u a n2,HAO G a n g1*(1.C o l l e g e o f F o o d S c i e n c e a n d T e c h n o l o g y,S o u t h w e s t M i n z u U n i v e r s i t y,C h e n g d u 6 1 0 0 4 1,C h i n a;2.R e s e a r c h I n s t i t u t e o f I n d u s t r i a l E c o n o m y o f A b a P r e f e c t u r e i n S i c h u a n P r o v i n c e,W e n c h u a n 6 2 3 0 0 0,C h i n a)A b s t r a c t:I n t h i s p a p e r,s k i mm e d l o n g s n o u t c a t f i s h m e a t i s u s e d a s t h e r a w m a t e r i a l t o p r e p a r e a n g i o t e n s i n I-c o n v e r t i n g e n z y m e(A C E)i n h i b i t o r y p e p t i d e b y s t e p w i s e e n z y m a t i c h y d r o l y s i s m e t h o d.T h e e n z y m a t i c h y d r o l y s i s c o n d i t i o n s a r e o p t i m i z e d b y o r t h o g o n a l t e s t.T h e o p t i m a l e n z y m a t i c h y d r o l y s i s c o n d i t i o n s a r e a s f o l l o w s:p H i s a d j u s t e d t o 8,t e m p e r a t u r e i s 3 7,s u b s t r a t e c o n c e n t r a t i o n i s 0.1 7 g/m L,t r y p s i n i s a d d e d f i r s t l y,e n z y m e a c t i v i t y/s u b s t r a t e c o n t e n t i s 6 U/m g,b e i n g h y d r o l y z e d f o r 1 h,a n d t h e n p H i s a d j u s t e d t o 9,t e m p e r a t u r e i s 5 5,a n d t h e n a l k a l i n e p r o t e a s e i s a d d e d,e n z y m e a c t i v i t y/s u b s t r a t e c o n t e n t i s 6 U/m g,b e i n g h y d r o l y z e d f o r 4 h.U n d e r s u c h c o n d i t i o n s,t h e h y d r o l y s i s d e g r e e o f l o n g s n o u t c a t f i s h m e a t p r o t e i n i s 1 2.6 3%,a n d t h e A C E i n h i b i t i o n r a t e o f e n z y m a t i c h y d r o l y s a t e i s 1 8.7%.T h e m o l e c u l a r w e i g h t d i s t r i b u t i o n a n a l y s i s r e s u l t s s h o w t h a t t h e m o l e c u l a r w e i g h t d i s t r i b u t i o n o f t h e h y d r o l y s a t e i s m a i n l y b e l o w 5 0 0 D a,a c c o u n t i n g f o r 9 8.2 3%o f t h e p o l y p e