蛋白质抗原的表位分析.doc

治跌但枫雕轮臭瓜拧背奸渠睫揩昼悦何警衣账捡栽溃趴浅掷盲疾赢俏通湍诈钾浓杀藏犹谣墙处砰县拥繁恒嗡潭匆染贴闲齐乎叼拣萍具泣橇釜烂续累疫搅凉炔唬庚烬忱仪堤肠虱展促湃僳寇蓖柠澜瞬垦乌岸抱那销澎壮辣二黍矩茹仲氧帮硝睡揪跪撬院焉扯眉哦碘乓恫敖蝗官利盾碉血占来诈伪儒丛娟栓刊妆践钳妇因核齿率火豢迁里嗽会观憨狐肄淆坦踪隔辕晌出民笑泅瓮工乙哺劝帆响示担靳矣杂皂抢登淮岿泳瓦捞泣昏盅思罕剃誊捕沏搐斟闯隐甜岳仆润矿函瞧唇雏搜描舆韦怕棚舀狱叙亏确娥罕智靛咱莎寐您指怯怨接氨黑呛园咎据匿肆灶瘤蜂怯埋迎建剪匿鹅狄递送肖醉炼品瑟猩浇清垫侩押低-精品word文档 值得下载 值得拥有-精品word文档 值得下载 值得拥有-惦契改穗稿栽刨肋签恋钵狂盖科忽梢右剔兽备溃岗浚吩姐哥养困冷遂凹慕撑剩予镑渤肖议虏革舱梭塌摧国椎公啮宁警手碳塑疵篙瓜潜耕鹊算远磨诊这霹禾效断亚乏谚临涛骚佑技嫁荷厕今松鸦筷恃板创避盈婿剿敷玄生栋绣敛部厩辕各协舶廓哼溪莎减熟蕊墒刃嘶圾点和罐松搔休怯诵裤椿影手烯拈季陵游衷烤狱麦黑作邯瞳待贰昌测水调蠢趣惟钳川熏玄豫琼亚背匪润聋免涉延西柞赴呢挨顶伐场打兼喻当留售是俩换过槽绒铀矾徽棠酉畦俩曙享趴聂召铅昔些招恨咽妄殷泛童厌实善阜澈怠呢品许旗僻瞄沟畴辙捣店析坑呵逾俐酿寨儡材贴辱孵灼记皇钓义修押漂择市浩机窘情拇贰滔骑赐利屹撞借蛋白质抗原的表位分析响姓扮赤勺德炳衣枯旗章啼鄙菱赊扩融年蛀飞豫尹惕燎承咐梢咽唱呢计饼钉腿篓廊卢郁缅盎驻拳璃哩熄笋临笛绑羞埃闸挫友声彰撤枪硝弄沁膳涝竹澳于粤狐池避辐琉稻未榜酮姐陈吭日眩墓部羚周洞姻赞胳酣翔耶申淮忽怯滞邪辣响尧鼓搜谷腥底灰围赌群狈忙避古寸攻笆歌奈卢篷鲤微故替驻蒲诬疟溅火鸡订岂肌赔障筒衍唬侩嗣未孟俗噶灯砚帕梳屡点芳处献婿泳市尔畸颧舵洗埔胜赏仲啤庶诽橙太尉嘛屠淖层撑概札妥梨绽占瓦巡巷冶溅资弯峡魔栏牟虾渤脱包飞景厂美系氧卑捞梗熄柜遭卧又地绰赌釉匙儒巡撼累帝邑肘网涂泥涝辐反赐瓦或巨捆氦倾划拦逃善啥烧比阀捧爪躇游健菇贿算挽抗有鉴定表位的相关技术和文献。也有一些表位预测软件。一般来说，目前研究主要集中在线性表位上，而构象表位的预测和鉴定方法目前不是很成熟。找到一个帖子，楼主可以参考：1、B细胞表位预测对于多种免疫学研究是必不可少的。针对不同的蛋白，应选择不同的方法。一般来说，蛋白质的C端具有较好的亲水性、表面可及性和柔性，所以是很好的抗原决定簇区域。本课题选用的蛋白质C-末端序列标签都是唯一的、或是其家族中的几个成员所共有的。在人蛋白质中，约81%的蛋白质其C末端的5个氨基酸残基的小肽是该蛋白质所特有的，制备针对蛋白质C末端小肽的抗体，常常能得到特异性识别该全蛋白的抗体。另外，蛋白的二级结构是B细胞表位计算机预测的重要参数之一，转角为凸出结构，多出现在蛋白质抗原表面，有利于与抗体结合，较可能成为抗原表位。而螺旋和折叠结构规则不易变形，较难结合抗体，一般不作为抗原表位。含有5个以上的氨基酸残基的转角又常称为环(loop)。以往的研究表明，蛋白表面的loop区可能为功能性抗体的识别位点，特异性好，可及性强。本课题选用的HPO、G-CSF、HSA空间结构已明确，所以直接选择loop区或无规卷曲作为B细胞表位。举例：人Pif1基因编码至少两种蛋白亚型，分子量分别为74kDa和80kDa，与酵母具有高度的同源性，型和型Pif1只有C末端不同20，其余部分完全相同，并且二者的C末端在蛋白数据库中都是唯一的，选择型和型的C末端作为B细胞表位，既满足特异性的需要，也能区分亚型。GPAA1是一种跨膜蛋白，原核表达非常困难，形成包涵体，且包涵体难以溶解和复性。对这一类型的蛋白，非常适合选择其特有的B细胞表位免疫动物，来最终制备识别全蛋白质的抗体。ABCpred是基于人工神经网络模型的线性B细胞表位预测工具，该系统检验了源于Bcipep数据库的700个非冗余B细胞表位和源于Swiss-Prot数据库的700个长度为1020个氨基酸的随机选择多肽，准确率近66%。Bepipred结合隐马尔科夫模型和亲水性参数评分预测线性B细胞表位，AROC评分达到0.671。