T细胞免疫功能检测平台的建立和应用.ppt

T细胞免疫功能检测平细胞免疫功能检测平台的建立与临床应用台的建立与临床应用北京协和医院感染内科北京协和医院感染内科.T细胞免疫功能与感染细胞免疫功能与感染n nT细胞免疫功能的抗感染作用细胞免疫功能的抗感染作用 正常人的免疫功能正常人的免疫功能正常人的免疫功能正常人的免疫功能 T T细胞免疫的抗感染作用细胞免疫的抗感染作用细胞免疫的抗感染作用细胞免疫的抗感染作用n nT细胞免疫功能的测定细胞免疫功能的测定 T T细胞亚群细胞亚群细胞亚群细胞亚群 T T细胞功能细胞功能细胞功能细胞功能n nT细胞免疫功能测定的临床意义细胞免疫功能测定的临床意义.机体的免疫系统机体的免疫系统n n非特异免疫非特异免疫 皮肤粘膜，吞噬细胞，皮肤粘膜，吞噬细胞，皮肤粘膜，吞噬细胞，皮肤粘膜，吞噬细胞，NKNK细胞，细胞，细胞，细胞，补体，正常菌群补体，正常菌群补体，正常菌群补体，正常菌群n n特异性免疫特异性免疫 细胞免疫：细胞免疫：细胞免疫：细胞免疫：CD4+CD4+细胞，细胞，细胞，细胞，CD8+CD8+细细细细胞胞胞胞 体液免疫：体液免疫：体液免疫：体液免疫：BB细胞细胞细胞细胞.机体的免疫系统机体的免疫系统CD4细胞细胞非特异性免疫特异性免疫NK细胞，吞噬细胞B细胞CD8细胞.CD4+细胞的免疫中枢指挥功能细胞的免疫中枢指挥功能.CD4+细胞的免疫中枢指挥功能细胞的免疫中枢指挥功能.CD4+细胞的产生和分群细胞的产生和分群记忆记忆 CD4胸腺胸腺纯真纯真 CD4Net Naive CD4#5x107/天天抗原抗原.纯真 纯真和记忆纯真和记忆/效应效应4 4细胞亚群的产生细胞亚群的产生记忆效应凋亡胸腺效应效应效应.纯真纯真 CD4和记忆和记忆CD4细胞细胞.纯真纯真/记忆记忆CD+细胞分泌不同的介素细胞分泌不同的介素.细胞免疫功能的抗感染作用细胞免疫功能的抗感染作用n n感染发生的两个基本要素：病原体和机体免疫功能感染发生的两个基本要素：病原体和机体免疫功能感染发生的两个基本要素：病原体和机体免疫功能感染发生的两个基本要素：病原体和机体免疫功能n n免疫功能对疾病转归的影响：免疫功能对疾病转归的影响：免疫功能对疾病转归的影响：免疫功能对疾病转归的影响：1.1.1.1.对免疫功能正常的人不起致病作用的病原体，在免疫功能低下的人身上可对免疫功能正常的人不起致病作用的病原体，在免疫功能低下的人身上可对免疫功能正常的人不起致病作用的病原体，在免疫功能低下的人身上可对免疫功能正常的人不起致病作用的病原体，在免疫功能低下的人身上可发生致命性的感染；发生致命性的感染；发生致命性的感染；发生致命性的感染；2.2.2.2.免疫功能正常的人发生某种感染后可很快恢复，而在免疫功能紊乱的人则免疫功能正常的人发生某种感染后可很快恢复，而在免疫功能紊乱的人则免疫功能正常的人发生某种感染后可很快恢复，而在免疫功能紊乱的人则免疫功能正常的人发生某种感染后可很快恢复，而在免疫功能紊乱的人则成为慢性状态；成为慢性状态；成为慢性状态；成为慢性状态；3.3.3.3.对同样的病原体所导致的感染，给予同样的抗感染治疗，转归完全不一样对同样的病原体所导致的感染，给予同样的抗感染治疗，转归完全不一样对同样的病原体所导致的感染，给予同样的抗感染治疗，转归完全不一样对同样的病原体所导致的感染，给予同样的抗感染治疗，转归完全不一样.细胞免疫功能的抗感染作用细胞免疫功能的抗感染作用为什么？为什么？乙肝病毒感染：乙肝病毒感染：有人为乙肝病毒携带者,也有人成为慢性乙肝病人？HPV感染：感染：多数人表现为无症状的HPV潜伏感染者，少数人表现为复发性HPV CMV感染感染:90%的正常人隐性感染终生带病毒，但免疫功能低下时可致死？.n n HIV感染的自然史感染的自然史 CD4CD4细胞细胞细胞细胞(cell/mm3(cell/mm3）800800400400 急性感染期急性感染期 无症状期无症状期 艾滋病前期和艾滋病期艾滋病前期和艾滋病期 CD4 病毒载量病毒载量抗抗HIV 的的CTLHIV抗体抗体.HIV感染者的三种临床转归感染者的三种临床转归VirusCD4CD8 a aHIVCD4CD4CD8CD8 a aHIVVirusVirusStandard 8 yFast:4-5 y:(2%)(CCR genes,HLA B35Slow:10 y:(2%),CCR genes,HLA B57.