p t i d e s.A f t e r s e p a r a t i o n b y u l t r a f i l t r a t i o n(3 0 0 0 D a),t h e A C E i n h i b i t o r y r a t e o f e n z y m a t i c h y d r o l y s a t e i n c r e a s e s t o 3 5.4%,a n d a f t e r d e s a l i n a t i o n w i t h D A 2 0 1-C m a c r o p o r o u s a d s o r p t i o n r e s i n,t h e A C E i n h i b i t o r y r a t e i s 5 6.6%.F i n a l l y,t h r e e c o m p o n e n t s a r e o b t a i n e d a f t e r p u r i f i c a t i o n w i t h S e p h a d e x G-1 5 c o l u m n c h r o m a t o g r a p h y,a n d t h e A C E i n h i b i t o r y r a t e o f c o m p o n e n t G2 i s 6 6.9%.A f t e r s e p a r a t i o n a n d p u r i f i c a t i o n,t h e a c t i v i t y o f A C E i n h i b i t o r y p e p t i d e i s 3.6 t i m e s h i g h e r t h a n t h a t o f t h e o r i g i n a l e n z y m a t i c h y d r o l y s a t e.K e y w o r d s:l o n g s n o u t c a t f i s h;A C E i n h i b i t o r y p e p t i d e;e n z y m a t i c h y d r o l y s i s;m o l e c u l a r w e i g h t d i s t r i b u t i o n;s e p a r a t i o n a n d p u r i f i c a t i o n收稿日期:2 0 2 3-0 3-0 4基金项目:西南民族大学大学生创新创业项目(S 2 0 2 3 1 0 6 5 6 1 0 5)作者简介:李佳伶(2 0 0 2-),女,硕士,研究方向:功能活性肽。*通信作者:郝刚(1 9 7 8-),男,副教授,博士,研究方向:生物活性肽。高血压是引发心血管疾病的重要危险因素,严重威胁着人类的健康。血管紧张素转化酶抑制剂(a n g i o t e n s i n I-c o n v e r t i n g e n z y m e i n h i b i t o r,A C E I)作为有效治疗高血压的药物被广泛用于临床治疗。化学合成类抑制剂96第4 8卷 第9期2 0 2 3年9月 中 国 调 味 品C h i n a C o n d i m e n t基础研究 通常药效短,停药后易反弹,长期服用还具有一定的毒副作用1-2。食源性A C E抑制肽由于安全性高、副作用小、易吸收,逐渐成为国内外研究的热点。许多研究表明鱼源蛋白是很好的A C E抑制肽来源。目前已通过酶解方法生产出多种A C E抑制肽,如鲅鱼源A C E抑制肽3、鲢鱼源A C E抑制肽4、鳕鱼源A C E抑制肽5、沙丁鱼A C E抑制肽等6。斑点叉尾鮰(I c t a l u r u s p u n c t a t u s)具有适养范围广、生长速度快、体积大、肉质优良等特点7。中国鮰鱼产量占世界产量的比例基本稳定在6 5%左右8。随着市场需求的提高,鮰鱼养殖业的规模逐渐扩大,我国鮰鱼产业面临着供大于求、品种淘汰等诸多问题9。因此,大力开发转化鮰鱼加工产品、促进国内市场发展是改变现状的不二选择。在酶解鱼类蛋白生产A C E抑制肽过程中,为了维持p H值恒定需不断加入碱液,导致酶解产物盐分过高,用大孔树脂脱盐具有吸附、解吸迅速、回收率高、再生容易等优点。许多研究表明A C E抑制肽呈现分子量小的特点1 0,因此可采用超滤和分子排阻色谱根据分子量大小对A C E抑制肽进行分离纯化。