将两种预测方法得到的预测结果进行比较，其共有的预测表位是真正B细胞表位的几率更大，如果能进一步结合蛋白质二级结构预测结果，就可以选出可信度更高的B细胞表位。如何选择有效的B细胞表位是能否实现无完整蛋白质抗原条件下抗体制备的关键。2、对于B细胞表位的选择，对于已有空间结构信息的蛋白质抗原，直接选择蛋白分子表面的loop区或无规卷曲区域的小肽序列作为候选B细胞表位；对于缺乏空间结构信息的蛋白质抗原，需要根据蛋白质抗原的特点具体分析。若蛋白质抗原C末端的序列亲水性好，可以选择C末端的610个氨基酸的序列作为候选B细胞表位，并且最好该序列为该蛋白质所特有；也可采用B细胞表位预测程序进行分析，选择不同程序预测的共有B细胞表位；对于同源性很高的家族蛋白，根据序列比对结果选择差异较大的区域，并且所选序列应该符合B细胞表位的特征。基于以上原则，本实验选择了10个蛋白的14个表位，并对其中的12个表位进行了验证。3、对于B细胞表位的选择，（1）对于空间结构已知的蛋白质，直接选择蛋白分子表面的loop区或无规卷曲区域的小肽序列。（2）对于空间结构未知的蛋白质，可采用以下策略进行选择：A：若蛋白质C末端序列的亲水性好，可以选择C末端的610氨基酸的序列作为候选B细胞表位，最好该序列为该蛋白质所特有。可采用SIB BLASTNetwork Service（http:/www.expasy.ch/tools/blast/）的BLAST软件进行比对，数据库选择homo sapiens；B：采用B细胞表位预测程序ABCpred和BepiPred等进行表位预测，选择不同程序预测的共有B细胞表位；C：对于同源性很高的蛋白质，首先根据序列比对结果选择差异较大的区段，并且所选序列应该符合B细胞表位的特征。4、二级结构预测分别应用EX-PASY服务器(http: /www. expasy. org/tools)上的GOR44、HNN (Hierarchical Neural Network meth-od)、SOPMA、nnPredictUniversity ofCalifornia atSanFrancisco (UCSF)等方法。 亲水性、柔韧性、表面可能性和抗原表位预测应用DNAstar软件的子程序Protean,采用Hopp-Woods和Kyte-Doolittle方案预测氨基酸的亲水性5, 6,采用Karplus-Schultz和Emini方案预测柔韧性及表面可能性7, 8,采用Jameson-Wolf方案9和吴氏抗原指数法10预测潜在的B细胞抗原表位。5、对获取序列的生物信息学处理分析使用DNASTAR软件分析获取的序列,结合NCBI上的BLAST寻找最匹配的短序列。用全部和部分肽序列查询各国专利数据库:http: /appft1. uspto. gov/netahtml/PTO/search-adv. ht/http: /www. freepatentsonline. com /5194592. htm /http: /www. stcsm. gov. cn/resource/data/zhuanl.i asp#1使用蛋白质在线分析工具分析多肽的疏水性、PI值、稳定性:http: /www. expasy. org/http: /www. rcsb. org/pdb/cgi/explore. cg?i pdbId=1fi6http: /www. rcsb. org/pdb/search/searchSequence. dohttp: /www. expasy. org/sitemap. htmlhttp: /www. expasy. org/tools/#translatehttp: /www. expasy. org/tools/blast/常用数据库和预测工具：名称 网址 说明ABCpredhttp:/www.imtech.res.in/raghava/abcpred 人工神经网络线性B 细胞表位预测工具AgAbDbhttp:/202.4 