湖羊SRP68基因多态性及其与生长性状的关联分析.pdf

中国畜牧兽医 ,():C h i n aA n i m a lH u s b a n d r y&V e t e r i n a r yM e d i c i n e湖羊S R P 基因多态性及其与生长性状的关联分析毕亚珍,尚明玉,熊金珂,胡文萍,贺建宁,张莉(青岛农业大学动物科技学院,青岛 ;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京 )摘要:【目的】研究信号识别颗粒(s i g n a l r e c o g n i t i o np a r t i c l e,S R P )基因在不同月龄湖羊不同组织中的表达情况,并分析其多态性对湖羊生长性状的影响,以期找到与绵羊生长性状显著相关的分子标记.【方法】利用实时荧光定量P C R检测S R P 基因在湖羊心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和背最长肌种组织中的表达情况,以及在初生、日龄、月龄和月龄时湖羊背最长肌中的表达情况;采用绵羊I l l u m i n aO v i n e S N P B e a d C h i p对 只湖羊S R P 基因多态位点进行基因型检测;使用S P S S 软件对S R P 基因多态位点与 只湖羊生长性状进行关联分析.【结果】S R P 基因在湖羊不同组织中均有表达,在 日龄和月龄背最长肌、心脏中的表达量极显著高于其他组织(P ),在月龄背最长肌中的表达量极显著高于其他组织(P ).S R P 基因r s GA位点在湖羊群体中处于中度多态性(P I C),AA和G G基因型个体初生重和月龄体重均显著高于G A基因型(P ),AA基因型个体月龄体高显著高于GA和G G基因型(P ),G G基因型个体月龄体重、管围和胸宽均显著高于AA基因型(P ).【结论】S R P 基因与湖羊肌肉发育密切相关,r s GA位点可作为湖羊生长性状的潜在分子标记,为湖羊分子育种提供参考.关键词:湖羊;S R P 基因;组织表达;关联分析中图分类号:S 文献标识码:AD o i:/j c n k i 开放科学(资源服务)标识码(O S I D):收稿日期:基金项目:国家重点研发计划资助项目(Y F D );内蒙古自治区科技重大专项(Z D );院企合作研发项目(Y F 、Y F )联系方式:毕亚珍,E m a i l:q q c o m.通信作者贺建宁,E m a i l:h e x i n g x i n g c o m;张莉,E m a i l:z h a n g l i c a a s c nP o l y m o r p h i s mo fS R P G e n ea n dI t sA s s o c i a t i o nw i t hG r o w t hT r a i t s i nH uS h e e pB IY a z h e n,S HANG M i n g y u,X I ONGJ i n k e,HU W e n p i n g,HEJ i a n n i n g,Z HANGL i(C o l l e g e o fA n i m a lS c i e n c ea n dT e c h n o l o g y,Q i n g d a oA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y,Q i n g d a o ,C h i n a;I n s t i t u t e o fA n i m a lS c i e n c e s,C h i n e s eA c a d e m yo fA g r i c u l t u r a l S c i e n c e s,B e i j i n g ,C h i n a)A b s t r a c t:【O b j e c t i v e】T h i se x p e r i m e n t w a sa i m e dt oi n v e s t i g a t et h ee x p r e s s i o n o fs i g n a lr e c o g n i t i o np a r t i c l e(S R P )g e n eo fd i f f e r e n tt i s s u e si n H us h e e pa td i f f e r e n tm o n t h s,a n da n a l y z e t h ee f f e c to fi t sp o l y m o r p h i s mo nt h eg r o w t ht r a i t si n H us h e e p,i no r d e rt of i n dt h em o l e c u l a rm a r k e r ss i g n i f i c a n t l yr e l a t e d t o t h eg r o w t ht r a i t