免疫功能与机会性感染相关性 years200CD4 counts白念菌白念菌Zona卡波济肉瘤卡波济肉瘤淋巴瘤淋巴瘤PCP弓型体弓型体CMVMAIC48艾滋病期艾滋病期HIV load210.细胞免疫功能的抗感染作用细胞免疫功能的抗感染作用不重视机体免疫功能的后果n n化疗药物的滥用化疗药物的滥用n n耐药菌的产生耐药菌的产生n n二重感染的发生二重感染的发生n n进一步损害免疫功能进一步损害免疫功能.细胞免疫功能与感染细胞免疫功能与感染细胞免疫功能的抗感染作用细胞免疫功能的抗感染作用 正常人的免疫功能正常人的免疫功能 细胞免疫的抗感染作用细胞免疫的抗感染作用T细胞免疫功能的测定细胞免疫功能的测定 T细胞亚群细胞亚群 T细胞功能细胞功能细胞免疫功能测定的临床意义细胞免疫功能测定的临床意义.细胞免疫功能与感染细胞免疫功能与感染免疫功能测定方法免疫功能测定方法n n体内体内：PPD PPD试验？试验？n n体外体外：体液免疫：体液免疫：B B细胞数量，免疫球蛋白定量细胞数量，免疫球蛋白定量 细胞免疫：细胞免疫：T细胞亚群的数量和功能细胞亚群的数量和功能 （流式细胞仪，（流式细胞仪，ELISAELISA，ELISPOTELISPOT）.T细胞免疫功能的测定细胞免疫功能的测定T细胞功能细胞功能（细胞介素，增殖反应）（细胞介素，增殖反应）功能亚群（功能亚群（CD28）激活亚群（激活亚群（CD38、HLA-Dr）纯真亚群和记忆亚群纯真亚群和记忆亚群凋亡亚群凋亡亚群,Treg（T细胞、细胞、CD4、CD8、B、NK）.A cytometer looks like an easy-to-use machine but look inside:Its a complex laser machine!.PMTPMTPMTPMT 4DichroicFiltersBandpassFiltersFlow Cytometry PrincipleLaser 1234Flow cell.T细胞免疫功能的测定细胞免疫功能的测定T细胞功能细胞功能（细胞介素，增殖反应）（细胞介素，增殖反应）功能亚群（功能亚群（CD28）激活亚群（激活亚群（CD38、HLA-Dr）纯真亚群和记忆亚群纯真亚群和记忆亚群凋亡亚群凋亡亚群,Treg（T细胞、细胞、CD4、CD8、B、NK）.淋巴细胞免疫表型检测指标B B淋巴细胞（淋巴细胞（CD19+CD19+）反映机体体液免疫功能状态反映机体体液免疫功能状态 自然杀伤细胞（自然杀伤细胞（CD3-CD3-CD16/56+CD16/56+）反映机体天然免疫功能状态反映机体天然免疫功能状态 辅助性及杀伤性辅助性及杀伤性T T淋巴细胞淋巴细胞（CD3+CD4+/CD8+CD3+CD4+/CD8+）反映机体细胞免疫功能状态反映机体细胞免疫功能状态 T T淋巴细胞纯真和记忆亚群淋巴细胞纯真和记忆亚群（CD4+CD45RA+62L+/CD45RCD4+CD45RA+62L+/CD45RO+O+）判断判断CD3+CD4+CD3+CD4+降低的重要指标降低的重要指标T T淋巴细胞的激活亚群淋巴细胞的激活亚群（CD4+/CD8+CD38+/HLA-CD4+/CD8+CD38+/HLA-DR+DR+）评价细胞的激活状态。评价细胞的激活状态。T T淋巴细胞的功能亚群淋巴细胞的功能亚群（CD4+/CD8+CD28+CD4+/CD8+CD28+）衡量衡量T T淋巴细胞功能的重要指标。淋巴细胞功能的重要指标。.