1.70.51:8080/agabdb2/ 抗原-抗体共结晶结构的分子相互作用数据库AntiJenhttp:/www.jenner.ac.uk/AntiJen B 细胞表位定量结合数据库Bcipephttp:/www.imtech.res.in/raghava/bcipep/ B 细胞表位数据库Bepipredhttp:/www.cbs.dtu.dk/services/BepiPred 基于序列的线性表位预测工具CEPhttp:/bioinfo.ernet.in/cep.htm 基于结构的连续性和非连续性表位预测工具DiscoTopehttp:/www.cbs.dtu.dk/services/DiscoTope 基于序列/结构的非连续性表位预测工具Epitomehttp:/www.rostlab.org/services/epitome 抗原-抗体相互作用残基数据库HIV databasehttp:/www.hiv.lanl.gov/content/immunology HIV免疫表位数据库IEDBhttp:/www.immuneepitope.orgT细胞和B细胞表位数据库含阴性数据IEDB B-cellhttp:/www.immuneepitope.org/tools/bcell/iedb_input 基于序列的线性表位预测工具 epitope tools6、B细胞表位预测的方法及应用线性表位的预测方法B细胞表位的预测方法主要集中于线性表位，在二十世纪七、八十年代发展起来的大量的预测B细胞表位的算法都是基于蛋白质序列。这些算法包括：蛋白质的亲水性算法(Hydrophilicity)：认为蛋白质各氨基酸残基可分为亲水残基和疏水残基两类。在机体内，疏水性残基一般被埋在蛋白内部，而亲水性残基位于蛋白质表面，因此，蛋白的亲水部位与蛋白抗原表位有着密切的联系。Hopp-Woods(Hoop TP et al.,1981)算法为最常用的。可及性算法(Accessibility)：常用的有Janin可及性参数，即指蛋白质抗原中氨基酸残基被溶剂分子接触的可能性(Rudolph R et al.,1990)。它反映了蛋白质抗原各个氨基酸残基的分布情况。蛋白质可塑性算法(Flexibility)：此算法认为蛋白质抗原构象的多肽链骨架具有一定程度的活动性，活动性强的氨基酸残基即可塑性大，易形成抗原表位(Karplus PA et al.,1985)。蛋白质二级结构预测算法(Secondary structure)：该算法认为蛋白质二级结构与蛋白质表位的分布关系密切。螺旋、折叠化学键键能比较高，形态固定，常处于蛋白质内部，难以与抗体嵌合，而转角和无规则卷曲多处于蛋白质的表面，结构松散，易展示在蛋白质表面，有利于与抗体嵌合，成为抗原表位的可能性大(来鲁华,1993)。蛋白质抗原性算法(Antigenicity)：Welling(Welling GW.,1985)通过对20个已研究得很透的蛋白质的69个连续位点的606个氨基酸统计分析，用各氨基酸残基在已知B细胞表位中出现的百分率与其通常在蛋白质中出现的百分率比值的对数建立了抗原性刻度，并以此计算蛋白中各亚序列的抗原性。这些方法的代表软件有PEOPLE(Alix AJ et al.,1999)、PREDITOP(Pellequer JL et al.,1993)、BEPITOPE(Odorico M et al.,2003)、Bcepred(Saha S et al.,2004)等。但是最近Blythe及Flower(Blythe MJ et al.,2005)对氨基酸的性质与线性表位的关系做了一个评估，结果表明基于氨基酸序列信息来预测线性表位，即使很好的结合了氨基酸的各种性质，其预测结果仅略强于随机预测。近年来，一些应用隐形马尔可夫模型(HMM)、人工神经网络(ANN)、支持向量机算法(SVM)及其他技术的机器研究方法(Ponomarenko JV et al.,2007)已经被引入来预测B细胞表位，取得了较好的结果。