s i ns h e e p【M e t h o d】T h e e x p r e s s i o no fS R P g e n ei nh e a r t,l i v e r,s p l e e n,l u n g,k i d n e ya n dl o n g i s s i m u sd o r s im u s c l eo fH us h e e pw a sd e t e c t e db yR e a l t i m eq u a n t i t a t i v eP C R,a sw e l l a s i nt h e l o n g i s s i m u sd o r s im u s c l eo fH us h e e pa tb i r t h,d a y,m o n t h o l da n d m o n t h o l d T h ep o l y m o r p h i s ms i t eo fS R P g e n ew a sd e t e c t e db yI l l u m i n aO v i n e S N P B e a d C h i pi n H us h e e p T h ea s s o c i a t i o nb e t w e e np o l y m o r p h i s ms i t eo fS R P g e n e a n d t h eg r o w t h t r a i t s o f H us h e e pw a s a n a l y z e db yS P S S s o f t w a r e【R e s u l t】S R P g e n ew a se x p r e s s e di nd i f f e r e n tt i s s u e so fH us h e e p,a n dt h ee x p r e s s i o no fl o n g i s s i m u sd o r s im u s c l ea n dh e a r ti n H us h e e pa t d a ya n d m o n t h o l d w e r ee x t r e m e l y中国畜牧兽医 卷s i g n i f i c a n t l yh i g h e r t h a nt h a to fo t h e r t i s s u e s(P ),a n dt h ee x p r e s s i o no f l o n g i s s i m u sd o r s im u s c l ea t m o n t h o l dw a se x t r e m e l ys i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a nt h a to fo t h e rt i s s u e s(P )T h e r ew a sm o d e r a t ep o l y m o r p h i s ma t r s GAo fS R P g e n e i nH us h e e pp o p u l a t i o n(P I C)T h eb i r t hw e i g h ta n d m o n t h o l dw e i g h to fAAa n dG Gg e n o t y p e sw e r es i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a nt h a to fGAg e n o t y p e(P )T h e m o n t h o l db o d yh e i g h to fA Ag e n o t y p ew a s s i g n i f i c a n t l yh i g h e r t h a nt h a to fG Aa n dG Gg e n o t y p e s(P ),a n dt h e m o n t h o l db o d yw e i g h t,t u b e c i r c u m f e r e n c ea n dc h e s tw i d t ho fG Gg e n o t y p ew e r es i g n i f i c a n t l yh i g h e r t h a nt h a to fA Ag e n o t y p e(P )【C o n c l u s i o n】S R P g e n ew a sc l o s e l yr e l a t e dt ot h em u s c l ed e v e l o p m e n to fH us h e e p,a n dr s GAc o u l db eu s e da s ap o t e n t i a lm o l e c u l a rm a r k e r f o r g r o w t h t r a i t s i nH us h e e