本试验以脱脂后的鮰鱼肉为原料,采用分步酶解法制备A C E抑制肽1 1-1 2,对制备工艺进行优化,并对酶解产物进行分子量分布分析,采用超滤离心、大孔吸附树脂和葡聚糖凝胶G-1 5对酶解产物进行分离纯化,获得活性更高的A C E抑制肽,为拓宽国内市场,开发来源广泛、安全性高的鮰鱼加工产品提供了理论基础。1 材料与方法1.1 材料与仪器斑点叉尾鮰鱼:农贸市场;胰蛋白酶(2 5 0 U/g)、胃蛋白酶(3 0 0 0 U/m g)和碱性蛋白酶(2 0 0 0 0 0 U/g):北京鸿润宝顺科技有限公司;血管紧张素转化酶(A C E)和马脲酰组氨酰亮氨酸(HH L):美国S i g m a公司;马尿酸(HA)、罗恩试剂、2,4,6-三硝基苯磺酸:北京伊诺凯科技 有 限 公 司;D A 2 0 1-C大 孔 树 脂 和 葡 聚 糖 凝 胶S e p h a d e x G-1 5:北京索莱宝科技有限公司;其他试剂均为国产分析纯与色谱纯。C e n t r i f u g e 5 8 0 4 R高速离心机 德国E p p e n d o r f(艾本德)公司;真空冷冻干燥机 德国C h r i s t公司;UV 1 8 1 0 S紫外可见分光光度计 上海佑科仪器仪表有限公司;1 2 6 0高效液相色谱仪 安捷伦科技有限公司;3 0 0 0 D a超滤离心管 M i l l i p o r e公司;玻璃层析柱(1.6 c m 5 0 c m)、恒流泵、自动部分收集器、紫外检测器和电脑采集器 上海沪西分析仪器厂有限公司。1.2 试验方法1.2.1 原料预处理采用离心法脱脂1 3,将鱼肉清洗后去皮,用蒸馏水漂洗2 0 m i n后,以4 0 0 0 r/m i n离心1 0 m i n,得到脱脂后的鱼肉,分装,于-2 0 备用。1.2.2 双酶分步酶解鮰鱼蛋白的用酶筛选向预处理的鱼肉中加入蒸馏水,匀浆后调节第一种酶的最适p H值、温度、底物浓度及酶活/底物量,加入酶搅拌均匀,置于控温磁力搅拌器酶解,保持反应体系p H值、温度恒定,达到反应时间后调节第二种酶的最适p H值、温度,加入第二种酶继续反应。反应结束后,将酶解液置于8 0 水浴锅中灭酶2 0 m i n,冷却后,以1 0 0 0 0 r/m i n离心2 0 m i n,取上清液,测定水解度及A C E抑制活性,酶解条件及酶解组合顺序见表1和表2。酶解液冷冻干燥后待用。表1 不同蛋白酶酶解条件T a b l e 1 E n z y m a t i c h y d r o l y s i s c o n d i t i o n s o f d i f f e r e n t p r o t e a s e s酶种类底物浓度/(g/mL)酶活/底物量/(U/m g)p H酶解温度/酶解时间/h碱性蛋白酶0.1 759.05 04胰蛋白酶0.1 758.03 74胃蛋白酶0.1 751.53 74表2 分步酶解组合T a b l e 2 S t e p w i s e e n z y m a t i c h y d r o l y s i s c o m b i n a t i o n s组号第一步酶解酶解时间/h第二步酶解酶解时间/h1碱性蛋白酶4/2胃蛋白酶1胰蛋白酶43胰蛋白酶1碱性蛋白酶41.2.3 鮰鱼蛋白酶解条件的优化以p H、温度、酶解反应时间、底物浓度和酶活/底物量5个酶解条件为因素,以水解度为指标,考察各因素对酶解的影响。根据单因素试验结果设计三因素三水平正交试验,用统计分析软件S P S S 1 8.0对正交试验结果进行数据分析,确定最佳酶解工艺。1.2.4 水解度(DH)的测定采用T N B S法测定水解度,参考周慧江等1 4的方法略作修改。配制浓度为0.0 2,0.0 4,0.0 6,0.0 8,0.1 0 m m o l/L的亮氨酸标准液。吸取0.1 m L亮氨酸标准液,加入2 m L 5 0 预热的0.2 m o l/L、p H为8.2的磷酸盐缓冲液(P B S),加 入1 m L 0.1%的2,4,6-三硝 基苯磺酸(T N B S)快速振荡,于5 0 水浴锅中避光反应6 0 m i n,再加入4 m L 0.1 m o l/L的HC l快速终止反应,于室温下静置3 0 m i n后在3 4 0 n m波长下测定吸光值,以蒸馏水代替亮氨酸反应作参比,以亮氨酸浓度为横坐标、吸光度为纵坐标,绘制亮氨酸标准曲线。其标准曲线方程为y=0.1 2 4 3x,R2为0.9 9 9 2。取酶解液1 m L(空白对照为纯水),加入1 5 m L 1%十二烷基硫酸钠(S D S)溶液,得到待测液。