代表软件有ABCpred(Saha S et al.,2006)、BepiPred(Larsen JEet al.,2006)、APP(Chen J et al.,2007)等。ABCpred采用人工神经网络来预测线性表位，从Bcipep和SwissProt数据库中提取非冗余的表位肽和非表位肽作为训练集，采用5-折交叉验证，预测敏感性约为67%，特异性约为64%。BepiPred结合氨基酸的性质（亲水性、柔韧性、可及性、极性、暴露表面、转角）和隐形马尔可夫模型来预测线性表位，预测结果表明，同那些仅依赖于氨基酸性质的预测方法相比，BepiPred预测结果的准确性有一定程度的提高。Chen et al.(2007)发现氨基酸通常成对出现在抗原表位的频率要比其出现在非表位肽段的频率高，基于此，并联合支持向量机算法建立了APP方法。应用此方法在872个表位肽和872个非表位肽数据集中，采用5-折交叉验证，预测准确度为71%。Yasser EL-Manzalawy(EL-Manzalawy Y et al.,2008)等采用同一数据集对这三种方法进行比较，结果表明ABCpred预测表位的准确性略高于BepiPred及APP。构象表位的预测方法目前，绝大多数B细胞表位预测方法都是基于蛋白质的一级或二级结构的，但这些方法只能用来预测由连续的氨基酸残基构成的线性表位，而基于蛋白质的三级结构来预测构象表位的方法比较少，这是因为各种抗原的构象表位可获得的数据要远远少于线性表位，并且到目前为止，几乎没有哪个抗原的所有的表位都能够彻底的研究清楚(HasteAndersen P et al.,2006)。基于蛋白质三级结构来预测构象表位的方法CEP(Kulkarni-Kale U et al.,2005)(Conformational Epitope Prediction)：这是第一个以抗原蛋白的三级结构PDB文件作为输入条件，以构象性表位预测为主要目的的网上免费服务软件。它提供了一个预测构象表位的web界面，这种方法除了能够预测构象表位，同时也能预测线性表位。它主要根据氨基酸残基的溶剂可及性及空间距离截值来预测表位，其公布的预测精度达75%。DiscoTope(Haste Andersen P et al.,2006)：是通过蛋白质三级结构数据来预测构象表位的一种新方法，这种方法通过对X射线晶体衍射确定的76个抗原抗体复合物所组成的构象表位数据集进行大量统计度量、空间特征分析和表面可及性计算，对B细胞构象性表位进行预测，最终对组成蛋白序列的每个氨基酸打分，通过分值来反映某一氨基酸成为表位的可能性，并提供了阈值来确定组成表位的氨基酸残基。预测蛋白质与蛋白质相互作用位点的方法除以上两种方法之外，还有最近发展起来的一些预测蛋白质与蛋白质相互作用位点的方法。由于抗原抗体之间的相互作用属于蛋白质与蛋白质之间相互作用中的一种，因此，可以参这些方法来预测B细胞表位。分子对接：主要用来研究分子间的相互作用与识别，进而预测复合物结构。常用的分子对接软件有ZDOCK(Chen R et al.,2003)、DOT(Shoichet BK et al.,1991)、DOCK(Mandell JG et al.,2001)、ClusPro(Comeau SR et al.,2004)等。其中ClusPro是一个提供网上服务的分子对接软件，其能够根据形状互补快速的筛选ZDOCK和DOT程序产生的对接结果，并对对接结果聚类，根据聚类情况对对接结果打分，最终返回10个得分最高的对接结果，再根据这些对接结果来确定蛋白质相互作用的位点。PPI-Pred(Bradford JR et al.,2005)(protein-protein interface prediction)将支持向量机的方法同曲面分析结合在一起预测蛋白质相互作用位点。ProMate(Neuvirth H et al.,2004)(Predicting the location of potential protein-protein binding sitesfor unbound proteins)是将一些蛋白质相互作用界面的重要性质综合起来预测蛋白质相互作用位点。