p,w h i c hc o u l dp r o v i d e a r e f e r e n c e f o rm o l e c u l a rb r e e d i n g i nH us h e e p K e yw o r d s:H us h e e p;S R P g e n e;t i s s u ee x p r e s s i o n;a s s o c i a t i o na n a l y s i s分 子 标 记 辅 助 选 择 技 术(m a r k e ra s s i s t a n ts e l e c t i o n,MA S)是分子育种的主流方法之一,具有不受外界环境影响、鉴别简单准确、可大幅度提高选择效率等优势.在家畜育种中,生长性状是畜禽最具价值的经济性状之一,通过候选基因确定遗传标记 或 单 核 苷 酸 多 态 性(s i n g l e n u c l e o t i d ep o l y m o r p h i s m,S N P)与生长性状之间的关系具有重要研究意义.因此,分子标记辅助选择技术被广泛用于家畜遗传改良,为改善绵羊中等遗传力的生长性状提供了快捷的方法.信号 识 别 颗 粒(s i g n a lr e c o g n i t i o n p a r t i c l e,S R P)是由个S R P蛋白和个 SR NA的R NA分子组成的普遍保守的核糖核蛋白复合物,这些蛋白以单体(S R P 、S R P )或 以 二 聚 体(S R P 和S R P 、S R P 和S R P )的形式结合在 SR NA上;其中S R P 和S R P 与末端S R PR NA区域形成小域诱导翻译停滞.S R P 和S R P 蛋白以异源二聚体形式与S R P的 SR NA结合,并与内质网(e n d o p l a s m i cr e t i c u l u m,E R)受体结合后恢复翻译,新生的蛋白质被转运到内质网进行折叠、糖基化及二 硫 键 形 成 等 加 工 过 程.缺 失S R P 和S R P 的蛋白会丧失其识别信号肽和将蛋白定位于内质网的功能,因此,S R P 基因是蛋白表达调控元件.信号识别颗粒广泛存在于古生菌、细菌、植物叶绿体细胞、酵母和高级真核生物体的核仁中,然后转运到细胞质.研究发现,S R P 基因与动物乳癌、膀 胱 癌、肌 症 有 关 .此 外,S R P 基 因c TC突变位点与人类先天性中性粒细胞减少症有关.L i等研究发现,S R P 和S R P 是新型 的H 尾 巴 结 合 蛋 白,这 可 能 使S R P /S R P 异 质 体 能 以 高 亲 和 力 结 合 染 色 质.B r i t o等 对 只山羊进行选择信号和遗传多样性分析发现,S R P 基因与成年羊体重相关.S a r i d a k i等 研究发现,S R P 基因与绵羊产奶量相关.张莉等 在个绵羊群体中研究发现,S R P 基因OA R _ (r s GA)位点与断奶后日增重显著相关.因此,S R P 基因不仅与癌症相关,也与畜禽产奶及生长性状相关.为进一步了解S R P 基因对湖羊生长发育的影响,本试验利用实时荧光定量P C R技术检测S R P 基因在湖羊不同组织中的表达量,分析S R P 基因多态性与湖羊生长性状的关联情况,以期为湖羊的现代化科学选育提供分子标记.材料与方法 样品采集和数据收集本试验中湖羊均来自甘肃省庆阳市西峰区中盛华美羊产业发展有限公司.其中,组织样本选择 只(初生、日龄、月龄、月龄各只)湖羊公羊,屠宰后迅速采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和背最长肌种组织,放入液氮中冻存,后转入 保存备用.采集 只湖羊公羊血液,于E D T A抗凝管内 保存备用.为确保生长性状数据的准确性及完整性,从中挑选 只健康状况良好、生长发育正常的湖羊公羊用于关联分析,其饲养环境、管理方式、营养条件(主要以玉米、豆粕、麦麸为主,混合青贮饲料)及测定条件保持一致.生长性状主要包括初生重、断奶重(日龄)、月龄体重、月龄体重/体尺性状(体高、体长、胸围、管围、胸宽、腰角宽、十字部高、背膘厚、眼肌面积).为减少羔羊应激反应,体尺性状从月龄开始测定,测定方法参照 肉羊生产性能测定技术规范(T/C AAA )的规范进行.期毕亚珍等:湖羊S R P 基因多态性及其与生长性状的关联分析 组织总R N A提取及反转录采用T R I z o l法提取湖羊种组织总R NA,使用N a n o D r o p 紫外分光光度计检测R NA浓度和纯 度,参 考 反 转 录 试 剂 盒(P r i m e S c r i p tTMR TR e a g e n tK i tw i t hg D NAE r a s e r)步骤将R NA反转为c D NA,保存备用.血液D N A提取使用磁珠法提取血液全基因组D NA,琼脂糖 凝 胶 电 泳 检 测D NA质 量,使 用N a n o D r o p 紫外分光光度计测定D NA浓度,D n m/D n m值介于 之间,稀释至 n g/L,保存备用.