不同年龄组正常细胞亚群的建立淋巴细胞表型淋巴细胞表型青年青年(18-40y,N=57)(18-40y,N=57)中年中年(41-60,N=45)(41-60,N=45)老年老年(大于大于61y,N=52)61y,N=52)B B淋巴细胞淋巴细胞6.430.66.430.66.430.66.430.61045711045711045711045714.219.74.219.74.219.74.219.7775667756677566775662.424.32.424.32.424.32.424.339544395443954439544自然杀伤细胞自然杀伤细胞4.235.64.235.64.235.64.235.6968729687296872968723.540.43.540.43.540.43.540.4539855398553985539854.149.84.149.84.149.84.149.8711340711340711340711340辅助性辅助性T T淋巴细淋巴细胞胞25.164.25.164.25.164.25.164.0 0 0 0442164544216454421645442164519.854.19.854.19.854.19.854.0 0 0 02591942591942591942591946 6 6 619.655.19.655.19.655.19.655.2 2 2 22911730291173029117302911730杀伤性杀伤性T T淋巴细淋巴细胞胞16.747.16.747.16.747.16.747.2 2 2 2321116632111663211166321116615.942.15.942.15.942.15.942.3 3 3 32088252088252088252088258.244.48.244.48.244.48.244.41731114173111417311141731114T T淋巴细胞纯真淋巴细胞纯真亚群亚群17.461.17.461.17.461.17.461.5 5 5 51175861175861175861175865.268.55.268.55.268.55.268.5407164071640716407162.262.72.262.72.262.72.262.725688256882568825688CD4/CD8CD4/CD80.573.280.573.280.553.300.553.300.625.970.625.97.细胞免疫功能测定方法细胞免疫功能测定方法T细胞功能的测定细胞功能的测定n nT细胞增殖功能细胞增殖功能 同位素同位素H3H3掺入试验掺入试验 BrdU BrdU，Ki67Ki67 CFSU CFSUn nT细胞毒试验（细胞毒试验（CTL）和细胞介素测定）和细胞介素测定 同位素同位素Cr51Cr51 四联体四联体 ELISA ELISA 流式细胞仪流式细胞仪 ELISPOT ELISPOT.ELISPOT 方法方法ELISPOTELISPOT方法是目前国际上广泛应用的较新的体外测定特异性抗体方法是目前国际上广泛应用的较新的体外测定特异性抗体分分泌细胞和细胞因子分泌细胞的方法。该方法可在单细胞水平检测淋泌细胞和细胞因子分泌细胞的方法。该方法可在单细胞水平检测淋巴细胞对特异性抗原的反应能力及计数特异性抗原刺激下细胞因子巴细胞对特异性抗原的反应能力及计数特异性抗原刺激下细胞因子分泌细胞的频数。分泌细胞的频数。优点：优点：敏感敏感敏感敏感-能检测产生细胞因子频率极低的细胞，灵敏度高达能检测产生细胞因子频率极低的细胞，灵敏度高达 1/1000000 1/1000000。特异特异特异特异 直观直观直观直观-可直接在显微镜下人工计数斑点或通过可直接在显微镜下人工计数斑点或通过ELISPOTELISPOT分分 析系统对斑点进行计数，析系统对斑点进行计数，1 1 个斑点代表个斑点代表 1 1 个特异个特异性性 抗体分泌细胞或细胞因子分泌细胞。抗体分泌细胞或细胞因子分泌细胞。.ELISPOT 原理原理-PBMC-刺激原刺激原孵育孵育16 18h或或4048hIFN 抗体抗体BSPA酶和底物酶和底物斑点斑点!.ELISpot 结果结果阴性对照阴性对照阴性对照阴性对照阳性对照阳性对照阳性对照阳性对照样本孔样本孔样本孔样本孔样本孔样本孔样本孔样本孔图中的每个斑点代表一个能分泌IFN-的抗原特异性CD4+T细胞或CTL.T细胞免疫功能与感染细胞免疫功能与感染n nT细胞免疫功能的抗感染作用细胞免疫功能的抗感染作用 正常人的免疫功能正常人的免疫功能正常人的免疫功能正常人的免疫功能 T T细胞免疫的抗感染作用细胞免疫的抗感染作用细胞免疫的抗感染作用细胞免疫的抗感染作用n nT细胞免疫功能的测定细胞免疫功能的测定 T T细胞亚群细胞亚群细胞亚群细胞亚群 T T细胞功能细胞功能细胞功能细胞功能n nT细胞免疫功能测定的临床意义细胞免疫功能测定的临床意义.T细胞免疫功能与感染细胞免疫功能与感染细胞免疫功能测定的临床意义细胞免疫功能测定的临床意义n nHIV感染和艾滋病感染和艾滋病n n其它各种感染性疾病其它各种感染性疾病-病毒感染：病毒感染：病毒感染：病毒感染：SARS,HBVSARS,HBV，HCVHCV，EBVEBV，CMV CMV，HFRS,HFMDHFRS,HFMD-结核病，真菌感染。