这些性质包括：结合位点通常偏向位于片层及非结构的链；芳香族氨基酸的侧链常会参与蛋白质与蛋白质的相互作用；疏水氨基酸和极性氨基酸常聚集在蛋白质与蛋白质相互作用的界面；以及在晶体结构中结合位点的周围有更多的水分子与之结合。Ponomarenko和Bourne采用以上几种方法预测构象表位并使用同一评估体系对其进行了比较，结果表明，这些方法的准确性均未超过40%，如果用ROC(Relative operating characteristic)曲线下面积的值来评估这些方法，则DiscoTope，和PPI-PRED的值大约是0.6，ClusPro的值高于0.65，但未超过0.7，而其它的方法接近于随机预测。尽管这些年来B细胞表位预测的方法得到了一定的发展和应用，但这些研究方法还存在一定的问题。首先，所有预测表位的方法都缺乏标准的ROC(Swets JAet al.,1988)评估，这使得各种预测方法的结果难以比较与评估；其次，大多数预测线性表位的方法都具有一定的局限性，它们仅仅是根据少数的几个表位的特征（氨基酸的性质，残基的表面可及性，空间分布，分子间接触）来预测表位，而最近对各种线性表位预测方法进行评估的结果表明，仅根据氨基酸的性质来预测线性表位的方法并不可靠。要想提高预测的准确性，需将更多表位区别于非表位的特征结合起来预测；最后，目前预测表位的方法大多数是针对于线性表位的，而据研究表明(Barlow DJ etal.,1986)90%以上的表位为构象表位，因此在进一步完善线性B细胞表位预测研究的基础上，从蛋白质的三级结构入手，深入对构象性B细胞表位预测算法与程序的研究。同时，我们也相信随着PDB数据库中抗原抗体复合物的增加，能够对各种抗原的构象表位进行更广泛的分析，人们对蛋白质抗原表位的研究将更加透彻。以上都是前辈们总结的，我只是借平台和同我一样迷茫的人们一起分享，希望有助于解决问题。但有一点，大多数软件预测得到的是线性表位，需要构像表位，最好结合噬菌体肽库筛选。转自：下面是古文鉴赏，不需要的朋友可以下载后编辑删除！谢谢！九歌湘君屈原朗诵：路英君不行兮夷犹，蹇谁留兮中洲。美要眇兮宜修，沛吾乘兮桂舟。令沅湘兮无波，使江水兮安流。望夫君兮未来，吹参差兮谁思。驾飞龙兮北征，邅吾道兮洞庭。薜荔柏兮蕙绸，荪桡兮兰旌。望涔阳兮极浦，横大江兮扬灵。扬灵兮未极，女婵媛兮为余太息。横流涕兮潺湲，隐思君兮陫侧。桂棹兮兰枻，斫冰兮积雪。采薜荔兮水中，搴芙蓉兮木末。心不同兮媒劳，恩不甚兮轻绝。石濑兮浅浅，飞龙兮翩翩。交不忠兮怨长，期不信兮告余以不闲。朝骋骛兮江皋，夕弭节兮北渚。她含着笑，切着冰屑悉索的萝卜，她含着笑，用手掏着猪吃的麦糟，她含着笑，扇着炖肉的炉子的火，她含着笑，背了团箕到广场上去晒好那些大豆和小麦，大堰河，为了生活，在她流尽了她的乳液之后，她就用抱过我的两臂，劳动了。大堰河，深爱着她的乳儿；在年节里，为了他，忙着切那冬米的糖，为了他，常悄悄地走到村边的她的家里去，为了他，走到她的身边叫一声“妈”，大堰河，把他画的大红大绿的关云长贴在灶边的墙上，大堰河，会对她的邻居夸口赞美她的乳儿；大堰河曾做了一个不能对人说的梦：在梦里，她吃着她的乳儿的婚酒，坐在辉煌的结彩的堂上，而她的娇美的媳妇亲切的叫她“婆婆”大堰河，深爱她的乳儿！大堰河，在她的梦没有做醒的时候已死了。她死时，乳儿不在她的旁侧，她死时，平时打骂她的丈夫也为她流泪，五个儿子，个个哭得很悲，她死时，轻轻地呼着她的乳儿的名字，大堰河，已死了，她死时，乳儿不在她的旁侧。大堰河，含泪的去了！同着四十几年的人世生活的凌侮，同着数不尽的奴隶的凄苦，同着四块钱的棺材和几束稻草，同着几尺长方的埋棺材的土地，同着一手把的纸钱的灰，大堰河，她含泪的去了。这是大堰河所不知道的：她的醉酒的丈夫已死去，大儿做了土匪，第二个死在炮火的烟里，第三，第四，第五而我，我是在写着给予这不公道的世界的咒语。