引物设计及合成根 据G e n B a n k数 据 库 中 绵 羊S R P 基 因m R N A序列(登录号:XM_ ),使用P r i m e rP r e m i e r 软件 设计实时荧光定量P C R引物,以a c t i n(登录号:NM_ )为内参基因,引物序列见表.引物均由华大基因股份有限公司合成.表引物信息T a b l eP r i m e r i n f o r m a t i o n基因G e n e s引物序列P r i m e rs e q u e n c e s()产物长度P r o d u c t l e n g t h/b p退火温度A n n e a l i n gt e m p e r a t u r e/S R P F:G G G T C C T GAAA T A C G C G GA T R:C T G G T G G G C C T C G T T T G T A Ta c t i nF:C G T G C G T GA C A T C AAA GA G AA R:AA C C G C T C G T T G C C AA T AG T 实时荧光定量P C R检测以 各 组 织c D NA为 模 板,使 用A B IQ u a n t S t u d i oTMF l e x实时荧光定量P C R仪进行检测.P C R反应体系 L:S Y B R G r e e nP C RM a s t e rM i x t u r e L,上、下游引物(m o l/L)各 L,R O XR e f e r e n c eD y e()L,c D NAL,d d HOL.P C R反应条件:s;s,s,共 个循环.反应结束对扩增产物进行熔解曲线分析.试验设置个生物学重复和个技术重复.芯片质控及基因分型使用P l i n k 软件将湖羊群体 K芯片扫描分型数据共同的S N P s合并,并进行质量控制.质控条 件为:最小等 位基因频率 、H a r d y W e i n b e r g平衡P值 、个体检出率、S N P检 出 率(P L I NK参 数:MA F ;HWE ;m i n d ;g e n o ).统计分析采用 C t方法计算S R P 基因在湖羊不同组织中 的 相 对 表 达 量,使 用G r a p h P a dP r i s m 软件 绘 图,利 用S P S S 软 件 中O n e W a yA N O V A进行分析.数据用平均值标准误表示,P 表示差异显著;P 表示差异极显著.使用M i c r o s o f tE x c e l 软件计算S R P 基因多态位点的基因频率、基因型频率、纯合度(H o)、杂合度(H e)、有效等位基因数(N e)和多态信息含量(P I C)等遗传学参数,并进行H a r d y W e i n b e r g平衡检验.采用R语言对湖羊表型数据进行校正,模型中加入出生年份、出生季节、日龄,使用S P S S 软件中一般线性模型(G LM)将S R P 基因不同基因型与湖羊生长性状进行关联分析,采用邓肯氏法进行多重比较.一般线性模型:Yi j k lGiDjYkSlei j k l式中,Yi j k l,性状测定值;,群体均值;Gi,基因型效应;Dj,日龄效应;Yk,出生年份效应;Sl,季节效应;ei j k l,随机残差.数据用平均值标准误表示,以P 为差异显著性判断标准.结果 S R P 基因在不同时期湖羊背最长肌和不同组织中的表达量S R P 基因 在湖羊初生、日龄、月 龄 和月龄背最长肌中的表达量见图 A.由图 A可知,S R P 基因在月龄湖羊背最长肌中的表达量极显著或显著高于初生、日龄(P ;P );在月龄湖羊背最长肌中的表达量极显著高于其余年龄段(P ).S R P 基因在 日龄、月龄、月龄湖羊不同组织中均有表达,结果见图 B D.由图 B、C可知,S R P 基因在 日龄、月龄湖羊心脏和背中国畜牧兽医 卷最长肌中的表达量均极显著高于肝脏、脾脏、肺脏和肾脏(P ),在肝脏中的表达量均极显著高于肺脏和肾脏(P ).由图 D可知,S R P 基因在月龄湖羊背最长肌中的表达量均极显著高于其余组织(P ),在脾脏中的表达量最低,极显著低于其余组织(P ).A,S R P 基因在不同时期湖羊背最长肌中的表达;BD,S R P 基因在 日龄、月龄、月龄湖羊不同组织中的表达量.