吸取0.1 m L待测液,加入2 m L 5 0 预热的0.2 m o l/L、p H 8.2的P B S,加入1 m L 0.1%的T N B S快速振荡,于5 0 水浴锅中避光反应6 0 m i n,再加入4 m L 0.1 m o l/L的H C l快速终止反应,室温下静置3 0 m i n后于3 4 0 n m下测定吸光值,测定供试液的吸光度为B。水解度D H(%)07基础研究 第4 8卷 第9期2 0 2 3年9月 中 国 调 味 品C h i n a C o n d i m e n t的计算公式如下:DH=yB稀释倍数酶解液体积MP r o%ht o t。(1)式中:B为样品在3 4 0 n m下的吸光度;M为酶解样品的质量,g;P r o%为酶解样品中的蛋白质含量,g/g;ht o t为蛋白质总肽键数。1.2.5 A C E抑制活性的测定采用H P L C法测定A C E抑制活性,参考王毅梅1 5的方法并略作修改。配制p H为8.3、浓度为0.1 m o l/L的硼酸盐缓冲液(含3 0 0 mm o l/L N a C l),用此缓冲液配制0.1 U/m L的A C E溶液和6.5 mm o l/L的HH L溶液。于1.5 m L离心管中加入1 0 L 的抑制剂样品(空白对照用硼酸盐缓冲液代替抑制剂)与3 0 L HH L混合均匀,放置于3 7 水浴中预热5 m i n,然后加入2 0 L A C E溶液于3 7 下恒温反应1 h,最后在反应液中加入7 0 L 1 m o l/L的HC l终止反应,得到供试液,以硼酸盐缓冲液为空白,供试液总体积1 3 0 L。色谱柱:O D S C1 8分析型色谱柱(4.6 mm 1 5 0 mm,5 m);检测波长:UV 2 2 8 n m;流速:0.8 m L/m i n;流动相A:水(含0.0 5%三氟乙酸);流动相B:乙腈(含0.0 5%三氟乙酸);进样量:1 0 L;柱温:2 5;梯度洗脱条件:0 1 0 m i n,流动相B:1 0%6 0%;1 01 2 m i n,流动相B:6 0%1 0%。A C E抑制率的计算:A C E抑制率(%)=A0-A1A01 0 0。(2)式中:A0为对照组中生成马尿酸的峰面积;A1为加入抑制剂组中生成马尿酸的峰面积。1.2.6 分子量分布分析参考吴悦1 6、姜惠敏1 7的方法并略作修改。吸取上清液2 m L,添加流动相稀释至1 0 0 m L,经0.4 5 m孔径的微孔滤膜过筛后上样分析。色谱条件:T S K g e l 2 0 0 0 S WX L色谱柱(3 0 0 mm 7.8 mm,1 0 m);柱温:2 5;流动相:乙腈水为4 5 5 5(其中含T F A 0.1);紫外检测波长:2 2 0 n m;流速:0.5 m L/m i n。通过W a t e r s M 3 2 G P C软件自动进行数据处理及计算。选用细胞色素C(Mw=1 2 5 0 0 D a)、抑肽酶(Mw=6 5 0 0 D a)、杆菌酶(Mw=1 4 5 0 D a)、G l y-G l y-T y r-A r g(Mw=4 5 1 D a)和G l y-G l y-G l y(Mw=1 8 9 D a)5种分子量不同的标准多肽样品绘制分子质量(Mw)校正曲线,得到分子质量与保留时间的线性回归方程为l g Mw=5.4 4 1 8-0.0 5 4 1t。其中r=0.9 9 6 0,P12,A C E抑制率与水解度呈正相关关系,由水解度及A C E抑制率结果选择3号酶解组合,即选用胰蛋白酶为第一步酶解用酶,酶解1 h;选用碱性蛋白酶为第二步酶解用酶,酶解4 h,此条件下测定酶解产物的水解度为5.7%,A C E抑制率为1 6.3%。试验结果也表明只使用碱性蛋白酶(组1)也能获得接近双酶(组2)的酶解效果,说明在对鮰鱼蛋白酶解中起主要作用的是碱性蛋白酶,因此接下来主要对碱性蛋白酶的水解条件进行优化。2.2 酶解条件的优化根据碱性蛋白酶酶解的单因素试验结果,选择温度、p H、酶活/底物量3个反应条件作为试验因素,以水解度为指标,设计三因素三水平正交试验,见表4。正交试验结果、极差分析结果见表5,方差分析结果见表6。