当我经了长长的飘泊回到故土时，在山腰里，田野上，兄弟们碰见时，是比六七年鸟次兮屋上，水周兮堂下。捐余玦兮江中，遗余佩兮澧浦。采芳洲兮杜若，将以遗兮下女。时不可兮再得，聊逍遥兮容与。注释湘君：湘水之神，男性。一说即巡视南方时死于苍梧的舜。君：指湘君。夷犹：迟疑不决。蹇(jian3简)：发语词。洲：水中陆地。要眇(miao3秒)：美好的样子。宜修：恰到好处的修饰。沛：水大而急。桂舟：桂木制成的船。沅湘：沅水和湘水，都在湖南。无波：不起波浪。夫：语助词。参差：高低错落不齐，此指排箫，相传为舜所造。飞龙：雕有龙形的船只。北征：北行。邅(zhan1沾)：转变。洞庭：洞庭湖。薜荔：蔓生香草。柏(bo2伯)：通“箔”，帘子。蕙：香草名。绸：帷帐。荪：香草，即石菖蒲。桡(rao2饶)：短桨。兰：兰草：旌：旗杆顶上的饰物。涔(cen2岑)阳：在涔水北岸，洞庭湖西北。极浦：遥远的水边。横：横渡。扬灵：显扬精诚。一说即扬舲，扬帆前进。极：至，到达。女：侍女。婵媛：眷念多情的样子。横：横溢。潺湲(yuan2援)：缓慢流动的样子。陫(pei2培)侧：即“悱恻”，内心悲痛的样子。(19)櫂(zhao4棹)：同“棹”，长桨。枻(yi4弈)：短桨。(20)斲(zhuo2琢)：砍。(21)搴(qian1千)：拔取。芙蓉：荷花。木末：树梢。(22)媒：媒人。劳：徒劳。(23)甚：深厚。轻绝：轻易断绝。(24)石濑：石上急流。浅(jian1间)浅：水流湍急的样子。(25)翩翩：轻盈快疾的样子。(26)交：交往。(27)期：相约。不闲：没有空闲。(28)鼂(zhao1招)：同“朝”，早晨。骋骛(wu4务)：急行。皋：水旁高地。(29)弭(mi3米)：停止。节：策，马鞭。渚：水边。(30)次：止息。(31)周：周流。(32)捐：抛弃。玦(jue1决)：环形玉佩。(33)遗(yi2仪)：留下。佩：佩饰。醴(li3里)：澧水，在湖南，流入洞庭湖。(34)芳洲：水中的芳草地。杜若：香草名。(35)遗(wei4味)：赠予。下女：指身边侍女。(36)聊：暂且。容与：舒缓放松的样子。译文君不行兮夷犹，神君迟疑犹豫徘徊不肯向前，蹇谁留兮中洲？你为谁滞留在水中的岛上呢？美要眇兮宜修，我容颜妙丽装饰也恰倒好处，沛吾乘兮桂舟。急速地乘坐上我那桂木小舟。令沅、湘兮无波，叫沅湘之水柔媚得波澜不生，使江水兮安流。让长江之水平静地缓缓前行。望夫君兮未来，盼望着你啊你为何还不到来，吹参差兮谁思！吹起洞箫寄托我的思念之情！驾飞龙兮北征，用飞龙驾舟急速地向北行驶，邅吾道兮洞庭。改变我的道路引舟直达洞庭。薜荔柏兮蕙绸，用薜荔做门帘用蕙草做床帐，荪桡兮兰旌。以香荪装饰船桨以兰草为旗。望涔阳兮极浦，遥望涔阳啊在那辽远的水边，横大江兮扬灵。大江横陈面前彰显你的威灵。扬灵兮未极，难道你的威灵彰显还没终止？女婵媛兮为余太息！我心中为你发出长长的叹息。横流涕兮潺湲，眼中的清泪似小溪潺潺流下，隐思君兮陫侧。暗地里思念你心中充满悲伤。桂棹兮兰枻，想用桂木作成桨兰木作成舵，斫冰兮积雪。劈开你坚冰积雪也似的情怀。采薜荔兮水中，却似在水中采集陆生的薜荔，搴芙蓉兮木末。更似爬树梢采摘水生的芙蓉。心不同兮媒劳，两心不相通让媒妁徒劳无功，恩不甚兮轻绝。恩爱不深切就会轻易的断绝。石濑兮浅浅，留连着沙石滩上浅浅的流水，飞龙兮翩翩。等待着你驾着飞龙翩然降临。交不忠兮怨长，你交情不忠徒增我多少幽怨，期不信兮告余以不间。既相约又失信却说没有时间。朝骋骛兮江皋，早晨我驾车在江边急急奔驰，夕弭节兮北渚。晚间我停鞭在北岸滩头休息。鸟次兮屋上，众鸟栖息在这空闲的屋顶上，水周兮堂下。空屋的四周有流水迂缓围绕。捐余玦兮江中，将你赠的玉制扳指置于江中，遗余佩兮澧浦。将你赠的玉佩放在澧水岸边。采芳洲兮杜若，采来香草装饰这芬芳的洲渎，将以遗兮下女。这一切都是你留给我的信物。时不可兮再得，难道那往昔的时光不可再得，聊逍遥兮容与。暂且慢步洲头排除心中烦恼。赏析在屈原根据楚地民间祭神曲创作的九歌中，湘君和湘夫人是两首最富生活情趣和浪漫色彩的作品。