肩标不同小写字母表示差异显著(P );肩标不同大写字母表示差异极显著(P );肩标相同字母表示差异不显著(P )A,E x p r e s s i o no fS R P g e n e i nl o n g i s s i m u sd o r s im u s c l eo fH us h e e pa td i f f e r e n t t i m e;B D,E x p r e s s i o no fS R P g e n e i nd i f f e r e n tt i s s u e so f H us h e e pa t d a y,m o n t h o l da n d m o n t h o l d,r e s p e c t i v e l y V a l u e s w i t hd i f f e r e n ts m a l ll e t t e rs u p e r s c r i p t sm e a ns i g n i f i c a n td i f f e r e n c e(P );A n dw i t hd i f f e r e n tc a p i t a l l e t t e rs u p e r s c r i p t sm e a ne x t r e m e l ys i g n i f i c a n td i f f e r e n c e(P );W h i l ew i t ht h es a m e l e t t e rs u p e r s c r i p t sm e a nn os i g n i f i c a n td i f f e r e n c e(P )图S R P 基因在不同时期湖羊背最长肌和不同组织中的表达F i g E x p r e s s i o no fS R P g e n e i n l o n g i s s i m u sd o r s im u s c l ea n dd i f f e r e n t t i s s u e so fH us h e e pa td i f f e r e n t t i m e期毕亚珍等:湖羊S R P 基因多态性及其与生长性状的关联分析 湖羊生长性状描述性统计由表可知,湖羊初生重、断奶重,、月龄体重,、月龄背膘厚和眼肌面积变异系数均达到 以上,说明湖羊不同月龄体重发育状况存在差异,具有较大的选育潜力.表湖羊生长性状描述性统计T a b l eD e s c r i p t i v e s t a t i s t i c so f g r o w t ht r a i t s i nH us h e e p性状T r a i t s个体数N u m b e r平均值M e a n标准差S D变异系数C V/初生重B i r t hw e i g h t/k g 断奶重W e a n i n gw e i g h t/k g 月龄体重B o d yw e i g h t a t m o n t h o l d/k g 月龄 m o n t h o l d体重B o d yw e i g h t/k g 体高B o d yh e i g h t/c m 体长B o d y l e n g t h/c m 胸围C h e s t c i r c u m f e r e n c e/c m 管围C a n n o nc i r c u m f e r e n c e/c m 胸深C h e s td e p t h/c m 胸宽C h e s tw i d t h/c m 腰角宽H i pw i d t h/c m 十字部高H e i g h t a th i pc r o s s/c m 月龄 m o n t h o l d体重B o d yw e i g h t/k g 体高B o d yh e i g h t/c m 体长B o d y l e n g t h/c m 胸围C h e s t c i r c u m f e r e n c e/c m 管围C a n n o nc i r c u m f e r e n c e/c m 胸深C h e s td e p t h/c m 胸宽C h e s tw i d t h/c m 腰角宽H i pw i d t h/c m 十字部高H e i g h t a th i pc r o s s/c m 月龄 m o n t h o l d体重B o d yw e i g h t/k g 体高B o d yh e i g h t/c m 体长B o d y l e n g t h/c m 胸围C h e s t c i r c u m f e r e n c e/c m 管围C a n n o nc i r c u m f e r e n c e/c m 胸深C h e s td e p t h/c m 胸宽C h e s tw i d t h/c m 腰角宽H i pw i d t h/c m 十字部高H e i g h t a th i pc r o s s/c m 背膘厚B a c kf a t t h i c k n e s s/mm 眼肌面积E y em u s c l ea r e a/c m 月龄 m o n t h o l d体重B o d yw e i g h t/k g 体高B o d yh e i g h t/c m 体长B o d y l e n g t h/c m 胸围C h e s t c i r c u m f e r e n c e/c m 管围C a n n o nc i r c u m f e r e n c e/c m 胸深C h e s td e p t h/c m 胸宽C h e s tw i d t h/c m 腰角宽H i pw i d t h/c m 十字部高H e i g h t a th i pc r o s s/c m 背膘厚B a c kf a t t h i c k n e s s/mm 眼肌面积E y em u s c l ea r e a/c m 中国畜牧兽医 卷 湖羊S R P 基因多态位点检测采用S N P芯片技术对绵羊群体S R P 基因多态性进行检测,结果发现S R P 基因内含子 上存在个r s GA位点(表).