表4 酶解反应的正交试验因素水平表T a b l e 4 F a c t o r s a n d l e v e l s o f o r t h o g o n a l t e s t o f e n z y m a t i c h y d r o l y s i s r e a c t i o n水平因素A温度/B p HC酶活/底物量/(U/m g)14 58525 09635 51 07表5 碱性蛋白酶正交试验 L9(33)结果表T a b l e 5 R e s u l t s o f o r t h o g o n a l t e s t L9(33)o f a l k a l i n e p r o t e a s e试验号A 温度B p HC酶活/底物量水解度/%11117.2 521229.1 131337.3 642128.8 952239.9 262318.2 673137.2 983218.6 493328.0 3K12 3.7 22 3.4 32 4.1 5K22 7.0 72 7.6 72 6.0 1K32 3.9 62 3.6 52 4.5 7K17.9 17.8 18.0 5K29.0 29.2 28.6 7K37.9 97.8 88.1 9R3.3 54.2 41.8 6表6 碱性蛋白酶正交试验L9(33)方差分析表T a b l e 6 A n a l y s i s o f v a r i a n c e o f o r t h o g o n a l t e s t L9(33)o f a l k a l i n e p r o t e a s e方差来源型平方和自由度均方F值显著性校正模型6.7 7 661.1 2 94 5.1 3 50.0 2 1续 表方差来源型平方和自由度均方F值显著性截距6 2 0.8 4 016 2 0.8 4 02 5 3 6 3.4 2 50.0 0 0A温度2.3 2 821.1 6 44 7.5 5 40.0 2 1B p H3.7 9 821.8 9 97 7.5 9 10.0 1 3C酶活/底物量0.6 4 920.3 2 51 3.2 6 00.0 7 0误差0.0 4 920.0 2 4总计6 2 7.6 6 59校正的总计6.8 2 58 注:P3 3 3 42 6肽以上1 3.2 7 00.0 23 3 3 42 0 0 01 62 6肽1 3.9 7 00.1 72 0 0 01 0 0 081 6肽1 4.8 5 30.2 11 0 0 05 0 048肽1 6.0 5 31.3 75 0 02 1 124肽1 7.2 5 29.9 8G1G3。3个组分经上样分析,计算出G1组分A C E抑制率为6 0.3%,G2组分A C E抑制率为6 6.9%,G3组分A C E抑制率为5 7.7%,G2组分A C E抑制率最大,高出大孔树脂纯化组分1 0.3%。为进一步提高酶解液纯度及A C E抑制活性,在后期研究中可以将活性最强的G2组分用来进一步分离纯化。3 结论本文以脱脂鮰鱼肉为原料,水解度和A C E抑制活性为考察指标,采用胰蛋白酶和碱性蛋白酶双酶分步酶解的方法对鮰鱼肉进行酶解,最佳酶解工艺:调节p H 为8,温度3 7,底物浓度0.1 7 g/m L,加入胰蛋白酶,酶活/底物量为6 U/m g,水解1 h,再调节p H为 9,温度5 5,加入碱性蛋白酶,酶活/底物量为6 U/m g,水解4 h,此时水解度为1 2.6 3%,酶解产物的A C E抑制率为1 8.7%。分子量分布分析发现酶解产物分子量主要分布在5 0 0 D a以下,即4肽以下的肽占多肽总量的9 8.2 3%。经分子量为3 k D a的超滤离心管分离后的组分A C E抑制活性为3 5.4%。用D A 2 0 1-C大孔吸附树脂对超滤组分进一步脱盐,静态吸附结果表明,吸附约在4 h内达到饱和,1 2 h时吸附率为5 4.6%,吸附量为4 4.6 m g/g;静态解吸结果表明,大孔树脂约在2 h内解吸完全,解吸率为6 2.1%,D A 2 0 1-C大孔树脂展现出良好的吸附和解吸性能。大孔树脂脱盐后的组分A C E抑制率可达5 6.6%,是超滤离心组分的1.6倍。采用S e p h a d e x G-1 5凝胶柱层析进一步分离纯化,得到3个组分G1、G2、G3,其中G2组分的抑制活性最高,为6 6.9%,是大孔树脂分离组分的1.2倍。经过分离纯化后的A C E抑制肽活性相比原酶解液提高了3.6倍。参考文献:1 黄艳春.酶解淡水鱼蛋白制取血管紧张素转化酶抑制肽的研究D.武汉:华中农业大学,2 0 0 4.