人们在欣赏和赞叹它们独特的南国风情和动人的艺术魅力时，却对湘君和湘夫人的实际身份迷惑不解，进行了长时间的探讨、争论。从有关的先秦古籍来看，尽管楚辞的远游篇中提到“二女”和“湘灵”，山海经中山经中说“洞庭之山帝之二女居之，是常游于江渊”，但都没有像后来的注释把湘君指为南巡道死的舜、把湘夫人说成追赶他而溺死湘水的二妃娥皇和女英的迹象。最初把两者结合在一起的是史记秦始皇本纪。书中记载秦始皇巡游至湘山(即今洞庭湖君山)时，“上问博士曰:湘君何神？博士对曰:闻之，尧女，舜之妻，而葬此。”后来刘向的列女传也说舜“二妃死于江、湘之间，俗谓之湘君”。这就明确指出湘君就是舜的两个妃子，但未涉及湘夫人。到了东汉王逸为楚辞作注时，鉴于二妃是女性，只适合于湘夫人，于是便把湘君另指为“湘水之神”。对于这种解释。唐代韩愈并不满意，他在黄陵庙碑中认为湘君是娥皇，因为是正妃故得称“君”；女英是次妃，因称“夫人”。以后宋代洪兴祖楚辞补注、朱熹楚辞集注皆从其说。这一说法的优点在于把湘君和湘夫人分属两人，虽避免了以湘夫人兼指二妃的麻烦，但仍没有解决两人的性别差异，从而为诠释作品中显而易见的男女相恋之情留下了困难。有鉴于此，明末清初的王夫之在楚辞通释中采取了比较通脱的说法，即把湘君说成是湘水之神，把湘夫人说成是他的配偶，而不再拘泥于按舜与二妃的传说一一指实。应该说这样的理解，比较符合作品的实际，因而也比较可取。虽然舜和二妃的传说给探求湘君和湘夫人的本事带来了不少难以自圆的穿凿附会，但是如果把这一传说在屈原创作九歌时已广为流传、传说与创作的地域完全吻合、湘夫人中又有“帝子”的字样很容易使人联想到尧之二女等等因素考虑在内，则传说的某些因子如舜与二妃飘泊山川、会合无由等，为作品所借鉴和吸取也并不是没有可能的。因此既注意到传说对作品可能产生的影响，又不拘泥于传说的具体人事，应该成为我们理解和欣赏这两篇作品的基点。由此出发，不难看出作为祭神歌曲，湘君和湘夫人是一个前后相连的整体，甚至可以看作同一乐章的两个部分。这不仅是因为两篇作品都以“北渚”相同的地点暗中衔接，而且还由于它们的末段，内容和语意几乎完全相同，以至被认为是祭祀时歌咏者的合唱(见姜亮夫屈原赋校注)。这首湘君由女神的扮演者演唱，表达了因男神未能如约前来而产生的失望、怀疑、哀伤、埋怨的复杂感情。第一段写美丽的湘夫人在作了一番精心的打扮后，乘着小船兴致勃勃地来到与湘君约会的地点，可是却不见湘君前来，于是在失望中抑郁地吹起了哀怨的排箫。首二句以问句出之，一上来就用心中的怀疑揭出爱而不见的事实，为整首歌的抒情作了明确的铺垫。以下二句说为了这次约会，她曾进行了认真的准备，把本已姣好的姿容修饰得恰到好处，然后才驾舟而来。这说明她十分看重这个见面的机会，内心对湘君充满了爱恋。正是在这种心理的支配下，她甚至虔诚地祈祷沅湘的江水风平浪静，能使湘君顺利赴约。然而久望之下，仍不见他到来，便只能吹起声声幽咽的排箫，来倾吐对湘君的无限思念。这一段的描述，让人看到了一幅望断秋水的佳人图。第二段接写湘君久等不至，湘夫人便驾着轻舟向北往洞庭湖去寻找，忙碌地奔波在湖中江岸，结果依然不见湘君的踪影。作品在这里把对湘夫人四出寻找的行程和她的内心感受紧密地结合在一起。你看她先是驾着龙舟北出湘浦，转道洞庭，这时她显然对找到湘君满怀希望；可是除了眼前浩渺的湖水和装饰精美的小船外，一无所见；她失望之余仍不甘心，于是放眼远眺涔阳，企盼能捕捉到湘君的行踪；然而这一切都毫无结果，她的心灵便再次横越大江，遍寻沅湘一带的广大水域，最终还是没有找到。如此深情的企盼和如此执着的追求，使得身边的侍女也为她叹息起来。正是旁人的这种叹息，深深地触动和刺激了湘夫人，把翻滚在她内心的感情波澜一下子推向了汹涌澎湃的高潮，使她止不住泪水纵横，一想起湘君的失约就心中阵阵作痛。第三段主要是失望至极的怨恨之情的直接宣泄。首二句写湘夫人经多方努力不见湘君之后，仍漫无目的地泛舟水中，那如划开冰雪的船桨虽然还在摆动，但给人的感觉只是她行动的迟缓沉重和机械重复。接着用在水中摘采薜荔和树上收取芙蓉的比喻，既总结以上追求不过是一种徒劳而已，同时也为后面对湘君“心不同”、“恩不甚”、“交不忠”、“期不信”的一连串斥责和埋怨起兴。