为保证生长性状数据完整性及连贯性,从质控后数据中选择 只湖羊公羊进行后续遗传特性及关联分析.表湖羊S R P 基因S N P信息T a b l e I n f o r m a t i o no nS N Po fS R P g e n e i nH us h e e pS N P染色体C h r o m o s o m e物理位置P h y s i c a l l o c a t i o n/b p突变类型M u t a n t t y p er s GA G/A 湖羊S R P 基因S N P群体遗传特性分析由表可知,S R P 基因r s GA位点在湖羊群体中共检测出种基因型:AA、GA、G G,其中GA为优势基因型,A为优势等位基因.由表可知,S R P 基因r s GA位点纯合度与杂合度均为 ,有效等位基因数为 ,该位点在湖羊群体中处于中度多态(P I C).适合性检验结果表明,该位点在湖羊群 体 中 处 于H a r d y W e i n b e r g平 衡 状 态(P ).表湖羊S R P 基因S N P基因型频率和等位基因频率T a b l eG e n o t y p ea n da l l e l e f r e q u e n c yo fS R P g e n eS N Pi nH us h e e pS N P基因型G e n o t y p e s基因型频率G e n o t y p e f r e q u e n c y等位基因A l l e l e等位基因频率A l l e l e f r e q u e n c y卡方值P值P v a l u er s GAAA ()A G A ()G G G ()表湖羊S R P 基因S N P群体遗传特性分析T a b l eP o p u l a t i o ng e n e t i cc h a r a c t e r i s t i c sa n a l y s i so fS R P g e n eS N Pi nH us h e e pS N P纯合度H o杂合度H e有效等位基因数N e多态信息含量P I Cr s GA S R P 基因S N P与湖羊生长性状的关联分析由表可知,S R P 基因r s GA位点GA基因型个体初生重和月龄体重显著低于AA和G G基因型(P );AA基因型个体月龄体高显著高于GA和G G基因型(P );G G基因型个体月龄体重显著高于AA和GA基因型(P ),月龄管围和胸宽均显著高于AA基因型(P );其余指标各基因型间差异均不显著(P ).表S R P 基因r s GA位点与湖羊生长性状的关联分析T a b l eA s s o c i a t i o na n a l y s i sb e t w e e nr s GAo fS R P g e n ea n dg r o w t ht r a i t s i nH us h e e p性状T r a i t s时间T i m eAAG AG G体重B o d yw e i g h t/k g初生 a b a 日龄 月龄 a b a月龄 月龄 月龄 月龄 b b a期毕亚珍等:湖羊S R P 基因多态性及其与生长性状的关联分析续表性状T r a i t s时间T i m eAAGAG G体高B o d yh e i g h t/c m月龄 月龄 月龄 a b b月龄 体长B o d y l e n g t h/c m月龄 月龄 月龄 月龄 胸围C h e s t c i r c u m f e r e n c e/c m月龄 月龄 月龄 月龄 管围C a n n o nc i r c u m f e r e n c e/c m月龄 月龄 月龄 月龄 b a b a胸深C h e s td e p t h/c m月龄 月龄 月龄 月龄 胸宽C h e s tw i d t h/c m月龄 月龄 月龄 月龄 b a b a腰角宽H i pw i d t h/c m月龄 月龄 月龄 月龄 十字部高H e i g h t a t h i pc r o s s/c m月龄 月龄 月龄 月龄 背膘厚B a c kf a t t h i c k n e s s/mm月龄 月龄 眼肌面积E y em u s c l ea r e a/c m月龄 月龄 同行数据肩标不同字母表示差异显著(P );肩标相同字母或无字母标注表示差异不显著(P )I nt h es a m er o w,v a l u e sw i t hd i f f e r e n t l e t t e rs u p e r s c r i p t sm e a ns i g n i f i c a n td i f f e r e n c e(P );W h i l ew i t ht h es a m eo rn ol e t t e rs u p e r s c r i p t sm e a nn os i g n i f i c a n td i f f e r e n c e(P )讨论生长性状是畜禽个体生长发育及个体选育潜力的关键指标,提高绵羊生长性状已成为养羊业的主要需求,挖掘与生长性状相关基因和分子标记可缩短对生长性状的选育周期 .