结核病，真菌感染。结核病，真菌感染。结核病，真菌感染。n n肿瘤和化疗病人的免疫功能监测肿瘤和化疗病人的免疫功能监测n n器官移植病人的免疫监测器官移植病人的免疫监测n n自身免疫病和过敏性疾病自身免疫病和过敏性疾病.细胞免疫功能与感染细胞免疫功能与感染细胞免疫功能测定的临床意义细胞免疫功能测定的临床意义中国中国HIV/AIDS的免疫病的免疫病理理改变和免疫重建改变和免疫重建.艾滋病的主要免疫病理改变艾滋病的主要免疫病理改变n nCD4+T 细胞数的减少；细胞数的减少；n nCD4+T 功能的减低功能的减低;n n异常的细胞免疫激活。异常的细胞免疫激活。.n n HIV感染的自然史感染的自然史 CD4CD4细胞细胞细胞细胞(cell/mm3(cell/mm3）800800400400 急性感染期急性感染期 无症状期无症状期 艾滋病前期和艾滋病期艾滋病前期和艾滋病期 CD4 病毒载量病毒载量抗抗HIV 的的CTLHIV抗体抗体.HIV/AIDS 患者淋巴细胞亚群与正常对照比较患者淋巴细胞亚群与正常对照比较HIV/AIDSHIV/AIDSHIV/AIDSHIV/AIDS患者患者患者患者n=263n=263n=263n=263正常对照正常对照正常对照正常对照n=57n=57n=57n=57B B B B细胞计数细胞计数细胞计数细胞计数109(159,71)*109(159,71)*109(159,71)*109(159,71)*261(294,207)261(294,207)261(294,207)261(294,207)NKNKNKNK细胞计数细胞计数细胞计数细胞计数110(195,61)*110(195,61)*110(195,61)*110(195,61)*339(471,234)339(471,234)339(471,234)339(471,234)CD4+TCD4+TCD4+TCD4+T计数计数计数计数205(348,63)*205(348,63)*205(348,63)*205(348,63)*787(1058,615)787(1058,615)787(1058,615)787(1058,615)纯真纯真纯真纯真CD4+TCD4+TCD4+TCD4+T计数计数计数计数29(86,6)*29(86,6)*29(86,6)*29(86,6)*328(382,256)328(382,256)328(382,256)328(382,256)纯真纯真纯真纯真CD4+TCD4+TCD4+TCD4+T比例比例比例比例18.5(32.0,6.5)*18.5(32.0,6.5)*18.5(32.0,6.5)*18.5(32.0,6.5)*35.4(45.5,30.0)35.4(45.5,30.0)35.4(45.5,30.0)35.4(45.5,30.0)记忆记忆记忆记忆CD4+TCD4+TCD4+TCD4+T计数计数计数计数136(232,44)*136(232,44)*136(232,44)*136(232,44)*453(538,360)453(538,360)453(538,360)453(538,360)记忆记忆记忆记忆CD4+TCD4+TCD4+TCD4+T比例比例比例比例72.6(83.2,60.1)*72.6(83.2,60.1)*72.6(83.2,60.1)*72.6(83.2,60.1)*56.0(66.3,47.7)56.0(66.3,47.7)56.0(66.3,47.7)56.0(66.3,47.7)CD4+CD28+CD4+CD28+CD4+CD28+CD4+CD28+功能亚群比例功能亚群比例功能亚群比例功能亚群比例86.1(94.0,68.3)*86.1(94.0,68.3)*86.1(94.0