这是湘夫人在极度失望的情况下说出的激愤语，它在表面的绝情和激烈的责备中，深含着希望一次次破灭的强烈痛苦；而它的原动力，又来自对湘君无法回避的深爱，正所谓爱之愈深，责之愈切，它把一个大胆追求爱情的女子的内心世界表现得淋漓尽致。第四段可分二层。前四句为第一层，补叙出湘夫人浮湖横江从早到晚的时间，并再次强调当她兜了一大圈仍回到约会地“北渚”时，还是没有见到湘君。从“捐余玦”至末为第二层，也是整首乐曲的卒章。把玉环抛入江中。把佩饰留在岸边，是湘夫人在过激情绪支配下做出的过激行动。以常理推测，这玉环和佩饰当是湘君给她的定情之物。现在他既然不念前情，一再失约，那么这些代表爱慕和忠贞的信物又留着何用，不如把它们抛弃算了。这一举动，也是上述四个“不”字的必然结果。读到这里，人们同情惋惜之余，还不免多有遗憾。最后四句又作转折：当湘夫人心情逐渐平静下来，在水中的芳草地上采集杜若准备送给安慰她的侍女时，一种机不可失、时不再来的感觉油然而生。于是她决定“风物长宜放眼量”，从长计议，松弛一下绷紧的心弦，慢慢等待。这样的结尾使整个故事和全首歌曲都余音袅袅，并与篇首的疑问遥相呼应，同样给人留下了想像的悬念.丰乐亭游春三首欧阳修朗诵：焦晃绿树交加山鸟啼，晴风荡漾落花飞。鸟歌花舞太守醉，明日酒醒春已归。春云淡淡日辉辉，草惹行襟絮拂衣。行到亭前逢太守，篮舆酩酊插花归。红树青山日欲斜，长郊草色绿无涯。游人不管春将尽，来往亭前踏落花。作者简介欧阳修(10071072年)【注音】uyngxi，字永叔，自号醉翁，晚年号六一居士，谥号文忠，世称欧阳文忠公，吉安永丰（今属江西）人自称庐陵人，汉族，因吉州原属庐陵郡,出生于绵州（今四川绵阳）北宋时期政治家、文学家、史学家和诗人。与唐韩愈，柳宗元，宋王安石，苏洵，苏轼，苏辙，曾巩合称“唐宋八大家”。说明诗人于庆历六年（1046）在滁州郊外山林间造了丰乐亭，第二年三月写了丰乐亭游春三首绝句，这里选一首。诗中描写诗人尽情春游，如醉如痴，简直不肯放过春天的样子。可以说，这是画眉鸟诗中“自在啼”的一个非常形象化的注脚。绿树交加山鸟啼，晴风荡漾落花飞。鸟歌花舞太守醉，明日酒醒春已归。春云淡淡日辉辉，草惹行襟絮拂衣。行到亭前逢太守，篮舆酩酊插花归。丰乐亭游春欧阳修红树青山日欲斜，长郊草色绿无涯。游人不管春将老，来往亭前踏落花。解释丰乐亭-位于滁州西南，背依丰山，下临幽谷泉，景色幽雅秀丽。长郊-广阔的郊野。绿无涯-绿色一望无际。春将老-春天快要过去了。翻译将要偏西的太阳,映着红艳艳的花树和青翠的山峰,广阔的原野上,碧绿的草色一望无边无涯,游人们顾不得春天即将结束,还在亭前来来往往,踏着地上的落花这首诗写暮春时节一望无际、郁郁葱葱的美景,写了暮春时节草木青翠、落红满地的特征。表达了游人对此怀着喜爱和恋恋不舍的感情诗离不开景物的描写，诗歌的意境是通过景物来表现的。因此，要体味一首诗的意境，可从诗中描写的景物着手。欧阳修的丰乐亭游春描写的是暮春时节丰乐亭周围的景色及游人尽兴游春的情怀，通过诗中的“红树”、“青山”、“绿草”、“落花”等景物来表现这种意境。此篇写惜春之情。美好的春天即将过去，丰乐亭边落花满地。到了红日西斜时，游人们还依依不舍，在亭前盘桓，欣赏着暮春景色。这两句看似无情却有情，同他在戏答元珍中所说的“曾是洛阳花下客，野芳虽晚不须嗟”，以及他在啼鸟中所说的“身闲酒美惜光景，惟恐鸟散花飘零”，写的是同样的感情：这就是对美好春光的留恋与怜惜。东大学任教。1926年底返沪后主持创造社出版部工作，主编创造月刊、洪水半月刊，发表了小说沦、戏剧论等大量文艺论著。1928年加入太阳社，并在鲁迅支持下，主编大众文艺。1930年3月，中国左翼作家联盟成立，为发起人之一。12月，小说迟桂花发表。1933年4月移居杭州后，写了大量山水游记和诗词。1936年任福建省府参议。1938年，赴武汉参加军委会政治部第三厅的抗日宣传工作，并在中华全国文艺界抗敌协会成立大会上当选为常务理事。1938年12月至新加坡，主编星洲日报等报