实验室前期通过全基 因 组 关 联 分 析 发 现,S R P 基 因OA R _中国畜牧兽医 卷 (r s GA)位点与绵羊生长发育显著相关,但其组织表达及多态性与湖羊生长性状关联分析尚不清楚,该基因在绵羊生长性状方面的功能和调控机制尚未见报道.为深入研究S R P 基因S N P与绵羊生长性状间的关系,并阐明S R P 基因对绵羊肌肉发育产生的影响,本试验开展了S R P 基因组织表达规律研究,判断其表达量的高低对肌肉生长发育的调控作用,对进一步分析其多态性与湖羊生长性状的关联性提供了验证基础,为湖羊生长性状的分子遗传改良提供了依据.目前,有关S R P 基因的研究主要集中在人类癌症方面,Z e k r i等 分析了 名膀胱癌及癌旁非肿瘤患者组织的基因组表达谱,发现S R P 基因在膀胱癌组织中上调;G a o等 研究发现,癌相关突变破坏了S R P 和S R P 相互作用以及与哺乳动物内质网的共定位,结果强调了S R P 和S R P 相互作用在S R P介导的蛋白质易位中的重要作用,为疾病诊断、病理生理学和药物设计提供了结构基础.此外,L u s t i g等 通过下调锥虫信号识别颗粒可影响多聚膜蛋白的生物发生,但不影响含信号肽的蛋白质的生物发生.Z h a n g等 发现射频后的人晶状体上皮细胞(h L E C)中S R P 蛋白表达量显著下调,表明h L E C中的蛋白转运可能受到影响.D a i等 研 究 发 现,重 组 生 殖 支 原 体 黏 附 蛋 白(r M g P a)和核糖体蛋白L (R P L )之间的相互作用可以增强S R P 基因mR NA表达,促进蛋白的转 录 和 翻 译,从 而 促 进 细 胞 增 殖.A r o u c h e D e l a p e r c h e等 对 免 疫 介 导 的 坏 死 性 肌 病(I MNM)患 者 的 肌 肉 活 检 发 现,抗S R P和 抗HMG C R特异性抗体可诱导肌纤维萎缩,损害体外成肌细胞融合,减少I L 和I L 的分泌,抑制成肌细胞融合形成肌管.许秀芳等 研究发现,在人心脏移植后外周血中S R P 基因在术前表达,在术后和急性排斥反应时不表达.R u s s o等 敲低小鼠成肌细胞中C E L F基因后发现S R P 基因过度表达,导致其迁移和愈合伤口的能力受损.为揭示S R P 基因与绵羊生长发育的关系,本研究首次对湖羊不同阶段的背最长肌组织以及同一阶段不同组织进行表达量分析,在初生、日龄及、月龄个阶段中表达量不断升高并达到极显著水平,说明表达量的升高可能控制肌纤维体积不断增大及长度增加,导致肌肉肥大及体重增加.此外,S R P 基因在湖羊不同组织中均有表达,在 日龄和月龄的背最长肌和心脏中表达量均极显著高于肝脏、脾脏、肺脏和肾脏,在月龄背最长肌中表达量极显著高于其余组织,表明S R P 基因可在一定程度上调控肌肉发育,但其调控机制仍有待深入研究.团队前期研究显示,S R P 基因内含子区S N P对绵羊断奶后日增重有显著影响.虽然内含子对蛋白质的编码及结构不产生影响,但内含子区在启动子、增强子和抑制子等顺式作用元件中发生突变对提高mR NA的翻译效率及调控转录和表达水平方面具有重要作用 .大量研究证明,生长性状候选基因的内含子区突变会影响生长发育 .本研究借助S N P芯片技术检测到湖羊内含子区存在r s GA位点,该位点在湖羊群体中呈现中度多态,说明该群体存在较大程度的遗传变异,且丰富的多态性可提供更多的选择效应.适合性检验结果显示,r s GA位点处于H a r d y W e i n b e r g平衡状态,说明该位点没有受到人工选择,建议加强人工干预选择有利等位基因,使得优势基因型在群体中长期延续并固定.关联分析结果显示,G G和AA基因型显著提高了湖羊初生重及月龄体重,G G基因型显著提高了月龄体重、管围和胸宽,与Z h a n g等 在绵羊肉用性状基因组关 联 分 析 中 的 结 果 一 致,表 明S R P 基 因r s GA位点可作为影响湖羊生长发育的潜在分子标记,在早期选育过程中可选择生长速度快的个体,对分子育种具有重要意义.因此,S R P 基因可能是影响湖羊生长发育的重要候选基因,研究结果有助于湖羊生长性状分子标记的开发与利用.结论S R P 基因在月龄湖羊背最长肌中的表达量最高,且在湖羊各组织中广泛表达,日龄和月龄背最长肌和心脏中的表达量极显著高于其他组织,月龄背最长肌