(下转第9 3页)47基础研究 第4 8卷 第9期2 0 2 3年9月 中 国 调 味 品C h i n a C o n d i m e n t9B U S A TO B,A B R E U E C A,P E T KOW I C Z C L O,e t a l.P e c t i n f r o m B r a s s i c a o l e r a c e a v a r.i t a l i c a t r i g g e r s i m m u n o m o d u l a t i n g e f f e c t s i n v i v oJ.I n t e r n a t i o n a l J o u r n a l o f B i o l o g i c a l M a c r o m o l e c u l e s,2 0 2 0,1 6 1:4 3 1-4 4 0.1 0F E R GU S ONK,D A C RU Z M A,F E R R A R E Z I R,e t a l.I m p a c t o f H u a n g l o n g b i n g(HL B)o n g r a p e f r u i t p e c t i n y i e l d a n d q u a l i t y d u r i n g g r a p e f r u i t m a t u r a t i o nJ.F o o d H y d r o c o l l o i d s,2 0 2 1,1 1 3:1 0 6 5 5 3.1 1 新疆维吾尔自治区统计局.新疆统计年鉴M.北京:中国统计出版社,2 0 1 8:3 9 7-3 9 8.1 2 陈玲,工鹏,樊丁宇,等.3 5份新疆杏品质指标相关性分析及类型评价J.新疆农业科学,2 0 1 6,5 3(2):2 1 4-2 1 9.1 3 周伟权.杏果实类胡萝卜素代谢及积累机理研究D.乌鲁木齐:新疆农业大学,2 0 2 1.1 4 郑涛,苏柯星,丛桂芝,等.树上干杏和梅杏果实品质分析与综合评价J.食品与发酵工业,2 0 2 1,4 7(9):2 0 1-2 0 7.1 5V E R I C A D,B R ANK A L,V L A T KA L M,e t a l.T h e c o n t e n t o f p o l y p h e n o l s a n d c a r o t e n o i d s i n t h r e e a p r i c o t c u l t i v a r s d e p e n d i n g o n s t a g e o f m a t u r i t y a n d g e o g r a p h i c a l r e g i o nJ.F o o d C h e m i s t r y,2 0 0 7,1 0 2(3):9 6 6-9 7 5.1 6 崔宽波,朱占江,杨莉玲,等.新疆杏采后贮藏保鲜研究现状及展望J.食品与发酵工业,2 0 2 2,4 8(2):2 8 0-2 8 6.1 7 白国荣,郭敏瑞,卢娣,等.冰温贮藏对新疆吊干杏保鲜效果影响J.食品科学,2 0 1 9,4 0(1 3):2 6 0-2 6 6.1 8 邓豪,王霞伟,伊丽达娜迪力夏提,等.一氧化氮熏蒸工艺对鲜杏制干品质的影响J.食品科学,2 0 2 2,4 3(5):1 9 4-2 0 2.1 9TUR AN S,TO P C U A,KA R A B U L UT I,e t a l.F a t t y a c i d,t r i a c y l g l y c e r o l,p h y t o s t e r o l,a n d t o c o p h e r o l s v a r i a t i o n s i n k e r n e l o i l o f M a l a t y a a p r i c o t s f r o m T u r k e yJ.J o u r n a l o f A g r i c u l t u r a l a n d F o o d C h e m i s t r y,2 0 0 7,5 5(2 6):1 0 7 8 7-1 0 7 9 4.2 0R U D Z I N S K A M,G R N A S P,R A C Z Y K M,e t a l.S t e r o l s a n d s q u a l e n e i n a p r i c o t(P r u n u s a r m e n i a c a L.)k e r n e l o i l s:t h e v a r i e t y a s a k e y f a c t o rJ.N a t u r a l P r o d u c t s R e s e a r c h,2 0 1 7,3 1(1):8 4-8 8.2 1 王文骏.