,68.3)*86.1(94.0,68.3)*95.7(97.6,91.0)95.7(97.6,91.0)95.7(97.6,91.0)95.7(97.6,91.0)CD8+TCD8+TCD8+TCD8+T计数计数计数计数652(914,422)652(914,422)652(914,422)652(914,422)538(642,480)538(642,480)538(642,480)538(642,480)CD8+CD38+CD8+CD38+CD8+CD38+CD8+CD38+激活亚群比例激活亚群比例激活亚群比例激活亚群比例84.3(92.7,69.0)*84.3(92.7,69.0)*84.3(92.7,69.0)*84.3(92.7,69.0)*42.6(50.6,36.1)42.6(50.6,36.1)42.6(50.6,36.1)42.6(50.6,36.1)（计数：个（计数：个/mm3，比例：，比例：%，数值以中位数（上四分位数，下四分位数）表示），数值以中位数（上四分位数，下四分位数）表示）*与正常对照组相比存在显著差异与正常对照组相比存在显著差异P P0.0010.001。与正常对照组相比存在显著差异与正常对照组相比存在显著差异P P=0.021=0.021。.早中晚早中晚3组组患者淋巴细胞亚群的比较患者淋巴细胞亚群的比较分组分组分组分组组组组组n=131n=131n=131n=131组组组组n=66n=66n=66n=66组组组组n=66n=66n=66n=66CD4+TCD4+TCD4+TCD4+T细胞计数细胞计数细胞计数细胞计数63(134,20)63(134,20)63(134,20)63(134,20)279(317,246)279(317,246)279(317,246)279(317,246)493(627,413)493(627,413)493(627,413)493(627,413)病毒载量病毒载量病毒载量病毒载量4.88(5.41,4.46)4.88(5.41,4.46)4.88(5.41,4.46)4.88(5.41,4.46)4.3(4.71,3.69)4.3(4.71,3.69)4.3(4.71,3.69)4.3(4.71,3.69)3.49(4.22,2.73)3.49(4.22,2.73)3.49(4.22,2.73)3.49(4.22,2.73)B B B B细胞计数细胞计数细胞计数细胞计数84(118,51)*84(118,51)*84(118,51)*84(118,51)*130(171,91)130(171,91)130(171,91)130(171,91)161(216,123)161(216,123)161(216,123)161(216,123)纯真纯真纯真纯真CD4+TCD4+TCD4+TCD4+T比例比例比例比例11.5(25.5,4.7)*11.5(25.5,4.7)*11.5(25.5,4.7)*11.5(25.5,4.7)*26.3(37.4,15)26.3(37.4,15)26.3(37.4,15)26.3(37.4,15)25.4(40.2,14.1)25.4(40.2,14.1)25.4(40.2,14.1)25.4(40.2,14.1)记忆记忆记忆记忆CD4+TCD4+TCD4+TCD4+T比例比例比例比例77.8(88.3,66.7)*77.8(88.3,66.7)*77.8(88.3,66.7)*77.8(88.3,66.7)*67.2(79.1,58)67.2(79.1,58)67.2(79.1,58)67.2(79.1,58)64.9(77.2,54.1)64.9(77.2,54.1)64.9(77.2,54.1)64.9(77.2,54.1)CD4+CD28+T/CD4+TCD4+CD28+T/CD4+TCD4+CD28+T/CD4+TCD4+CD28+T/CD4+T72.7(89.3,52.8)*72.7(89.3,52.8)*72.7(89.3,52.8)*72.7(89.3,52.8)*92.9(95.8,85.1)92.9(95.8,85.1)92.9(95.8,85.1)92.9(95.8,85.1)91.3(94.9,82.7)91.3(94.9,82.7)91.3(94.9,82.7)91.3(94.9,82.7)CD8+CD38+T/CD8+TCD8+CD38+T/CD8+TCD8+CD38+T/CD8+TCD8+CD38+T/CD8+T90.2(94.7,80.1)*90.2(94.7,80.1)*90.2(94.7,80.1)*90.2(94.7,80.1)*78.9(86.7,66.4)78.9(86.7,66.4)78.9(86.7,66.4)78.9(86.7,66.4)69(84.9,61.5)69(84.9,61.5)69(84.9,61.5)69(84.9,61.5)组与组与、组相比组相比P P0.001,0.001,组与组与组相比组相比P P0.0010.001。*组与组与、两组均存在显著差异两组均存在显著差异P P0.001,0.001,、组两组无显著差异。组两组无显著差异。（计数：个（计数：个/mm3，比例：，比例：%，数值以中位数（上四分位数，下四分位数）表示），数值以中位数（上四分位数，下四分位数）表示）.HIV/AIDS的免疫病理改变的免疫病理改变选择性纯真选择性纯真T4细胞的减少细胞的减少正常人正常人HIV感染者感染者AIDS病人病人.HIV/AIDS的免疫病理改变的免疫病理改变T4细胞辅刺激信号受体的表达细胞辅刺激信号受体的表达减少减少正常人HIV感染者AIDS病人.CD28TCD28T细胞辅刺激信号受体细胞辅刺激信号受体.HIV/AIDS的免疫病理改变的免疫病理改变异常的异常的T细胞免疫激活细胞免疫激活AIDS病人HIV感染者正常人.中国艾滋病病人的免疫改变特点中国艾滋病病人的免疫改变特点n n艾滋病病人有选择性的纯真艾滋病病人有选择性的纯真艾滋病病人有选择性的纯真艾滋病病人有选择性的纯真 T4 T4细胞减少细胞减少细胞减少细胞减少;n nCD4+CD28+CD4+CD28+是细胞免疫功能的标记指标是细胞免疫功能的标记指标是细胞免疫功能的标记指标是细胞免疫功能的标记指标;n nCD8+CD38+CD8+CD38+CD8+CD38+CD8+CD38+亚群是疾病进展和病毒复制的预测指标。亚群是疾病进展和病毒复制的预测指标。亚群是疾病进展和病毒复制的预测指标。亚群是疾病进展和病毒复制的预测指标。.n nHIVHIV感染当感染当感染当感染当CD4+TCD4+T细胞计数低于细胞计数低于细胞计数低于细胞计数低于200200个个个个/mm/mm3 3时时时时:CD28CD28表达下降较感染早中期更为严重表达下降较感染早中期更为严重表达下降较感染早中期更为严重表达下降较感染早中期更为严重纯真纯真纯真纯真CD4+TCD4+T细胞减少的速率较感染早中期明显加快细胞减少的速率较感染早中期明显加快细胞减少的速率较感染早中期明显加快细胞减少的速率较感染早中期明显加快 异常的免疫激活更为严重异常的免疫激活更为严重异常的免疫激活更为严重异常的免疫激活更为严重.T细胞免疫功能检测在SARS诊治中的应用.T细胞检测对细胞检测对SARS诊断的意义诊断的意义n nSARS病人CD4+细胞(98%)和CD8+(80%)细胞同时减少；n n发生在发病一周内（有些发生在胸片改变之前）n nT细胞检测有助于SARS的早期诊断.细胞免疫功能与感染细胞免疫功能与感染细胞免疫功能测定的临床意义细胞免疫功能测定的临床意义其它病毒感染其它病毒感染结核病结核病真菌感染真菌感染.T细胞免疫功能与感染细胞免疫功能与感染细胞免疫功能测定的临床意义细胞免疫功能测定的临床意义n nHIV感染和艾滋病n n其它感染性疾病-病毒感染：病毒感染：病毒感染：病毒感染：HBVHBV，HCVHCV，EBVEBV，CMVCMV，HFMD,HFMD,HFRSHFRS-结核病，真菌感染。结核病，真菌感染。结核病，真菌感染。结核病，真菌感染。n n肿瘤和化疗病人的免疫功能监测肿瘤和化疗病人的免疫功能监测n n器官移植病人的免疫监测器官移植病人的免疫监测n n自身免疫病和过敏性疾病自身免疫病和过敏性疾病.诊断：诊断：HIVHIV.感谢亲观看此幻灯片，此课件部分内容来源于网络，感谢亲观看此幻灯片，此课件部分内容来源于网络，如有侵权请及时联系我们删除，谢谢配合！如有侵权请及时联系我们删除，谢谢配合！