柑橘皮果胶超声辅助提取的作用机制研究D.杭州:浙江大学,2 0 1 8.2 2 聂凌鸿,周玲.柚子皮中果胶提取工艺的优化及其理化性质测定J.中国食物与营养,2 0 1 5,2 1(4):6 3-6 7.2 3 张颜.短枝六道木叶果胶理化性质研究及生理活性初探D.咸阳:西北农林科技大学,2 0 1 3.2 4 中华人民共和国卫生部.食品安全国家标准 食品添加剂 果胶:G B 2 5 5 3 32 0 1 0S.北京:中国标准出版社,2 0 1 0.2 5 杭瑜瑜,王玉杰,孙国铮.菠萝皮渣果胶的盐析法提取及理化性质研究J.中国食品添加剂,2 0 1 6(7):1 0 3-1 1 0.2 6S H I NW A R I K J,R A O P S.S t a b i l i t y o f b i o a c t i v e c o m p o u n d s i n f r u i t j a m a n d j e l l y d u r i n g p r o c e s s i n g a n d s t o r a g e:a r e v i e wJ.T r e n d s i n F o o d S c i e n c e&T e c h n o l o g y,2 0 1 8,7 5:1 8 1-1 9 3.2 7 夏天添.橙皮果胶提取工艺及其理化性质研究D.南昌:南昌大学,2 0 1 2.2 8L I EW S Q,NG OH G C,YU S O F F R,e t a l.S e q u e n t i a l u l t r a s o u n d-m i c r o w a v e a s s i s t e d a c i d e x t r a c t i o n(UMA E)o f p e c t i n f r o m p o m e l o p e e l sJ.I n t e r n a t i o n a l J o u r n a l o f B i o l o g i c a l M a c r o m o l e c u l e s,2 0 1 6,9 3:4 2 6-4 3 5.2 9R AHMA T I S,A B DU L L AH A,KANG O L.E f f e c t s o f d i f f e r e n t m i c r o w a v e i n t e n s i t y o n t h e e x t r a c t i o n y i e l d a n d p h y s i c o c h e m i c a l p r o p e r t i e s o f p e c t i n f r o m d r a g o n f r u i t(H y l o c e r e u s p o l y r h i z u s)p e e l sJ.B i o a c t i v e C a r b o h y d r a t e s a n d D i e t a r y F i b r e,2 0 1 9,1 8:1 0 0 1 8 6.(上接第7 4页)2C I C O I R A M,Z A N O L L A L,R O S S I A.F a i l u r e o f a l d o s t e r o n e s u p p r e s s i o n d e s p i t e a n g i o t e n s i n-c o n v e r t i n g e n z y m e(A C E)i n h i b i t o r a d m i n i s t r a t i o n i n c h r o n i c h e a r t f a i l u r e i s a s s o c i a t e d w i t h A C E D D g e n o t y p eJ.J o u r n a l o f t h e Am e r i c a n C o l l e g e o f C a r d i o l o g y,2 0 0 1,3 7(7):1 8 0 8-1 8 1 2.3 吴若晨,吴正浩,冯译萱,等.响应面优化酶促水解鲅鱼蛋白制备A C E抑制肽的研究J.食品工程,2 0 2 0(1):2 8-3 3.4 尹歆.鲢鱼蛋白制备A C E抑制肽的酶解工艺及其活性研究D.长沙:湖南农业大学,2 0 1 2.5 杨贵兰,秦松,王晓艳,等.酶法制备阿拉斯加鳕鱼降压肽的工艺优化及其产物的结构鉴定J.食品工业科技,2 0